本文由 上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司 整理匯編

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更多資料

• 細胞成團和細胞出芽實驗

  細胞成團和細胞出芽實驗[詳細]

  2016-05-12 00:00

  期刊論文

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• 環(huán)形細胞侵襲實驗--使細胞侵襲的過程可視化

  環(huán)形細胞侵襲實驗--使細胞侵襲的過程可視化[詳細]

  2016-06-03 00:00

  課件

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• 細胞趨化實驗新方法（二）--實時觀察細胞動態(tài)

  細胞趨化實驗新方法（二）--實時觀察細胞動態(tài)[詳細]

  2016-04-26 00:00

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• 細胞趨化實驗新方法：可實時觀察細胞動態(tài)

  細胞趨化實驗新方法：可實時觀察細胞動態(tài)[詳細]

  2016-04-26 00:00

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• 基因芯片實驗中的細胞和組織制備規(guī)程

  基因芯片實驗中的細胞和組織制備規(guī)程[詳細]

  2014-07-17 00:00

  期刊論文

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• 細胞如何做好轉染實驗及提高實驗效率

  細胞如何做好轉染實驗及提高實驗效率①從健康細胞開始Ⅰ轉染實驗前，細胞解凍后傳代34次。這使得細胞從解凍過程中恢復過來，并恢復正常的生長速度。Ⅱ僅使用活性>90%的細胞使用臺盼藍染色可輕松測定細胞活性。Ⅲ定期傳代細胞，切勿讓細胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。如果讓細胞長到匯合狀態(tài)，可能會改變細胞的生長速度以及形態(tài)。a.請在匯合率達到90%之前對細胞進行傳代。我們建議您使用胰酶替代物Cellstripper試劑(Corning25-056-CI)使細胞脫壁。Cellstripper試劑可于室溫下存儲在通風櫥中。可通過添加過量的Cellstripper來跳過PBS洗滌的步驟，然后吸棄全部液體，僅留可覆蓋瓶子表面的液體。b.傳代條件取決于所用的細胞系。部分經(jīng)驗法則：對于快速生長的細胞，倍增時間為16小時(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。對于生長緩慢的細胞，倍增時間為36小時(如原代細胞)，按1：5的比例分瓶。Ⅳ保留凍存的細胞系，并定期解凍新細胞。傳代次數(shù)高(>3040)時，細胞的生長速度和形態(tài)會改變。②進行實驗之前，請先規(guī)劃您的實驗。務必要熟悉實驗方案、確定所需的材料量，并在開始實驗前確認所需的一切物品條件均已齊備。Ⅰ開始前，設計好鋪板路線圖，標注好每次處理或實驗條件。Ⅱ計算所需脂質體和DNA的儲備量，并確認有足夠的下列材料：TransfectGRO減血清培養(yǎng)基(Corning40-300-CVR)，Lipofectamine2000或LipofectamineLTX試劑，以及DNA(0.51g/L)。③轉染時，請使用優(yōu)質DNA。Ⅰ使用無內毒素的試劑盒和實驗方案制備DNA。Ⅱ通過測量OD260/280值來確定DNA純度，測得的OD值應介于1.71.9]之間。數(shù)值過高或過低均說明有雜質，不宜用于轉染實驗。Ⅲ在無DNA/RNA酶的水或TE中稀釋DNA。Ⅳ制備的工作濃度為0.51g/L。可用SpeedVac濃縮儀或透析過濾裝置(例如，MilliporeAmicon超濾管)來濃縮DNA。④轉染當天，將細胞鋪板。Ⅰ如果在轉染前一天或更早時間鋪板，轉染效率可能下降。Ⅱ轉染時，細胞密度保持在匯合率為7090%。Ⅲ轉染時，細胞密度影響轉染效率。為了簡化轉染優(yōu)化過程或節(jié)省時間，我們建議細胞鋪成2種不同的密度，以確保較高的轉染效率。Ⅳ細胞的鋪板和轉染可同時進行，或者通過反向轉染操作進行。反向轉染操作中，使用的細胞是正常/正向轉染的2.5倍以上。Ⅴ轉染復合物可以加到含抗生素和血清的培養(yǎng)基中，且不會影響轉染效率。[詳細]

