本文由 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司 整理匯編

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• Santa Cruz Western Blotting投訴表

  SantaCruz，SantaCruz代理，SantaCruz北京代理，SantaCruz上海，SantaCruz國內(nèi)代理熱烈祝賀上海起發(fā)獲得SantaCruzZG區(qū)代理2013年9月開始正式簽約SantaCruz，所有產(chǎn)品售后均有上海SantaCruz負(fù)責(zé)，1**%負(fù)責(zé)，并在上海備有20000多種現(xiàn)貨抗體，價格優(yōu)惠，歡迎廣大經(jīng)銷商咨詢178406/news_328698.html上海起福生物科技有限公司SantaCruz專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678SantaCruzBiotechnologyTECHNICALSERVICEGUIDE:WesternBlottingCatalog#:Lot#:PROBLEMANDPREVIOUSEXPERIENCEWhatisthespecificproblemyouareexperiencing?Whatsizebandswereexpectedandwhatsizebandsweredetected?Wastheblotblankorwasadarkbackgroundornon-specificbandsseen?Didthissamevialofproductworkinthepast?Whatweretheresults?Didotherlotsofthisproductworkinthepast?Whichlots?Whatweretheresults?SAMPLESANDCONTROLSFromwhatspecies（animal）wasthesampleandwhattypeofsamplewasused（celllysate,tissue,purifiedprotein,etc.）?Whatlysisbufferwasused?Howmuchsamplewasloadedonthegel?Iftheblockingpeptidewasused,wasitusedasanegativecontrol?Whatpositiveand/ornegativecontrolswereused,andwhatweretheresults?BLOCKINGWhatweretheblockingconditions（blockingsolution,howlong,whattemperature.Etc.）?上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Santa Cruz Immunoprecipitation投訴表

  SantaCruz，SantaCruz代理，SantaCruz北京代理，SantaCruz上海，SantaCruz國內(nèi)代理熱烈祝賀上海起發(fā)獲得SantaCruzZG區(qū)代理2013年9月開始正式簽約SantaCruz，所有產(chǎn)品售后均有上海SantaCruz負(fù)責(zé)，1**%負(fù)責(zé)，并在上海備有20000多種現(xiàn)貨抗體，價格優(yōu)惠，歡迎廣大經(jīng)銷商咨詢178406/news_328698.html上海起福生物科技有限公司SantaCruz專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678TECHNICALSERVICEGUIDE:IMMUNOPRECIPITATIONCatalog#:Lot#:A.ProblemandPreviousExperience1.Whatisthespecificproblemyouareexperiencing?2.Didthissamevialofproductworkinthepast?Whatweretheresults?3.Didotherlotsofthisproductworkinthepast?Whichlots?Whatweretheresults?B.Samples1.Fromwhichspecies（animal）wasthesampleandwhattypewasused（celllysate,tissue,purifiedprotein,etc.）?Whatlysisbufferwasused?2.Howmanycellswerelysedorwhatwastheproteinconcentrationandvolumeofthesamplethatwasusedintheimmunoprecipitation?C.Pre-Clearing1.Wasapre-clearstepdonepriortoaddingprimaryantibody?2.Whatspeciesofimmunoglobulin（rabbit,goat,etc.）wasusedforthepre-clearstep?3.Whatproteinagarose-conjugatewasusedinthepre-clearstep（Protein-A,Protein-GAgarose,etc.）?D.AntibodiesandImmunoprecipitationReagents1.Howmanymicrogramsofprimaryantibodywereaddedtothetotalcelllysate?2.Wastheprimaryantibodydirectlyconjugatedtoagarose?3.Howlongwastheprimaryincubatedwiththetotalcelllysate?4.Whatimmunoprecipitationreagentwasused（Protein-AAgarose,Protein-GAgarose,etc.）?5.Atwhattemperaturehastheprimaryantibodybeenstored?Hasiteverbeenfrozen?E.WashesandSpins1.Isthefinalwashdonewithastringentreagent（RIPA）oramildreagent（PBS）?2.Howfastwerethesamplesspun（inRPM）?上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Santa Cruz Immunohistochemistry投訴表

