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GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標(biāo)記試劑盒

本文由 上??茖W(xué)儀器有限公司 整理匯編

2018-11-18 10:00 770閱讀次數(shù)

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GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標(biāo)記試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標(biāo)記試劑是一種旨在使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依賴性蛋白激酶A(proteinkinaseK),標(biāo)記純化的目標(biāo)融合蛋白,成為敏感探針的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種GST融合的重組蛋白。其應(yīng)用于后續(xù)遠(yuǎn)西方雜交(FARWESTERNBLOT)印跡實驗和印跡覆膜結(jié)合(BLOTOVERLAYBINDING)實驗等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作便捷,反應(yīng)敏感,重復(fù)性好。技術(shù)背景谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione-S-transferase;GST)融合蛋白(fusionprotein)的技術(shù),廣泛應(yīng)用于蛋白與蛋白之間相互作用的研究、抗體的制造和純化、以及生化分析?;贕ST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切離部位和已知激酶磷酸化部位構(gòu)成,使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依賴性蛋白激酶A(proteinkinaseK),標(biāo)記純化的目標(biāo)融合蛋白,作為敏感的探針,在遠(yuǎn)西方雜交(FARWESTERNBLOT)印跡實驗或印跡覆膜結(jié)合(BLOTOVERLAYBINDING)實驗中,探測和分析結(jié)合蛋白或多肽結(jié)構(gòu)域。GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶標(biāo)記是蛋白組學(xué)研究的常用工具。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)毫升標(biāo)記液(ReagentB)微升(用戶自備)反應(yīng)液(ReagentC)微升酶促液(ReagentD)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里;有效保證6月用戶自備[γ32P]ATP同位素:用于同位素標(biāo)記1.5毫升離心管:用于樣品反應(yīng)操作和保存的容器干式恒溫儀:用于標(biāo)記孵育液體閃爍計數(shù)器(liquidscintillationcounter):用于同位素活性測定實驗步驟1.準(zhǔn)備好純化的GST融合蛋白2.移取xx微升緩沖液(ReagentA)到1.5毫升離心管3.加入2.5微升用戶自備的GST融合蛋白(總量為10微克)4.加入xx微升標(biāo)記液(ReagentB)(注意:同位素總量為10毫居里/毫升;5000居里/毫摩爾)5.加入xx微升反應(yīng)液(ReagentC)6.加入xx微升酶促液(ReagentD)7.槍頭上下抽吸混勻8.放進30℃干式恒溫儀孵育30分鐘9.放進-70℃保存或置于冰槽里備用10.或使用5至10微升(107CPM)標(biāo)記蛋白繼續(xù)后續(xù)遠(yuǎn)西方雜交(FARWESTERNBLOT)印跡實驗和印跡覆膜結(jié)合(BLOTOVERLAYBINDING)實驗等注意事項1.本產(chǎn)品為20次操作2.本產(chǎn)品的標(biāo)記效率可達(dá)60%以上3.操作時,須戴手套4.操作時,嚴(yán)格無菌5.同位素操作須嚴(yán)格遵守規(guī)章制度6.建議使用帶濾芯的槍頭進行操作7.同位素[γ32P]ATP(1居里=37GBq),建議使用ICN或AMERSHAM(安瑪西亞)公司8.由于[γ32P]同位素的半衰期短,建議使用新鮮同位素材料;且標(biāo)記后即刻使用9.可以直接在GST融合蛋白樹脂上進行標(biāo)記,然后常規(guī)洗脫或凝血酶(THROMBIN)切離純化;純化后進行同位素活性測定10.本公司提供系列同位素處理試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

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