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磺胺二甲嘧啶(SM2)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本文由 上??婆d商貿(mào)有限公司 整理匯編

2018-10-03 10:00 471閱讀次數(shù)

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1使用目的:本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中磺胺二甲嘧啶(SM2)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有磺胺二甲嘧啶(SM2)偶聯(lián)抗原,加入磺胺二甲嘧啶(SM2)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離磺胺二甲嘧啶(SM2)與微孔條上預(yù)包被的磺胺二甲嘧啶(SM2)偶聯(lián)抗原互相競爭抗磺胺二甲嘧啶(SM2)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進行檢測,吸光值與樣品中磺胺二甲嘧啶(SM2)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中磺胺二甲嘧啶(SM2)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的磺胺二甲嘧啶(SM2)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2磺胺二甲嘧啶(SM2)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗磺胺二甲嘧啶(SM2)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有磺胺二甲嘧啶(SM2),使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結(jié)果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果6.9混合試劑時應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1磺胺二甲嘧啶(SM2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(252℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?52℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始,請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10)、濃縮洗滌液(10)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的磺胺二甲嘧啶(SM2)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以磺胺二甲嘧啶(SM2)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),即為磺胺二甲嘧啶(SM2)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中磺胺二甲嘧啶(SM2)濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測定10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)磺胺嘧啶(SD或者SDZ)1**%磺胺惡唑(SMZ)63%磺胺噻唑(ST)195%磺胺甲基嘧啶(SM1)12%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.05ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。

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