  SantaCruz，SantaCruz代理，SantaCruz北京代理，SantaCruz上海，SantaCruz國內(nèi)代理熱烈祝賀上海起發(fā)獲得SantaCruzZG區(qū)代理2013年9月開始正式簽約SantaCruz，所有產(chǎn)品售后均有上海SantaCruz負(fù)責(zé)，1**%負(fù)責(zé)，并在上海備有20000多種現(xiàn)貨抗體，價格優(yōu)惠，歡迎廣大經(jīng)銷商咨詢178406/news_328698.html上海起福生物科技有限公司SantaCruz專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678TECHNICALSERVICEGUIDE:ImmunohistochemistryCatalog#:Lot#:PROBLEMANDPREVIOUSEXPERIENCE1.Whatisthespecificproblemyouareexperiencing?2.Didthissamevialofproductworkinthepast?Whatweretheresults?3.Didotherlotsofthisproductworkinthepast?Whichlots?Whatweretheresults?STAININGPATTERN1.Whatpatternofstainingwasexpectedandwhatwasobserved?CONTROLS1.Hastheprimaryantibody（usedintheimmunohistochemistry）beenusedsuccessfullyinanyotherapplications（WesternBlot,Immunoprecipitation,Immunohistochemistrywithdifferentmethodoffixation）withthesamesample?2.Whatpositiveand/ornegativecontrolsweredoneandwhatweretheresults?SAMPLESANDFIXATION1.Fromwhichspecies（animal）wasthesample?2.Whattypeofsamplewasstained（frozentissue,paraffin-embeddedtissue,tissueculturecells）?3.Whatmethodoffixationwasused（acetone,formalin,methanol）?4.WasAntigen-Retrievalperformed?Ifso,bywhatmethod（heattreatment,enzymedigestion）?BLOCKING1.Whatweretheblockingconditions（blockingsolution,speciesofserum,lengthofincubation）?PRIMARYANTIBODY1.Atwhatdilution（s）wastheprimaryantibodyusedandwhatwasthediluent?2.Whatweretheincubationconditions（time,temperature）fortheprimaryantibody?3.Atwhattemperaturehastheprimaryantibodybeenstored?Hasiteverbeenfrozen?SECONDARYANTIBODY1.Fromwhichcompanywasthesecondaryantibodyobtainedandwhattypeofsecondarywasbeingused（goatanti-rabbit,rabbitanti-mouse,etc.）andwhatsecondaryantibodyconjugatewasused（biotin,FITC,Rhodamine,TexasRed）?2.Atwhatdilution（s）wasthesecondaryantibodyusedandwhatwasthediluent?上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Santa Cruz Immunofluorescence投訴表

  SantaCruz，SantaCruz代理，SantaCruz北京代理，SantaCruz上海，SantaCruz國內(nèi)代理熱烈祝賀上海起發(fā)獲得SantaCruzZG區(qū)代理2013年9月開始正式簽約SantaCruz，所有產(chǎn)品售后均有上海SantaCruz負(fù)責(zé)，1**%負(fù)責(zé)，并在上海備有20000多種現(xiàn)貨抗體，價格優(yōu)惠，歡迎廣大經(jīng)銷商咨詢178406/news_328698.html上海起福生物科技有限公司SantaCruz專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678TECHNICALSERVICEGUIDE:ImmunofluorescenceCatalog#:Lot#:PROBLEMANDPREVIOUSEXPERIENCE1.Whatisthespecificproblemyouareexperiencing?2.Didthissamevialofproductworkinthepast?Whatweretheresults?3.Didotherlotsofthisproductworkinthepast?Whichlots?Whatweretheresults?STAININGPATTERN1.Whatpatternofstainingwasexpectedandwhatwasobserved?CONTROLS1.Hastheprimaryantibody（usedintheimmunohistochemistry）beenusedsuccessfullyinanyotherapplications（WesternBlot,Immunoprecipitation,Immunohistochemistrywithdifferentmethodoffixation）withthesamesample?2.Whatpositiveand/ornegativecontrolsweredoneandwhatweretheresults?SAMPLESANDFIXATION1.Fromwhichspecies（animal）wasthesample?2.Whattypeofsamplewasstained（frozentissue,paraffin-embeddedtissue,tissueculturecells）?3.Whatmethodoffixationwasused（acetone,formalin,methanol）?4.WasAntigen-Retrievalperformed?Ifso,bywhatmethod（heattreatment,enzymedigestion）?上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Santa Cruz IF 投訴表-2014

  SantaCruzIF投訴表-2014[詳細(xì)]

  2018-10-20 10:00

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• Santa cruz IHC 投訴表-2014

  SantacruzIHC投訴表-2014[詳細(xì)]

  2018-10-20 10:00

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• Santa Cruz 產(chǎn)品投訴指南

  SantaCruz產(chǎn)品投訴指南關(guān)于SantaCruz產(chǎn)品投訴流程，請參照附件PDF文檔，在您填表前，務(wù)必認(rèn)真閱讀投訴流程，節(jié)省的不只是時間。博蕾德生物代理SantaCruz，如Santa上海辦事處，有現(xiàn)貨，我公司直接走現(xiàn)貨，到貨速度超快。[詳細(xì)]

  2018-10-20 10:00

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• Sant Cruz WB 投訴表-2014

  SantCruzWB投訴表-2014[詳細(xì)]

