果聚糖是由果糖聚合而成的線型或分支型的多糖總稱。果聚糖是一類有利于人體健康的碳水化合物，進(jìn)入結(jié)腸后可以成為腸胃菌的營養(yǎng)物質(zhì)。GB5009.255—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中果聚糖的測定》規(guī)定了食品中果聚糖含量的離子色譜法測定方法，適用于乳及乳制品、嬰幼兒配方食品、嬰幼兒谷類輔助食品、固體飲料、配制酒中單獨(dú)添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的測定。

果聚糖的測定過程中您是否遇到過困難？

蔗糖酶，果聚糖酶的選擇和使用您是否有過疑問?
 

參照方法，聚焦產(chǎn)品，

安譜實(shí)驗(yàn)帶您一起解讀

果聚糖測定過程中的那些事兒！

實(shí)驗(yàn)原理

試樣經(jīng)熱水浸提,樣液中的蔗糖經(jīng)蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖經(jīng)硼氫hua鈉還原成相應(yīng)的糖醇,多余的硼氫hua鈉用乙酸中和。樣液中的果聚糖經(jīng)過果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖,經(jīng)離子色譜-脈沖安培檢測器測定果糖含量,通過換算系數(shù),折算得到果聚糖的含量。

實(shí)驗(yàn)過程

檢測條件（參考GB5009.255—2016中儀器參考條件2）

實(shí)驗(yàn)譜圖

▲圖一：果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（16mg/L）

▲圖二：果糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

▲圖三：彩面樣品色譜圖

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.彩面中的果聚糖含量 

2.質(zhì)控樣及標(biāo)準(zhǔn)品回測結(jié)果

產(chǎn)品信息

小貼士

如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法選擇適用的酶并進(jìn)行配置？（GB5009.255-2016方法中用到兩種酶，蔗糖酶和果聚糖酶）

一、若所選酶和方法一致，則可直接按照方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如GB5009.255-2016中蔗糖酶，方法中具體要求如下：

3.1.3 蔗糖酶:來源于酵母,酶活力≥300U。

3.2.3 蔗糖酶溶液(4.5U/mL):將蔗糖酶(活力為300U)溶解于66mL馬來酸鈉緩沖溶液,分裝到2mL的離心管中,-20℃保存,可放置6個(gè)月。使用前需測定酶活力。

安譜實(shí)驗(yàn)提供的蔗糖酶：CFHN-E-SUCR，蔗糖酶 300 Units，和方法要求的酶活一致，可按照方法3.2.3直接進(jìn)行稀釋實(shí)驗(yàn)。

二、若所選酶和方法不一致，則需要根據(jù)方法中所用酶活進(jìn)行換算后實(shí)驗(yàn)。如GB5009.255-2016中果聚糖酶，方法中具體要求如下：

3.1.7 果聚糖酶:來源于黑曲霉,酶活力≥10000U。

3.2.9 果聚糖酶溶液(455U/mL):將果聚糖酶(活力為10000U)溶解于22mL乙酸鈉緩沖溶液,分裝到2mL的離心管中,-20℃保存,可放置6個(gè)月。使用前需測定酶活力。

安譜實(shí)驗(yàn)可提供兩種果聚糖酶：

a：一種溶液型：CFHN-E-FRMXLQ-10mL，果聚糖酶混合物，2,000 U/mL

這里的果聚糖酶的濃度是2,000 U/mL，10ml的總酶活是20000U,是方法中總酶活力的2倍?？蛻粼谑褂眠^程中，只要保證果聚糖酶溶液的濃度為455U/mL，根據(jù)3.2.9方法，可以有兩種配置方法。

①可以量取5mL的E-FRMXLQ溶解于22mL乙酸鈉緩沖溶液進(jìn)行分裝；

②也可以將全部10mL的E-FRMXLQ溶解于44mL乙酸鈉緩沖溶液中進(jìn)行分裝；

b：一種固體型：CFHN-E-FRMXPD，果聚糖酶混合物，20,000 Units

這里的固體型產(chǎn)品以總酶活計(jì)，配置過程需保證果聚糖酶溶液的濃度為455U/mL，即將總酶活為20,000 Units的固體果聚糖酶混合物溶解在44mL乙酸鈉緩沖溶液中進(jìn)行分裝，注意，這個(gè)固體型酶的溶解過程，根據(jù)酶的使用說明書，先將該固體果聚糖酶全部溶解在去離子水中，再用相應(yīng)的緩沖溶液進(jìn)行稀釋。

