臍帶間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞。臍帶間充質(zhì)干細胞具有較高的分化潛能，可向多個方向進行分化。它在骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、內(nèi)皮和心肌等組織工程方面具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。有報道從人臍帶中分離出MSCs，且細胞含量、增殖能力優(yōu)于MSCs，免疫原性比MSCs低  ，并且具有取材方便，無倫理學(xué)爭議等優(yōu)點，因此越來越受到研究工作者們的關(guān)注。

近期有位客戶需要一臺顯微鏡用于觀察臍帶間充質(zhì)干細胞，由于它是需要培養(yǎng)皿培養(yǎng)的，因此銷售經(jīng)理推薦細胞工廠顯微鏡MI52-CF。

 
顯微鏡MI52-CF觀察臍帶間充質(zhì)干細胞

細胞工廠MI52-CF采用優(yōu)良的無限遠光學(xué)系統(tǒng)，可實現(xiàn)明視場、相襯觀察?？蓪Ω吲囵B(yǎng)皿或圓筒狀燒瓶進行無沾染培養(yǎng)細胞觀察?；?qū)毎M織，透明液態(tài)組織的顯微觀察，可對培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)組織進行動態(tài)顯微觀察，也可對“細胞工廠”進行顯微觀察?？蓱?yīng)用于科研院所、高等院校、醫(yī)療衛(wèi)生、生物醫(yī)藥、檢驗檢疫、農(nóng)牧乳業(yè)等部門。

除此之外，熒光顯微鏡也可應(yīng)用于人臍帶間充質(zhì)干細胞主庫支原體

熒光生物顯微鏡MF31-M采用無限遠平場消色差物鏡和大視野目鏡，可用雙目或三目觀察，搭配LED熒光激發(fā)裝置，實現(xiàn)明場和熒光顯微觀察，供臨床試驗室利用顯微放大原理觀察微小細胞、組織等樣本用。

如果您對臍帶間充質(zhì)干細胞顯微鏡感興趣或有疑問，歡迎與我們聯(lián)系，期待與您相約！

來源：http://www.mshot.com.cn/kehuanli/202303313.html，轉(zhuǎn)載請保留出處，謝謝！

基因工程細胞的同質(zhì)性對于很多應(yīng)用都是必要條件，例如細胞株開發(fā)、基因ZL、組織工程以及細胞ZL與再生醫(yī)學(xué)。CRISPR/Cas9基因編輯存在脫靶等情況，無法直接得到均質(zhì)的細胞，因此需要開展單細胞克隆，之后才能用于臨床。

CloneSelect單細胞分離系統(tǒng)（CloneSelect Single Cell Printer）采用類似噴墨打印的技術(shù)，柔和地產(chǎn)生包裹細胞的液滴無接觸地直接分配到微孔板中（圖1）。同時，該系統(tǒng)借助智能圖像分析，確認細胞數(shù)目，分析細胞的形態(tài)（大小和圓度）及熒光強度，聯(lián)動的真空裝置將不符合要求的液滴（如空液滴或者含多個細胞的液滴）直接吸走，而符合要求的細胞液滴則分配至微孔板，從而實現(xiàn)對單個細胞的分選和接種。單細胞分離系統(tǒng)是一種可比移液器操作的柔和的單細胞分離技術(shù)，而流式分選由于高的液體剪切力和電壓的影響，會降低敏感細胞和部分受損細胞（如電轉(zhuǎn)后的細胞）的成克隆率，因此單細胞分離系統(tǒng)更適用于基因工程細胞的克隆，維持細胞活力，并提供直接的單克隆性圖像證據(jù)。

圖1：CloneSelect f.sight單細胞分離系統(tǒng)

最近發(fā)表的一篇文章（Characterization of CRISPR/Cas9 RANKL knockout mesenchymal stem cell clones based on single-cell printing technology and emulsion coupling assay as a low-cellularity workflow for single-cell cloning），作者用CRISPR/Cas9對間充質(zhì)干細胞（MSC）開展RANKL基因敲除以提高其骨骼形成能力。整個實驗流程起始于轉(zhuǎn)染，接著用CloneSelect f.sight單細胞分離系統(tǒng)開展單細胞克隆，隨后在DNA、RNA以及蛋白質(zhì)水平開展分析，ZH開展細胞功能分析（圖2）。

圖2：基因編輯間充質(zhì)干細胞的單細胞克隆及分析流程。（圖片來源：文獻1）。

作者在CRISPR/Cas9基因敲除質(zhì)粒中加入了GFP基因，轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞后，用具備熒光分選功能的CloneSelect f.sight系統(tǒng)分選出轉(zhuǎn)染成功的單細胞。系統(tǒng)可設(shè)定細胞直徑、圓度和熒光強度等指標，分選出單個活細胞并接種至微孔板。圖3為系統(tǒng)分選基因編輯的間充質(zhì)干細胞的5張連續(xù)的圖像。通過瀏覽單細胞分離過程中記錄的5張連續(xù)的圖像，作者統(tǒng)計單細胞接種的成功率為93.9±2.7%（n=451），即僅有~6%的孔為多細胞孔，或空孔或無法確認（圖4）。這一結(jié)果表明f.sight單細胞分離系統(tǒng)可以準確地識別細胞并成功將其接種至微孔內(nèi)。