  2018-10-20 10:00

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• Santa Cruz sc-2003大量現(xiàn)貨

  世界ding級實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商SantaCruzBiotechnology正式授權(quán)上海起發(fā)為其ZG代理，SantaCruzBiotechnology在一直是行業(yè)的標(biāo)桿,一直為廣大科研客戶提供Z為優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為ZG科研客戶帶來**的產(chǎn)品，**的服務(wù)，簽約SantaCruzBiotechnology就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們Zda的收獲SantaCruzBiotechnologyZG代理，SantaCruzBiotechnology上海代理，SantaCruzBiotechnology北京代理，SantaCruzBiotechnology廣東代理，SantaCruzBiotechnology江蘇代理SantaCruzBiotechnology湖北代理,SantaCruzBiotechnology天津,SantaCruzBiotechnology黑龍江代理,SantaCruzBiotechnology內(nèi)蒙古代理,SantaCruzBiotechnology吉林代理,SantaCruzBiotechnology福建代理,SantaCruzBiotechnology江蘇代理,SantaCruzBiotechnology浙江代理,SantaCruzBiotechnology四川代理,SantaCruz是美國也是世界上Zda的抗體生產(chǎn)廠家，提供抗體種類多達(dá)兩萬多種，幾乎覆蓋了目前生命科學(xué)研究的各個Zxin領(lǐng)域，其每種抗體又有多個克隆可選擇，并有對應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品及相關(guān)產(chǎn)品，為免疫學(xué)研究工作提供了極大的方便。ProteinA/GPLUS-Agarose:sc-2003ProvidesbindingforallspeciesofantibodyandIgGsubclassesrecognizedbyeitherProteinAorProteinG規(guī)格為0.5ml瓊脂糖/2.0ml；可用于100次反應(yīng)每次免疫沉淀反應(yīng)可使用20lbindingcapacityis10mgofantibodyper1mlofpackedbeads,settlednotspun為減少非特異性免疫球蛋白結(jié)合進(jìn)行了預(yù)處理linkedtoSepharoseCL-6BstrongbindingtomouseIgG2a,IgG2bandIgG3,ratIgG2aandIgG2c,humanIgG1,IgG2,IgG3andIgG4,rabbit,goat,bovine,porcine,ovine,canine,felineandequineIgGmediumbindingtomouseandratIgG1weakbindingtoratIgG2b,humanIgM,IgAandIgEpre-washedandreadytouse產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格ProteinA/GPLUS-Agarosesc-20032ml大量現(xiàn)貨，價格優(yōu)惠我們公司Zda優(yōu)勢是強(qiáng)大的采購，1：基本什么都能進(jìn)口，血清，抗體，耗材，還有部分限制進(jìn)口的，2：貨品全，現(xiàn)經(jīng)營過700多個品牌，基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢，3：提供加急服務(wù)，一般1-2周到貨，超過時限加急費(fèi)全免4：價格公道，絕大部分價格有優(yōu)勢，當(dāng)然不能保證1**%產(chǎn)品都是價格Zdi,因?yàn)閮r格Zdi意味著沒有服務(wù).5：良好的信譽(yù)，大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，客戶包括清華，北大交大復(fù)旦，中山等100多所大學(xué)，ROCHE，阿斯利康，國藥，fisher等500多家公司6：我們還是Santa,AdvancedBiotechnologiesInc,SantaCruzBiotechnology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FDNeurotechnologies,Inc.FormuMaxScientific,Inc,GePromegaridege,GlycotopeBiotechnologyGmbH;iduron,InnovativeResearchofAmerica,Ludger,neuroprobe,omicronbio,Polysciences,prospecbi,QA-BIO,quickzyme,RESEARCHDIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLinkBioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。7：我們還是invitrogen,qiagen,MidlandBioProductsCorporationam,sigma;Promega,roche,merck,rnd,BD,GE,pierce,BioLegend等知名批發(fā)，歡迎合作。上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司400電話：4006551678辦公電話：021-50724187手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678地址：上海市浦東新區(qū)晨陽路225弄東方現(xiàn)代商業(yè)廣場46號303室(近東亭路)[詳細(xì)]

  2018-09-29 10:02

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• Western blotting DAB 檢測試劑盒說明書

  SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。[詳細(xì)]

