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賽默飛極ng確修飾位點(diǎn)譜圖庫(kù)的建立與磷酸化 蛋白質(zhì)組的 DIA 解析

本文由 賽默飛色譜及質(zhì)譜 整理匯編

2018-08-10 10:58 663閱讀次數(shù)

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數(shù)據(jù)非依賴(lài)采集(Data-IndependentAcquisition,DIA)是當(dāng)前Z熱門(mén)的質(zhì)譜采集技術(shù)之一,它以非目標(biāo)的方式將質(zhì)量范圍分為若干窗口,依次并循環(huán)采集窗口內(nèi)所有母離子的二級(jí)碎片[1,2]。DIA與SRM類(lèi)似,也是基于子離子(transition)定量,相比傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組學(xué)定量方法具有更好的選擇性和更高的準(zhǔn)確度。然而,目前DIA在翻譯后修飾分析上仍有較大瓶頸。DIA依賴(lài)于DDA建立譜圖庫(kù),而DDA數(shù)據(jù)在搜庫(kù)鑒定時(shí),修飾位點(diǎn)定位錯(cuò)誤的概率較高,特別是磷酸化修飾發(fā)生在常見(jiàn)的S/T/Y上,若肽段含有2個(gè)或以上位置接近的S/T/Y,位點(diǎn)就容易找錯(cuò)。將含有錯(cuò)誤位點(diǎn)信息的鑒定結(jié)果作為譜圖庫(kù),就會(huì)導(dǎo)致翻譯后修飾DIA解析結(jié)果的不可靠[3]。因此,DIA尚難用于大規(guī)模的翻譯后修飾樣本分析。針對(duì)修飾位點(diǎn)的打分算法使修飾位點(diǎn)的定位更加準(zhǔn)確,ProteomeDiscoverer軟件中整合的phosphoRS/ptmRS模塊[4]和MaxQuant軟件的算法[5]都可以實(shí)現(xiàn)位點(diǎn)可信度(SiteProbability)的計(jì)算,從而獲得可靠的位點(diǎn)定位信息。本文基于上述軟件對(duì)翻譯后修飾DDA數(shù)據(jù)進(jìn)行位點(diǎn)可信度分析,篩選具有準(zhǔn)確位點(diǎn)定位的譜圖建立譜圖庫(kù),導(dǎo)入Skyline軟件,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)可靠的翻譯后修飾DIA解析。將該流程應(yīng)用于磷酸化樣本DIA數(shù)據(jù)分析,成功提取6401條高可信度的磷酸化肽段(Q<0.01),占譜圖庫(kù)肽段總數(shù)的98.4%,其中可用于準(zhǔn)確定量的肽段(CV<20%)占86.9%,有效解決了翻譯后修飾DIA定量的難題。產(chǎn)品關(guān)鍵詞:OrbitrapFusion質(zhì)譜儀

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