酶的使用過程中，客戶也可以根據(jù)需要測試的樣品數(shù)量，依照所選酶的具體酶活，換算成需要的量。
 

       2020年《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》(簡稱國抽)與2019年相比，在茶葉的檢驗(yàn)項(xiàng)目中，刪除了除蟲脲、多菌靈、甲氰菊 酯、滴滴涕和特丁硫磷的檢測，新增了內(nèi)吸磷、乙酰甲胺磷、丙溴磷、毒死蜱和莠去津的檢驗(yàn)項(xiàng)目。

導(dǎo)讀

　　迪馬科技按照2020年版國抽細(xì)則的要求，參考《GB 23200.13-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 茶葉中448種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法》、《GB/T 23204-2008 茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》、《GB 23200.113-2018 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法》、《SN/T 4655-2016 出口食品中草甘膦及其代謝物殘留量的測定方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用SPE、QuEChERS結(jié)合GC-MS、UPLC-MS/MS建立了一系列茶葉中農(nóng)藥殘留的檢測方法，系列方法中涵蓋了所有2020版國抽細(xì)則中茶葉檢驗(yàn)項(xiàng)目下的農(nóng)藥，可供廣大分析工作者參考！

方法匯總

SPE-UPLC-MS/MS法

克百威、滅多威、3-羥基克百威、茚蟲威、甲胺磷、氧樂果、啶蟲脒、吡蚜酮、吡蟲啉和內(nèi)吸磷(O+S)

QuEChERS-UPLC-MS/MS法

克百威、滅多威、3-羥基克百威、茚蟲威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敵百 蟲、氧樂果、啶蟲脒、吡蟲啉和內(nèi)吸磷(O+S) 

SPE-GC-MS法

內(nèi)吸磷(O+S)、滅線磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯殺螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、聯(lián)苯菊酯、氯氰菊酯和GX氯氰菊酯、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯

SPE-UPLC-MS/MS法

氨甲基膦酸和草甘膦

方法一：SPE-UPLC-MS/MS法

01 適用范圍

本方法適用于茶葉中的克百威、滅多威、3-羥基克百威、茚蟲威、甲胺磷、氧樂果、啶蟲脒、吡蚜酮、吡蟲啉和內(nèi)吸磷(O+S)的檢測。

02 標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 單標(biāo)儲(chǔ)備液1.0 mg/mL: 準(zhǔn)確稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成1.0 mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液；

(2) 混標(biāo)儲(chǔ)備液5.0 μg/mL: 分別吸取各單標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成5.0 μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液；

(3) 混標(biāo)中間液1.0 μg/mL: 吸取混標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成1.0 μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液。

03 提取

(1) 取10.0 g樣品，加入30 mL乙腈，振蕩5 min，6000 rpm離心5 min，取出上清液；

(2) 向下層殘?jiān)欣^續(xù)加入30 mL、20 mL乙腈，按照步驟(1)重復(fù)提取兩次；

(3) 合并三次提取液，在40 ℃水浴中減壓蒸至1 mL，加入乙腈復(fù)溶，并轉(zhuǎn)移到具塞試管中定容至5 mL，取出1 mL，待凈化。

04 凈化

 ProElut TPC 12 mL (Cat.# 65354)

(1)活化：加入10 mL乙腈-甲苯(3-1)活化，棄去流出液；

(2)上樣：加入1 mL待凈化液，收集流出液；

(3)洗脫：加入25 mL乙腈-甲苯(3-1)，收集流出液，合并(2)和(3)流出液；

(4)重新溶解：將流出液在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5 mL，然后在室溫下用氮?dú)饩徛蹈?，? mL甲醇溶解，上機(jī)分析。

注:  同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液

05 分析條件

5.1 UPLC 條件

色譜柱: Leapsil C18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (Cat#: 86005)

流  速: 0.4 mL/min

進(jìn)樣量: 1 μL

柱  溫: 35 ℃

流動(dòng)相: A: 0.1%甲酸水    B: 乙腈

梯度設(shè)置

5.2 質(zhì)譜條件

電離模式: ESI

掃描方式: 正離子掃描

檢測方式: 多反應(yīng)監(jiān)測

電噴霧電壓: 5500 V

霧化氣壓力: 50 psi

輔助氣壓力: 50 psi

氣簾氣壓力: 20 psi

離子源溫度: 500 ℃

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

06 添加回收結(jié)果

綠茶中10種農(nóng)藥殘留檢測的添加回收結(jié)果(%)