  2024-09-29 12:14

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• Abcam FC投訴表

  AbcamFC，AbcamFC投訴表，Abcam投訴表，AbcamFC技術(shù)咨詢表，AbcamFC代理上海起福生物科技有限公司Abcam專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678AbcamChIP投訴表部分資料如下：客戶姓名：單位：E-mail：電話/手機(jī)：產(chǎn)品訂購信息產(chǎn)品名稱：Cat.#Lot.#訂貨期：到貨期：投訴日期：：您從何處訂購該抗體：1.抗體保存條件（溫度/分裝等）：2.請描述您遇到的問題（高背景，低訊號，無訊號）3.關(guān)于檢測標(biāo)本標(biāo)本種屬來源：標(biāo)本類型：其他細(xì)節(jié)，如細(xì)胞有無經(jīng)過特殊處理：4.關(guān)于細(xì)胞處理懸浮細(xì)胞的緩沖液類型：使用細(xì)胞數(shù)量：5.關(guān)于破膜/通透操作使用通透劑類型？：通透劑濃度：孵育時間孵育溫度:6.關(guān)于一抗一抗的特異性（識別種屬）：上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

  2018-09-29 10:02

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• Abcam IP投訴表

  AbcamIP，AbcamIP投訴表，Abcam投訴表，AbcamIP技術(shù)咨詢表，AbcamIP代理上海起福生物科技有限公司Abcam專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678AbcamIP投訴表部分資料如下：客戶姓名：單位：E-mail：電話/手機(jī)：產(chǎn)品訂購信息產(chǎn)品名稱：Cat.#Lot.#訂貨期：到貨期：投訴日期：：您從何處訂購該抗體：1.抗體保存條件（溫度/分裝等）：2.請描述您遇到的問題（高背景，條帶大小不對，多條帶，無條帶等）3.是否使用陽性對照用WB檢測過該抗體？4.關(guān)于檢測標(biāo)本：標(biāo)本種屬來源：細(xì)胞和組織來源：是全細(xì)胞提取物還是部分提取物，請說明：如果是蛋白，請說明純化蛋白或重組蛋白：5.關(guān)于裂解物所使用的細(xì)胞/組織裂解液是什么：上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Abcam IHC投訴表

  AbcamIHC，AbcamIHC投訴表，AbcamIHC投訴表，AbcamIHC技術(shù)咨詢表，AbcamIHC代理上海起福生物科技有限公司AbcamIHC專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678AbcamIHC投訴表部分資料如下：客戶姓名：單位：E-mail：電話/手機(jī)：產(chǎn)品訂購信息產(chǎn)品名稱：Cat.#Lot.#訂貨期：到貨期：投訴日期：：您從何處訂購該抗體：1.抗體保存條件（溫度/分裝等）：2.請描述您的問題（高背景，無陽性染色等）3.關(guān)于檢測標(biāo)本標(biāo)本種屬來源：細(xì)胞或組織來源（名稱）：如果是組織，是石蠟還是冰凍切片？：4.標(biāo)本固定方法：乙醇，甲醇（是否為預(yù)冷）：丙酮（是否為冰凍）：多聚甲醛（使用比例，是否perfusion固定）：固定時間固定溫度有無使用破膜/通過過程？（請描述所用破膜劑和濃度，處理時間和溫度）：5.關(guān)于石蠟切片的抗原修復(fù)過程：酶修復(fù)法（使用何種酶，濃度和處理時間、溫度）：熱修復(fù)（使用的修復(fù)液、處理方法、溫度和時間）：其他修式，請描述：上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• Abcam ELISA投訴表

  AbcamELISA，AbcamELISA投訴表，Abcam投訴表，AbcamELISA技術(shù)咨詢表，AbcamChIP代理上海起福生物科技有限公司Abcam專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678AbcamELISA投訴表部分資料如下：客戶姓名：單位：E-mail：電話/手機(jī)：產(chǎn)品訂購信息產(chǎn)品名稱：Cat.#Lot.#訂貨期：到貨期：投訴日期：：您從何處訂購該抗體：1.抗體保存條件（溫度/分裝等）：2.請描述您遇到的問題（高背景，白板，標(biāo)準(zhǔn)曲線弱還是其他等）3.您檢測ELISA的類型：直接ELISA，間接ELISA，夾心ELISA或其他？：4.關(guān)于檢測標(biāo)本：標(biāo)本的種屬來源：標(biāo)本類型（血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他）：其他標(biāo)本相關(guān)細(xì)節(jié)：5.關(guān)于包板：包被緩沖液：包被抗體或標(biāo)本量：6.關(guān)于封閉：封閉緩沖液類型和名稱：封閉試劑名稱和濃度：封閉時間：封閉溫度：洗滌步驟（洗滌液和次數(shù)）：上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

