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如何解決在SPE操作時(shí)遇到流速慢的問題嗎？

文中仔細(xì)分析了在SPE的基本操作階段中

引發(fā)流速慢這類問題的主要原因。

今天我們主要給大家分享一下，

在方法偏離的情況下,

如何對(duì)實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行有效優(yōu)化。

在實(shí)驗(yàn)過程中，我們經(jīng)常遇到方法偏離。方法偏離主要是發(fā)生在人機(jī)料法環(huán)測(cè)這幾個(gè)方面。實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常遇到的樣品量不同，前處理儀器不同這些都是很常見的偏離問題。那么在面對(duì)這樣的問題的時(shí)候，我們?cè)撛鯓訉?duì)于整個(gè)樣品前處理過程的產(chǎn)生一個(gè)合理分析并對(duì)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行有效的優(yōu)化調(diào)整呢？

今天我們給大家分享一個(gè)案例，通過這個(gè)案例，希望對(duì)您的實(shí)驗(yàn)有所啟發(fā)。

這個(gè)案例來自我們的客戶A。客戶A是做雪碧里合成著色劑檢測(cè)。參考標(biāo)準(zhǔn)是GB 5009.35-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)適用于飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑的測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)中用聚酰胺粉末吸附法或液液萃取分配法提取食品中人工合成著色劑，將其制成水溶液，再用高xiao液相色譜儀分析。這個(gè)國標(biāo)的檢測(cè)方法比較繁瑣，并且赤蘚紅不能與其他色素一起測(cè)定，應(yīng)用到實(shí)際檢測(cè)時(shí)，很多老師都覺得實(shí)驗(yàn)過程過于復(fù)雜，難于操作。

針對(duì)這個(gè)國標(biāo)，安譜實(shí)驗(yàn)對(duì)其方法進(jìn)行了優(yōu)化，并且成功開發(fā)了食品中合成著色劑檢測(cè)專用小柱。采用高xiao液相色譜法來同時(shí)檢測(cè)食品中8種合成著色劑（莧菜紅、新紅、赤蘚紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃、亮藍(lán)，靛藍(lán)），方法簡(jiǎn)單易行，且回收率高，深受廣大用戶的歡迎。

案例中的客戶A就是使用安譜實(shí)驗(yàn)的合成著色劑專用小柱（SBEQ-CA73-GBT5009.35）來實(shí)驗(yàn)的?？蛻粼?0g的雪碧樣品里面加20ul,1000ug/ml的色素混標(biāo)，采用全自動(dòng)固相萃取儀按照安譜實(shí)驗(yàn)合成著色劑專用柱的實(shí)驗(yàn)方法中SPE的洗脫程序運(yùn)行，結(jié)果發(fā)現(xiàn)亮藍(lán)在的回收率不佳?？蛻粝Ｍ覀兡軒兔?yōu)化下實(shí)驗(yàn)方法。

面對(duì)客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)步驟優(yōu)化的訴求，我們仔細(xì)分析了客戶目前的實(shí)驗(yàn)方法。

根據(jù)表格中兩種方法的對(duì)比，可以看出客戶和安譜實(shí)驗(yàn)合成著色劑專用柱方法主要不同點(diǎn)是樣品量不同而帶來的。一是客戶是按照國標(biāo)的取樣要求，需要20g的樣品。而我們實(shí)驗(yàn)單頁的樣品取樣量則為1g，具體到上樣量，客戶的上樣量是約23ml，而我們的上樣量約12ml?？蛻舻纳蠘恿考s為我們的2倍，二是客戶的淋洗液和洗脫液也根據(jù)上樣量而都擴(kuò)大了2倍。最hou就是客戶是用自動(dòng)固相萃取裝置進(jìn)行SPE操作的，和手動(dòng)的固相萃取方法在流速控制上還是有差異的。由此可見，客戶的方法偏離主要體現(xiàn)在樣品取樣量，溶劑體積以及所用的儀器上。

客戶反饋實(shí)驗(yàn)結(jié)果亮藍(lán)的回收率不佳，希望能夠改善亮藍(lán)的回收率。針對(duì)客戶的訴求，我們應(yīng)該有如下思路來解決這個(gè)回收率的問題。

1  確定目標(biāo)化合物主要損失步驟

亮藍(lán)的回收率不佳，說明亮藍(lán)在洗脫前的實(shí)驗(yàn)過程中有損失。針對(duì)這種情況，我們需要先確定亮藍(lán)的主要損失步驟。

這里我們可以引入SPE操作過程中一個(gè)非常實(shí)用的實(shí)驗(yàn)技巧——分步收集。

分步收集就是通過收集上樣液，淋洗液，洗脫液,并上機(jī)分析，從而判斷目標(biāo)化合物具體損失的環(huán)節(jié)，明確實(shí)驗(yàn)步驟中具體需要優(yōu)化的環(huán)節(jié)。

根據(jù)我們的建議，客戶先實(shí)施了分步收集，發(fā)現(xiàn)亮藍(lán)在上樣液中未被檢出，淋洗環(huán)節(jié)有檢出。說明亮藍(lán)在小柱上能夠很好的被吸附，所以上樣液中無亮藍(lán)。但是在淋洗的時(shí)候被洗脫下來，所以淋洗部分是亮藍(lán)回收率損失的主要部分。

2  分析目標(biāo)化合物主要損失的原因

通過前面分步收集，我們發(fā)現(xiàn)客戶的樣品中亮藍(lán)的主要是在淋洗過程中損失的。那么接下來就需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理分析亮藍(lán)損失的原因。