  2024-10-03 20:15

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• 腫瘤細胞侵襲實驗原理 材料 步驟

  一原理Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以BDFalcon細胞小室上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，如一定濃度的LN、FN或小鼠3T3條件培養(yǎng)液或人睪丸上皮成纖維細胞培養(yǎng)液，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。細胞穿膜所用的時間與Martrigel的用量有關，選擇25ugMartrigell鋪膜，16小時后觀察結果較為合適。穿過濾膜的細胞多數(shù)粘附在濾膜下表面，可用棉簽將上表面的細胞拭去，然后用乙醇固定濾膜，PE染色，在光鏡下觀察統(tǒng)計穿過Martrigel的細胞數(shù)。另外用BDFalcon細胞小室也可進行重建基質膜侵襲分析，這一方法是在BDFalcon細胞小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel，加入細胞72h后觀察結果。值得注意的是，細胞在BDFalcon細胞小室中培養(yǎng)72小時后，有相當數(shù)量穿過濾膜的細胞不再粘附在濾膜下表面，而是脫落進人下腔溶液中．因此統(tǒng)計穿過基質膜的細胞數(shù)目時應把這部分細胞考慮在內。腫瘤細胞穿過重建基質膜的能力與它的體內侵襲轉移能力表現(xiàn)出較好的相關性，可以用重建基質膜模型初篩抗侵襲藥物。在上述分析中，如果不在膜上鋪Martrigel而直接將8um孔徑濾膜安放在侵襲腔室上下腔室之間，細胞通過變形運動穿過濾膜，用這種模型對分析細胞運動能力和藥物對細胞運動能力的影響。另外，在下室中加有LN或FN或在濾膜下表面鋪上LN或FN，可分析藥物對腫瘤細胞的趨化性或趨固性的影響。二材料1.Matrigel基質膠（BDBIOCOAT#356234），5ml，分裝成0.5ml/只10個EP管中；用時加入0.5ml的DMEM；Matrivgel在冰上維持液態(tài)，室溫時可迅速凝結成膠。使用前應從-20℃轉移至4℃待其自然溶化（如過夜放置），避免反復凍融。使用時需接觸Matrivgel的試管、移液吸頭等均應預冷于4℃；注意無菌操作；2.8ul，24孔配套細胞小室（BDFaclon#353097）；3.結晶紫染料溶液：結晶紫用甲醇配成0.5%的母液，使用濃度為0.1％，用PBS按1：4稀釋后即為染色液；4.33%醋酸；1.溶液配制：（1）.溶DMEM500ml；NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）母液0.1ml（5mg）+ddH2Oupto5ml；過濾消毒，-20℃保存。NE-DMEM（-6M）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（2）.NE+CGRP-DMEM（-6M，100ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlCGRP-儲存液50μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（3）.NE+IFN-DMEM（-6M，50ng）NE---A液（1μg/μl，1mg/ml）20.5μlIFN-γ（25ng/μl）25μlDMEMUPTO100ml過濾消毒，4℃保存（4）.低血清DMEM培養(yǎng)基（上室）（5）.20%FBS-DMEM培養(yǎng)基（下室）2.準備（1）.溶膠，4℃過夜（ThawMatrigelat4℃overnight.）（2）.室溫下基質膠易成凝膠，所以，步驟2和3種使用試管和槍頭要在試驗前-20C預冷。（Matrigeltendstoformgelveryquicklyatroomtemerature,therefore,pipetsandtipsusinginsteps2and3havetobechilledatpriortoexperiements.）3.包被基底膜（冰上操作）（1）.用無血清的冷細胞培養(yǎng)基DMEM稀釋Matrigel膠（10mg/mlto5mg/ml））（DiluteMatrigel（10mg/mlto5mg/ml）inserumfree-coldcellculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEM,etc）.）（2）.取100ul稀釋膠加到24-well細胞小室的上室中（Put100ulofthedilutedmatrigelintoupperchamberof24-welltranswell）（3）.37℃孵育transwell至少4-5h（Incubatethetranswellat37Catleast4to5hforgel領.）4.水化基底膜用無血清培養(yǎng)基輕洗凝膠（Gentlywashgelledmatrigelwithwarmedserumfree-culturemedia.）5.準備細胞懸液和小室（1）.消化法從細胞培養(yǎng)瓶中獲取細胞；（HarvestcellsfromtissuecultureflasksbyTrypsin/EDTA；）（2）.用培養(yǎng)基洗3遍（Washthecells3timeswithculturemedia（RPMI1640,EMEM,DMEMetc）containing1%FBS.）（3）.重選細胞，5×105cells/ml，1%FBS（Resuspendthecellsinmediacontaining1%FBSatadensityof5×105cells/ml.）（4）.上室加200ul細胞懸液（Put200ulofthecellsuspensionontothematrigel.）（5）.下室中加入600ul細胞培養(yǎng)基，含有5ug/mlfibronectin作為黏連亞族（lowerchamberofthetranswellisfilledwith600ulofculturemediacontaining,asanadhesivesubtrate.）6.孵育，37℃，20to24h（Incubateat37Cfor20to24h.7.染色和計數(shù)（1）.棉簽擦去上室上面的非侵襲細胞（Scrapeoffnoninvadedcellsonthetopofthetranswellwithacottonswab）（2）.移去transwells，倒置，風干（Removetranswellsfrom24-wellplatesandstainedwithDiff-Quicksolution.）（3）.24孔板中加入500l含0.1%結晶紫，將小室置于其中，使膜浸沒在培養(yǎng)基中，37℃30min后取出，PBS清洗。（4）.直徑上取4個視野，照相，計數(shù)。（5）.24孔板中加入500l33%醋酸，將小室置于其中，浸膜，振蕩10min，充分溶解。取出小室，24孔板于酶標儀上570nm測OD值，間接反應細胞數(shù)。小技巧：照相前一定要晾干，照相時將小室正置于載玻片上，在倒置顯微鏡下觀察、照相。經(jīng)濟、實用、方便。[詳細]