  2018-09-29 10:02

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• Abcam FC 技術(shù)投訴表

  AbcamFC，AbcamFC投訴表，Abcam投訴表，AbcamFC技術(shù)咨詢表，AbcamFC代理上海起福生物科技有限公司Abcam專業(yè)代理，具體產(chǎn)品信息歡迎電詢：4006551678AbcamFC投訴表部分資料如下：客戶姓名：單位：E-mail：電話/手機(jī)：產(chǎn)品訂購信息產(chǎn)品名稱：Cat.#Lot.#訂貨期：到貨期：投訴日期：：您從何處訂購該抗體：1.抗體保存條件（溫度/分裝等）：2.請描述您遇到的問題（高背景，低訊號，無訊號）3.關(guān)于檢測標(biāo)本標(biāo)本種屬來源：標(biāo)本類型：其他細(xì)節(jié)，如細(xì)胞有無經(jīng)過特殊處理：4.關(guān)于細(xì)胞處理懸浮細(xì)胞的緩沖液類型：使用細(xì)胞數(shù)量：5.關(guān)于破膜/通透操作使用通透劑類型？通透劑濃度：孵育時間孵育溫度:上海起福生物科技有限公司聯(lián)系人：楊建輝400電話：4006551678辦公電話：021-50724187傳真：021-50724961*8006手機(jī)：15921799099企業(yè)QQ:4006551678網(wǎng)址:http://www.qfbio.com/地址：上海市浦東新區(qū)繡川路561號1102室[詳細(xì)]

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• 新時代下對于Western Blotting發(fā)表文章的新要求（一）

  Western Blotting技術(shù)已經(jīng)問世四十多年了，依然是蛋白分析中Z常用和主流的方法。但近些年Western Blotting數(shù)據(jù)重現(xiàn)性，穩(wěn)定性，定量準(zhǔn)確性等問題，也使這項(xiàng)技術(shù)被推到了風(fēng)口浪尖，同時也有很多文章因?yàn)閃estern Blotting數(shù)據(jù)的問題而撤稿，而為了盡可能提高Western Blottig數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性，期刊雜志對于接收涉及Western Blotting技術(shù)數(shù)據(jù)的文章也提出了新的要求。[詳細(xì)]

  2024-09-12 16:03

  期刊論文

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• 新時代下對于Western Blotting發(fā)表文章的新要求（二）

  Azure公司除了有Sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)可滿足需求， Azure600多功能分子成像系統(tǒng)也可幫助您獲得期刊雜志要求的Western Blot數(shù)據(jù)： Azure600標(biāo)配有5個熒光光源，可同時在一張印跡膜上進(jìn)行4通道熒光成像 ，同時也具有高靈敏化學(xué)發(fā)光檢測功能，靈敏度可達(dá)fg級 熒光Western Blot使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測，膜上的靶標(biāo)蛋白濃度與可見熒光信號強(qiáng)度呈線性關(guān)系，實(shí)現(xiàn)真實(shí)可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同，因此在一張印跡膜上可實(shí)現(xiàn)多個蛋白檢測。這樣目標(biāo)蛋白和內(nèi)參蛋白在同一張膜上，可以避免數(shù)據(jù)造假的情況發(fā)生，更容易被期刊雜志接收。[詳細(xì)]

  2024-09-12 18:30

  期刊論文

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• 你的Western blotting實(shí)驗(yàn)好拍檔——GE明星產(chǎn)品組合大特惠

  你的Western blotting實(shí)驗(yàn)好拍檔——GE明星產(chǎn)品組合大特惠[詳細(xì)]

  2013-04-01 00:00

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  2018-10-14 10:00

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• 蛋白質(zhì)印跡分析（Western Blot Analysis）