合成著色劑專用小柱的填料可與酚類、酸類、蒽醌類等成分形成氫鍵，因而產(chǎn)生吸附作用。合成著色劑的分子結(jié)構(gòu)中帶有磺酸基團(tuán)，羥基等。故能在酸性溶液中能與人工合成色素形成氫鍵牢固地結(jié)合，從而與天然色素、蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉等物質(zhì)分離。然后在堿性條件下能夠解吸色素。但填料對(duì)天然色素的吸附并不不緊密，天然著色劑在酸性條件下能夠被去除。所以在我們的實(shí)驗(yàn)過程中，會(huì)用甲醇-甲酸-水溶液去淋洗小柱，去除天然色素的干擾。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理我們不難發(fā)現(xiàn)，淋洗的目的主要是去除天然色素的干擾。而我們的目標(biāo)化合物亮藍(lán)是一種易溶于水的合成著色劑。不難發(fā)現(xiàn)，在這種情況下，淋洗溶液和亮藍(lán)之間也會(huì)存在一定的分子間作用力，當(dāng)淋洗液體積達(dá)到一定程度的時(shí)候，極易溶于水的亮藍(lán)就容易被淋洗液淋洗下來。

3  提出合理的改進(jìn)意見

根據(jù)前面的步驟我們發(fā)現(xiàn)淋洗液和目標(biāo)化合物亮藍(lán)之間的分子間作用力可能是造成亮藍(lán)損失的主要原因。那么在這種情況下我們需要怎樣改進(jìn)實(shí)驗(yàn)過程呢？針對(duì)這個(gè)案例我們考慮到客戶基質(zhì)是碳酸飲料雪碧，本身基質(zhì)中成分比較簡(jiǎn)單。而淋洗的目的主要是去除天然色素，所以在對(duì)于雪碧這種基質(zhì)而言淋洗這一步并不是關(guān)鍵步驟，可以減少用量。建議將10ml的淋洗液體積降至5ml，并且適當(dāng)降低流速。

4  實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

客戶根據(jù)我們的建議改進(jìn)實(shí)驗(yàn)條件后，發(fā)現(xiàn)亮藍(lán)在淋洗時(shí)不再被洗脫下來，回收率能達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

根據(jù)上面的案例分析，我們不難發(fā)現(xiàn)，在面對(duì)實(shí)際檢測(cè)工作中的方法偏離問題時(shí)，我們需要做的是冷靜的比較方法的主要偏離點(diǎn)，并明確目標(biāo)化合物的主要損失步驟，經(jīng)過仔細(xì)思考，大膽推測(cè)，認(rèn)真實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證找到解決問題的方向。

路漫漫其修遠(yuǎn)兮，

吾將上下而求索。

實(shí)驗(yàn)過程本身就是不斷探索創(chuàng)新的過程，

遇到困難和問題不用慌張，

安譜實(shí)驗(yàn)一直在您身邊，

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引言

藥物劑型作為制造有效藥的基礎(chǔ)，正在變得越來越重要。成功研發(fā)一種新劑型，在介紹和推廣最 先進(jìn)的制藥技術(shù)時(shí)，配方的研發(fā)往往非常關(guān)鍵。這些藥物劑型的可制造性和生物可用性通常取決于個(gè)別成分的特點(diǎn)。正因如此，對(duì)藥物顆粒的體積特性精確監(jiān)測(cè)極其重要，如粉體和懸浮液。

01 顆粒表征

常規(guī)上，體材料的特征很大程度上取決于單個(gè)顆粒的特征（例如，形態(tài)、表面質(zhì)地、脆性等）?？梢钥隙ǖ卣f，在粒子的多種特性當(dāng)中，它們的物理形貌往往是最關(guān)鍵?？上У氖?，形貌在絕 對(duì)意義上難以描述。例如，沒有兩個(gè)完全一樣的顆粒。正因?yàn)槲锢硇蚊搽y以描述，收集顆粒的特征通常被簡(jiǎn)化為顆粒的尺寸和形狀。

02 高分辨成像

盡管顆粒系統(tǒng)在數(shù)量規(guī)模和形狀評(píng)估技術(shù)上取得了進(jìn)步，但這遠(yuǎn)不能充分地描述顆粒形貌。一眼觀察到的東西勝過千言萬語的描述，分析工具要實(shí)現(xiàn)在定性的基礎(chǔ)上評(píng)估活性物質(zhì)，輔料，中間體和最 終產(chǎn)物。

既然直接觀察就要做出許多評(píng)價(jià)和決定，那研究者需要一個(gè)快速可靠的解決方案。飛納臺(tái)式掃描電鏡是對(duì)從納米級(jí)到毫米級(jí)藥物粉體進(jìn)行有效表征的理想解決方案。此外，它可以提供遠(yuǎn)高于任何光學(xué)顯微鏡所獲得的高分辨率顯微圖像。

首先最吸引眼球的是設(shè)備的精巧設(shè)計(jì)。一旦上手操作，飛納電鏡功能非常強(qiáng)大并極易使用?；谶@些技術(shù)，它不再依賴于任何熟練的操作員，也不需要重金投入高端 SEM 裝置。誠如所述，在我們的顆粒表征實(shí)驗(yàn)室安裝一臺(tái)飛納電鏡吧，真的沒有比這更快速獲得投資回報(bào)的選擇了。

有了飛納臺(tái)式掃描電鏡，我們不再依賴有操作經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)員，也不需要投資昂貴的高端 SEM 設(shè)備。

—— Dr. Arjen P. Tinke（強(qiáng)生公司首席科學(xué)家）