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犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)試劑盒ELISA試劑盒

本文由 北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-03 10:00 927閱讀次數(shù)

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本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書【試劑盒名稱】犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)定量檢測試劑盒(ELISA)【試劑盒用途】定量檢測犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)的含量?!緳z測原理】本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準品、待測樣本加入到預(yù)先包被犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標(biāo)準品和樣品的OD值,計算樣本中犬金屬蛋白酶組織YZ因子-1(TIMP-1)含量?!驹噭┖薪M成】1酶標(biāo)包被板12孔×8條7顯色劑A液6mL2標(biāo)準品0.3mL×6管8顯色劑B液6mL320倍濃縮洗滌液25mL9終止液6mL4樣本稀釋液6mL10說明書1份5特殊稀釋液6mL11封板膜2張6酶標(biāo)試劑6mL12密封袋1個備注:標(biāo)準品(1號→6號)濃度依次為:80、40、20、10、5、2.5μg/L.【需要而未提供的試劑和器材】1、37℃恒溫箱2、標(biāo)準規(guī)格酶標(biāo)儀3、精密移液器及一次性吸頭4、蒸餾水5、一次性試管6、吸水紙【操作步驟】1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3、加標(biāo)準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準品孔、2待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準品孔中加入標(biāo)準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對照孔不加。7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。9、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。12、計算:根據(jù)標(biāo)準品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。Z終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)?!緲颖疽蟆?、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的YZ劑。2、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。【注意事項】1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。3、建議所有的標(biāo)準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/L,超過此范圍,為標(biāo)準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(2.5-80μg/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本Z終濃度。6、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時間。7、為避免交叉污染,標(biāo)準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。3【操作程序總結(jié)】準備試劑,樣品和標(biāo)準品加入準備好的樣品和標(biāo)準品,37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀OD值計算【檢測范圍】2.5μg/L80μg/L【規(guī)格】96人份/盒【貯藏】2-8℃,避光防潮保存。【有效期】6個月

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