  蛋白質(zhì)印跡分析（WesternBlotAnalysis）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私獾鞍踪|(zhì)印跡法的基本原理及其操作和應(yīng)用?！緦?shí)驗(yàn)原理】蛋白質(zhì)印跡法又稱為免疫印跡法，這是一種可以檢測固定在固相載體上蛋白質(zhì)的免疫化學(xué)技術(shù)方法。待測蛋白既可以是粗提物也可以經(jīng)過一定的分離和純化,另外這項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用需要利用待測蛋白的單克隆或多克隆抗體進(jìn)行識別。如圖所示，可溶性抗原，也就是待測蛋白首先要根據(jù)其性質(zhì)，如分子量，分子大小，電荷以及其等電點(diǎn)等采用不同的電泳方法進(jìn)行分離；通過電流將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上；利用抗體（一抗）與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的原理，以抗體作為探針釣取目的蛋白。值得注意的是在加入一抗前應(yīng)首先加入非特異性蛋白，如牛血清白蛋白對膜進(jìn)行“封阻”而防止抗體與膜的非特異性結(jié)合。經(jīng)電泳分離后的蛋白往往需再利用電泳方法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體上,我們把這個過程稱為電泳印跡。常用的兩種電轉(zhuǎn)移方法分別為:1.半干法:凝膠和固相載體被夾在用緩沖溶液浸濕的濾紙之間,通電時間為10分鐘~30分鐘。2.濕法：凝膠和固相載體夾心浸放在轉(zhuǎn)移緩沖溶液中，轉(zhuǎn)移時間可從45分鐘延長到過夜進(jìn)行。由于濕法的使用彈性更大并且沒有明顯浪費(fèi)更多的時間和原料，因此我們在這里只描述濕法的基本操作過程。對于目的蛋白的識別需要采用能夠識別一抗的第二抗體。該抗體往往是購買的成品，已經(jīng)被結(jié)合或標(biāo)記了特定的試劑，如辣根過氧化物酶。這種標(biāo)記是利用辣根過氧化物酶所催化的一個比色反應(yīng)，該反應(yīng)的產(chǎn)物有特定的顏色且固定在固相載體上，容易鑒別。因此可通過對二抗的識別而識別一抗，進(jìn)而判斷出目標(biāo)蛋白所在的位置。其他的識別系統(tǒng)包括堿性磷酸酶系統(tǒng)和125I標(biāo)記系統(tǒng)?！緦?shí)驗(yàn)操作】⒈.蛋白質(zhì)的分離根據(jù)目的蛋白的性質(zhì)，利用電泳方法將其進(jìn)行分離。為提高電轉(zhuǎn)移的效率，通常采用SDS/PAGE技術(shù)。分離實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，首先將樣品墻的上邊緣用小刀去除，然后在膠板的右上角切一個小口以便定位，小心放入轉(zhuǎn)移緩沖溶液中待用。⒉.電轉(zhuǎn)移⑴準(zhǔn)備PVDF膜根據(jù)膠的大小剪出一片PVDF膜，膜的大小應(yīng)略微小于膠的大小。將膜置于甲醇中浸泡1分鐘，再移至轉(zhuǎn)移緩沖溶液中待用。夾心放置順序⑵制作膠膜夾心在一淺盤中打開轉(zhuǎn)移盒，將一個預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖溶液浸泡過的海綿墊放在轉(zhuǎn)移盒的黑色篩孔板上，在海綿墊的上方放置經(jīng)轉(zhuǎn)移緩沖溶液浸濕的3MM紙，小心地將膠板放在3MM紙上，并注意排除氣泡。將PVDF膜放在膠的上方同時注意排除氣泡，再在膜的上方放上一張同樣用轉(zhuǎn)移緩沖溶液浸濕過的3MM紙并趕出氣泡，放置另一張浸泡過的海綿墊，關(guān)閉轉(zhuǎn)移盒。將轉(zhuǎn)移盒按照正確的方向放入轉(zhuǎn)移槽中，轉(zhuǎn)移盒的黑色篩孔板貼近轉(zhuǎn)移槽的黑色端，轉(zhuǎn)移盒的白色篩孔板貼近轉(zhuǎn)移槽的白色端，填滿轉(zhuǎn)移緩沖溶液同時防止出現(xiàn)氣泡。⑶電轉(zhuǎn)移連接電源,在4°C條件下維持恒壓100v，1小時⒊.免疫檢測⑴膜染色斷開電源，將轉(zhuǎn)移盒從轉(zhuǎn)移槽中移出，將轉(zhuǎn)移盒的各個部分分開。用鑷子將PVDF膜小心放入一個干凈的容器中，用TBS緩沖溶液進(jìn)行短暫清洗，從膜上剪下一條寬約5mm的膜放入另一個干凈的容器中。將這條膜在染色液中浸泡1分鐘，然后在脫色液中脫色30分鐘,確定蛋白質(zhì)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。⑵膜的封閉和清洗對于沒有進(jìn)行染色的膜，首先倒出TBS緩沖溶液,加入3%封閉緩沖溶液,輕輕搖動至少1小時。倒掉3%封閉緩沖溶液，并用TBS緩沖溶液清洗3次,每次5分鐘。⑶一抗倒掉TBS緩沖溶液，加入10ml0.5%封閉緩沖溶液及適量的一抗，輕輕搖動1小時以上。從容器中倒出一抗及封閉緩沖溶液，用TTBS緩沖溶液清洗兩次，每次10分鐘。⑷二抗倒出TTBS緩沖溶液，加入5ml0.5%封閉緩沖溶液及適量的二抗。輕輕搖動30分鐘，倒出二抗及封閉緩沖溶液，用TTBS緩沖溶液清洗兩次，每次10分鐘。⑸檢測倒掉TTBS緩沖溶液，并加入顯影劑，輕輕搖動PVDF膜，觀察顯影情況，當(dāng)能夠清晰的看到顯色帶時，用蒸餾水在30分鐘內(nèi)分三次清洗PVDF膜以終止顯色反應(yīng)的繼續(xù)進(jìn)行?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】檢查膜上顯色結(jié)果，藍(lán)紫色帶所對應(yīng)的即是目標(biāo)蛋白的位置。WesternBlotAnalysis【Purpose】ComprehendthetheoryofWesternblotting;understanditsbasicmanipulationandapplication.