  2018-09-02 10:00

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• 細胞瓊脂克隆斑形成實驗方法

  細胞瓊脂克隆斑形成實驗方法1.取MDA-435-OL-Sec23a-GFP和MDA-435-OLLV3NC-GFP對數(shù)生長期的細胞制成單細胞懸液,使用血細胞計數(shù)板計數(shù)后備用。2.使用梯度稀釋法適當稀釋細胞懸液后,向6孔板的每個孔內分別加入含50個細胞的2mL細胞懸液,細胞懸液使用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液配制。每種細胞均設置3個6孔板復孔。3.12h后鏡下可觀察到6孔板內細胞已經(jīng)全部貼壁,此時將皿中培養(yǎng)液換成瓊脂濃度為0.2%的含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液,置于37°C培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。4.10d后鏡下可觀察到6孔板內出現(xiàn)集落生長的細胞克隆斑。此時棄去含瓊脂的培養(yǎng)液,用PBS輕輕潤洗2次,然后6孔板內每孔加入2mL冰甲醇固定30min,固定結束后使用PBS輕輕潤洗2次,然后使用結晶紫染色5min,再用PBS輕輕潤洗后室溫干燥。5.干燥完成后將6孔板移至顯微鏡下觀察計數(shù)每個孔內細胞克隆斑數(shù)量,超過50個細胞的克隆斑即可計數(shù)。根據(jù)細胞克隆斑形成率=(克隆數(shù)/接種細胞數(shù))×1**%來計算細胞體外克隆率。[詳細]

