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大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra,CD121)ELISA檢測試劑盒操作步驟說明

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2018-10-03 10:00 409閱讀次數(shù)

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大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra,CD121)ELISA檢測試劑盒操作步驟1、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100(臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37溫育1小時。3、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。4、每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100,加上覆膜,37溫育1小時。5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。6、每孔加底物溶液90,酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色(反應(yīng)時間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。7、每孔加終止溶液50,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra,CD121)ELISA檢測試劑盒注意事項1、試劑準(zhǔn)備:所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。2、加樣:加樣或加試劑時,**個孔與Z后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)**控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進行實驗。3、溫育:為防止樣品蒸發(fā),實驗時將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。4、洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響Z后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5、試劑配制:DetectionA及DetectionB在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配制使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請極ng確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差;請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。6、反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。7、底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。

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