【Principle】WesternblottingisalsocalledImmunoblotting.Itisakindofimmunochemicaltechniqueswhichisusedtodetectaproteinimmobilizedonamatrix.Thetargetproteincanbeinacrudeextractoramorepurifiedpreparationandthemonoclonalorpolyclonalantibodyagainstthisproteinisnecessarytohelpustorecognizetheantigen.AsintheFigure,solubleantigens（thetargetprotein）maybeseparatedbyelectrophoresisbasedonitsmolecularweight（SDS/PAGE）,sizeandcharge（nondenaturatinggelelectrophoresisorisoelectricpoint（isoelectricfocusing）.Aftertheseparation,theproteinsaretransferredfromthegeltoaPVDFmembrane.Onceonthemembraneantibodies（firstantibodies）canbeusedtoprobeforthepresenceofparticularproteinbecauseofthespecificallybindingofantigenwithagainstit.Non-specificbindingsitecanbe“blocked”usingothernon-specificproteinsuchasbovineserumalbuminbeforeaddingfirstantibodytoavoidnon-specificbinding.Proteintransferismostcommonlyaccomplishedbyelectrophoresis，Thisprocedureiscalledelectrophoreticblotting.Thetwocommonelectrophoreticmethodsare:⒈Semi-dryblotting,inwhichthegelandimmobilizingmatrixaresandwichedbetweenbuffer-wettedfilterpapersthroughwhichacurrentisappliedfor10-30minutes.⒉Wet（tank）blotting,inwhichthegel-matrixsandwichissubmergedintransferbufferforelectrophoresis,whichmaytakeaslittleas45minutesormaybeallowedtocontinueovernightWeonlydescribewetblottinghere,sinceitpermitsgreaterflexibilitywithoutbeingsignificantlymoreexpensiveintimeormaterials.Thedetectionoftargetproteinisusingasecondantibody,whichcanrecognizethefirstantibody.Typically,thesecondantibodyispurchasedalreadyconjugatedtoalabe領(lǐng)agentsuchastheenzymehorseradishperoxidase.Thismarkeristhenvisualizedbyacolorimetricreactioncatalyzedbytheenzymewhichyieldsacoloredproductthatremainsfixedtothemembrane.Thus,itispossibletorecognizefirstantibodythroughrecognizingsecondantibody,andthenidentifythepositionoftargetprotein.Otherdetectionsystemsincludealkalinephosphataseand125Ilabels.【Materials】⒈Apparatus:ApparatusofSDS-PAGE,ElectroblottingApparatus,Powersupply,PVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）,Whatman3MMpaper,AdditionalTools:Forceps,spongepad,scissor,gloves,smallplasticorglasscontainer,Shallowtray.⒉Reagents:⑴10xtransferbuffer（1L）:30.3gTrizmabase（0.25M）,144gGlycine（1.92M）,pH首ldbe8.3;withoutadjustment.⑵1xtransferbuffer（2L）:400mlMethanol,200ml10xtransferbuffer,1400mlwater.⑶TBSbuffer:Add1.22gTris（10mM）and8.78gNaCl（150mM）to1LdistilledwaterandadjustpHto7.5withHCl.⑷TTBSbuffer:1LTBSbufferadd0.5mlTween20（0.05%）.⑸Firstantibody:antibodyagainstthetargetprotein.⑹Secondantibody:goatanti-rabbit-HRP（horseradishperoxidase）.⑺3%Blockingbuffer（0.5L）:Add15mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑻0.5%Blockingbuffer（0.5L）:Add2.5mgBovineserumalbumininTBSbuffertofinalvolume0.5L,keepat4°Ctopreventbacterialcontamination.⑼Developingreagent:1mlchlonoaphtholsolution（30mg/mlinmethanol）,add10mlmethanol,addTBSbufferto50mlandadd30ul30%H2O2.⑽Stainingbuffer:Add1gamidoblack18B（0.1%）,250mlisopropanol（25%）and100mlaceticacid（10%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.⑾Destainingbuffer:Add350mlisopropanol（35%）and2mlaceticacid（2%）todistilledwaterwithfinalvolume1L.【Procedure】⒈.SeparationofProteinRunanelectrophoreticseparationofknownantigenicproteins.Themethodofseparationdecidedbythecharactersoftargetprotein,butforsufficientlytransferring,themostcommonmethodisSDS-PAGE.Afterseparation,removeuppersideofsamplewellswitharazorblade.Notchingbottomright-handcornerofgelfororientationandputgelintransferbufferuntilreadytouse.