圖3：CloneSelect f.sight系統(tǒng)分選間充質(zhì)干細胞時采集的5張連續(xù)圖像，可用于證明單克隆性。（圖片來源：文獻¹）。

除了帶GFP的基因敲除質(zhì)粒外，作者還將pmaxGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至間充質(zhì)干細胞作為對照用于評估單細胞分離效率和克隆率。此外，作者轉(zhuǎn)染了多個不同的基因敲除質(zhì)粒。雖然不同的質(zhì)粒因為大小不同而呈現(xiàn)各異的轉(zhuǎn)染效率，但是成克隆率都達到了30%。此外，作者還發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的間充質(zhì)干細胞（31.3±8%）和未轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細胞（39.6±15.6%）在成克隆率上差異較小，這也表明f.sight的單細胞分選過程柔和，因此產(chǎn)生的系統(tǒng)偏差較小（圖4）。

圖4：CloneSelect f.sight單細胞分離系統(tǒng)的高接種效率（左）和高成克隆率（右）。（圖片來源：文獻¹）。

接著作者采用surveyor assay、RT-PCR和emulsion coupling分別從DNA、RNA和蛋白質(zhì)水平對基因編輯后的間充質(zhì)單細胞開展分析。ZH作者選出一株雙等位基因敲除的間充質(zhì)干細胞（g23d）檢測其成骨分化的能力，并以未編輯的MSC為對照開展平行實驗。細胞轉(zhuǎn)移到成骨分化培養(yǎng)基后，分別在第7天、14天和21天用茜素紅染色。在第14天，細胞失去細長的成纖維細胞樣形態(tài)，開始呈現(xiàn)出成骨細胞樣的形態(tài)，然后在第21天開始出現(xiàn)鈣沉積，發(fā)展過程與親本的MSC對照類似（圖5）。這表明基因編輯后的MSC其成骨分化能力并沒有因為基因編輯和篩選過程而受到影響。

圖5：RANKL基因敲除的間充質(zhì)干細胞（g23d）和親本間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)和成骨分化。（圖片來源：文獻1）。

在這個研究中，作者搭建了一整套實驗流程，起始于CRISPR/Cas9基因編輯，單細胞克隆以及DNA、RNA和蛋白質(zhì)各個水平的分析和細胞功能測試。實驗流程中采用CloneSelect f.sight單細胞分離系統(tǒng)成功GX地分選出基因編輯后帶GFP的間充質(zhì)干細胞。單細胞接種效率高達93.9% (± 2.7%)，且成克隆率高達31.3% (±8%)。相比傳統(tǒng)的有限稀釋法和流式分選，CloneSelect單細胞分離系統(tǒng)具有GX率，高活率，操作簡單，單克隆性證據(jù)充分等優(yōu)勢，是基因工程細胞克隆的理想工具。

　　實驗室培養(yǎng)細胞用96孔板與96孔酶標板的差別？

　　實驗室使用的ELISA板為96孔，無蓋的。覆蓋用于培養(yǎng)細胞的一次性96孔板。下面BUNSEN本生小編就兩個孔板之間的本質(zhì)區(qū)別是什么?

　　ELISA板是否涂有抗體?培養(yǎng)的細胞未涂有抗體，但對表面進行了處理以促進細胞附著。差異仍然很小。通常激活ELISA板以增加吸附力。兩者的材料相同。主要區(qū)別在于ELISA板的要求更高。

　　ELISA板有幾種情況：

　　1.對于ELISA，預(yù)先添加特異性抗體或聚賴氨酸以增加吸附力。

　　2.確定OD值。當(dāng)檢測波長在UV范圍內(nèi)時，將對板進行處理以使UV通過，并且培養(yǎng)細胞的板UV無法通過。

　　3.我們的實驗室都是通用的。應(yīng)該沒有太大的區(qū)別

　　4.細胞培養(yǎng)96孔板與ELISA板的材料相同，不同之處在于：

　　細胞培養(yǎng)96孔板的表面被處理為相對親水的，這對于細胞粘附是有利的。(當(dāng)然還有其他細胞培養(yǎng)板，這是普通的TC處理板)

　　可以將ELISA板的表面加工成高結(jié)合力的ELISA板，或者不處理中等結(jié)合力的ELISA板，并對ELISA板進行分類，從而看到要結(jié)合的特定分子。

　　實驗室培養(yǎng)細胞用96孔板與96孔酶標板的差別？本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

　　96孔微孔過濾板詳解!

　　96 孔微孔過濾板為高通量樣本處理而設(shè)計，過濾板由聚苯乙烯精密注塑而成，配合多種不同類型和材質(zhì)的濾膜，如聚偏氟乙烯(PVDF)、混合纖維素(MCE)、聚四氟乙烯(PTFE)等微孔濾膜，每個板孔都單獨密封，配合可取下的導(dǎo)流板及收集板，實現(xiàn)無縫整合。新穎的多孔設(shè)計對要求將濾膜浸入測定皿的許多應(yīng)用特別有價值。以下

　　特點：

　　適合微米以下級別過濾

　　可用于高通量樣本處理

　　無死腔體積，高回收率

　　各個微孔分別封裝濾膜，孔 / 板間穩(wěn)定性好，無相互干擾

　　尺寸符合 ANSI/SBS 標準，便于自動化

　　可取下的導(dǎo)流板和獨特的過濾板設(shè)計

　　可配合負壓法或離心法使用

　　配套的收集板和蓋子

　　應(yīng)用：

　　蛋白質(zhì)激酶 / 磷酸酶分析、蛋白純化、受體結(jié)合作用分析、蛋白結(jié)合測定、ELISPOT 分析、樣品制備、質(zhì)譜分析前樣本過濾處理、熒光染料的去除等。

　　配有 MCE 微孔濾膜的微孔過濾板，應(yīng)用于 DNA 雜交，ELISPOT 及蛋白質(zhì)結(jié)合測定。

　　96孔微孔過濾板，50-250μL，親水性MCE，0.45μm

　　96孔微孔過濾板，50-250μL，親水性MCE，0.22μm

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