  2024-10-03 20:15

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• 細胞剪切力實驗--FOXC2和流體剪切力在后天淋巴管系統(tǒng)形

  細胞剪切力實驗--FOXC2和流體剪切力在后天淋巴管系統(tǒng)形[詳細]

  2016-05-16 00:00

  標準

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• 細胞系和細胞的培養(yǎng)

  細胞系和細胞的培養(yǎng)正常的人類初級黑色素細胞的FOM103，進行培養(yǎng)MCDB153，2％FBS，螯合10％FBS（Hyclone公司），1×100nmol/L的ET3（VWR），10毫微克/毫升SCF（R＆D系統(tǒng)），20pmol/L的霍亂毒素，4.5納克/毫升堿性成纖維細胞生長因子（Promega公司），和2mmol/L的升-谷氨酰胺（敏達）如前所述。人成纖維細胞FF2441和黑色素瘤細胞系UACC903，并輔以含10％FBS。綠色熒光蛋白（GFP）標簽UACC903細胞中產生了化學實驗室。WM35和Sbcl2，徑向生長階段黑色素細胞病變的細胞系中表達綠色熒光蛋白，維持在涂層％的中型企業(yè)。通道2至5人包皮角質細胞進行培養(yǎng)在EpiLifeE-介質中（不含血清的HEPES為基礎的介質）含1×HKGS，牛垂體提取物，牛胰島素，牛轉，和人EGF（級聯(lián)生物制劑）作為詳細的前面組成的。所有在本文中使用的細胞系被定期監(jiān)視表型（顯微鏡下檢查細胞的形態(tài)），通過比較的生長特性（SRB法的細胞系的倍增時間）和致瘤性的電位，由這些細胞注射到裸鼠測試，這些細胞的腫瘤形成能力。細胞特性或行為的評估機構提供的細胞株的原始股票。[詳細]

  2018-10-03 10:00

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• 細胞趨化實驗--EphA3+ MSCs細胞 對高濃度的IIIA4有負趨

  細胞趨化實驗--EphA3+ MSCs細胞 對高濃度的IIIA4有負趨[詳細]

  2016-05-24 00:00

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• 小鼠細胞間粘附分子1試劑盒實驗原理

  小鼠細胞間粘附分子1試劑盒實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠細胞間粘附分子1（ICAM-1）水平。用純化的小鼠細胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細胞間粘附分子1（ICAM-1），再與HRP標記的細胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞間粘附分子1（ICAM-1）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠細胞間粘附分子1（ICAM-1）濃度。小鼠細胞間粘附分子1試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶2酶標試劑3ml×1瓶8標準品（320ng/L）0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×4條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個小鼠細胞間粘附分子1試劑盒操作步驟標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液80ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液40ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液20ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液10ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。[詳細]

  2018-10-03 10:00

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• FH0050-人大細胞肺癌細胞；NCI-H460

  FH0050-人大細胞肺癌細胞；NCI-H460[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• FH0049-人大細胞肺癌細胞；NCI-H661

  FH0049-人大細胞肺癌細胞；NCI-H661[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• FH0645-人小細胞肺癌細胞；NCI-H196

  FH0645-人小細胞肺癌細胞；NCI-H196[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• FH0635-人小細胞肺癌細胞；NCI-H209

  FH0635-人小細胞肺癌細胞；NCI-H209[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• FH0037-人小細胞肺癌細胞；NCI-H446

  FH0037-人小細胞肺癌細胞；NCI-H446[詳細]

  2024-05-30 09:33

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• FH0977-人小細胞肺癌細胞；NCI-H2286

  FH0977-人小細胞肺癌細胞；NCI-H2286[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• FH0624-人小細胞肺癌細胞；SHP-77

  FH0624-人小細胞肺癌細胞；SHP-77[詳細]

  2024-05-30 09:33

  應用文章

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• 細胞的離心分離基礎和實例

  細胞的離心分離基礎和實例[詳細]

  2024-09-28 00:27

  實驗操作

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