⒉.Electrotransfer⑴PreparationofmembraneCutapieceofPVDFmembrane（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）accordingtothesizeofgel.Incubateinmethanolforabout1minonarockeratroomtemp.Removemethanolandequilibratemembranein1xtransferbufferuntilreadytouse.⑵Arrangegel-membranesandwichInashallowtray,openthetransfercassette.Putawell-soakedspongepadontheblackpieceofthetransfercassetteandawetted3MMpaperonthespongepad.Placethegelonthepaperandarrangewellsothatallairbubblesareremoved.LaythePVDFmembraneonthetopofgelandremoveanyairbubbles.Placeawettedsheetof3MMpaperoverthePVDFmembraneandremovethebubble.Coveredwiththesecondwell-soakedpad.Closethesandwichwiththewhitepieceofthecassette.Mountthesandwichinthetransfertank;puttheblacksidesneartheblacksideofthedevice.Fillthebuffertankwiththetransferbuffer.⑶Electrotransfer:Attachtheelectrodes.Setthepowersupplyto100V（constantvoltage）for1hat4°C.⒊.Immunodetection⑴MembranestainingDisconnecttransferapparatus,removetransfercassette,andpeel3MMpaperfrommembrane.Removethemembranetoasmallcontainer.Add10mlTBSbufferandwashforshorttime.Cutoutonestripewith5mmwidthandputinanothercleancontainer.Stainthisstripeinstainingbufferfor1min.Destainfor30minindestainingbuffertocheckwhetherproteinhasbeentransferredfromgeltomembraneornot.⑵MembraneblockingandwashingForotherpartofmembrane,pouroffTBSbuffer.Add3%blockingbuffer，rockgentlyforatleast1h.Pouroff3%blockingbufferandrinsebrieflywithTBSbufferthreetimes,5minutesforpertime.⑶FirstantibodyPouroffTBSbuffer.Addfirstantibodyatappropriatedilutionin10ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyforatleast1h;pourofffirstantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑷SecondantibodyPouroffTTBSbuffer.Addsecondantibodyatappropriatedilutionin5ml0.5%blockingbuffer.Rockgentlyfor30min,pouroffsecondantibodysolutionfrommembraneandwashtwicefor10minuteswithTTBSbuffer.⑸DetectionPouroffTTBSbufferfrommembraneandadddevelopingreagent,RockPVDFgently,monitoringdevelopment.Whenthebandscanbeseenclearly,stopdevelopmentbywashingmembranewithdistilledwaterfor30minuteswith3changes.【Result】Checkthebandsonmembrane,thebandwithblue-purplecolorcorrespondingtothetargetprotein.實(shí)驗(yàn)材料】1.實(shí)驗(yàn)器材SDS/PAGE實(shí)驗(yàn)相關(guān)材料；電轉(zhuǎn)移裝置；供電設(shè)備；PVDF膜（MilliporeImmobion-P#IPVH00010）；Whatman3MM紙；其他工具：鑷子、海綿墊、剪子、手套、小塑料或玻璃容器、淺盤。Detection2.實(shí)驗(yàn)試劑⑴10x轉(zhuǎn)移緩沖溶液（1L）：30.3gTrizmabase（0.25M）,144g甘氨酸（1.92M）,加蒸餾水至1L,此時pH約為8.3，不必調(diào)整。⑵1x轉(zhuǎn)移緩沖溶液（2L）：在1.4L蒸餾水中加入400ml甲醇及200ml10x轉(zhuǎn)移緩沖溶液。⑶TBS緩沖溶液:將1.22gTris（10mM）和8.78gNaCl（150mM）加入到1L蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)pH至7.5。⑷TTBSbuffer：在1LTBS緩沖溶液中加入0.5mlTween20（0.05%）。⑸一抗：兔抗待測蛋白抗體（多克隆抗體）。（6）二抗：辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔。⑺3%封阻緩沖溶液（0.5L）：牛血清白蛋白15mg加入TBS緩沖溶液并定容至0.5L，過濾，在4°C保存以防止細(xì)菌污染。⑻0.5%封阻緩沖溶液（0.5L）：牛血清白蛋白2.5mg加入TTBS緩沖溶液并定容至0.5L，過濾，在4°C保存以防止細(xì)菌污染。⑼顯影試劑：1ml氯萘溶液（30mg/ml甲醇配置），加入10ml甲醇，加入TBS緩沖溶液至50ml，加入30ul30%H2O2。⑽染色液：1g氨基黑18B（0.1%），250ml異丙醇（25%）及100ml乙酸（10%）用蒸餾水定容至1L。⑾脫色液：將350ml異丙醇（35%）和20ml乙酸（2%）用蒸餾水定容至1L。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:01

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