圖1 10 種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品20.0 μg/L的MRM色譜圖

方法二：QuEChERS-UPLC-MS/MS法

01 適用范圍

本方法適用于茶葉中的克百威、滅多威、3-羥基克百威、茚蟲威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敵百 蟲、氧樂果、啶蟲脒、吡蟲啉和內(nèi)吸磷(O+S)的檢測。

02 標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 單標(biāo)儲(chǔ)備液1.0 mg/mL: 準(zhǔn)確稱取適量各標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成1.0 mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液；

(2) 混標(biāo)儲(chǔ)備液5.0 μg/mL: 分別吸取各單標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成5.0 μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液；

(3) 混標(biāo)中間液1.0 μg/mL: 吸取混標(biāo)儲(chǔ)備液，用乙腈配制成1.0 μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液。

03 提取

(1) 取2.0 g樣品，加入10 mL水混勻，浸泡30 min；

(2) 繼續(xù)加入15 mL 乙腈，振蕩5 min；

(3) 加入6 g 無水硫酸鎂和1.5 g乙酸鈉(Cat#: 64520S)，振蕩1 min，6000 rpm離心5 min；

(3) 取出8 mL上清液，待凈化。

04 凈化

ProElut QuE 15 mL Tube (Cat#: 64622)

將待凈化液加入到15 mL ProElut QuEChERS凈化管，渦旋混合1 min，6000 rpm離心5 min，準(zhǔn)確取2 mL上清液于5 mL氮吹管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?，加? mL甲醇，混勻，上機(jī)分析。

注:  同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液

05 分析條件

5.1 UPLC 條件

色譜柱: Leapsil C18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (Cat#: 86005)

流  速: 0.4 mL/min

進(jìn)樣量: 1 μL

柱  溫:  35 ℃

流動(dòng)相: A: 0.1%甲酸水    B: 乙腈

梯度設(shè)置

5.2 質(zhì)譜條件

電離模式: ESI

掃描方式: 正離子掃描

檢測方式: 多反應(yīng)監(jiān)測

電噴霧電壓: 5500 V

霧化氣壓力: 50 psi

輔助氣壓力: 50 psi

氣簾氣壓力: 20 psi

離子源溫度: 500 ℃

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

06 添加回收結(jié)果

綠茶中11種農(nóng)藥殘留檢測的添加回收結(jié)果(%)

圖1 11種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品13.3 μg/L的MRM色譜圖

方法三：SPE-GC-MS法

01 適用范圍

本方法適用于茶葉中內(nèi)吸磷(O+S)、滅線磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯殺螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、聯(lián)苯菊酯、氯氰菊酯和GX氯氰菊酯、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯的檢測。

02 標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1)單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 準(zhǔn)確稱取各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，用甲苯溶解，并定容至刻度；

(2)混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 根據(jù)測定需要，吸取適量體積的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；

(3)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液1: 吸取5 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；

(4)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液2: 吸取1 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度。

03 提取

(1)取5.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，振蕩5 min，8000 rpm離心5 min，收集上層清液；

(2)向下層殘?jiān)性偌尤?5 mL乙腈，按步驟(1)重復(fù)提取一次，合并上清液；

(3)將上清液在40 ℃水浴下減壓蒸至約1 mL，加入6 mL乙腈-甲苯(3-1)溶解，待凈化。

04 凈化

ProElut TPC 12 mL (Cat#: 65354)

(1)活化：加入10 mL乙腈-甲苯(3-1)，棄去流出液；

(2)上樣：將待凈化液加入柱中，收集流出液；

(3)洗脫：加入25 mL乙腈-甲苯(3-1)，合并(2)和(3)流出液；

(4)重新溶解：將洗脫液在40 ℃水浴下減壓蒸干，用乙酸乙酯定容至1 mL，混勻，供GC-MS分析。

注:  同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

05 GC-MS條件

色譜柱：DM-5MS, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm (Cat.# 8231)

進(jìn)樣口溫度: 240 ℃

升溫程序: 初始溫度70 ℃，保持2 min，以25 ℃/min升溫至150 ℃，再以3 ℃/min升溫至200 ℃，再以8 ℃/min升溫至280 ℃，保持12 min

載氣: 氦氣，柱流速: 1.46 mL/min

進(jìn)樣方式: 不分流進(jìn)樣

進(jìn)樣量: 1.0 μL

離子源溫度: 230 ℃

接口溫度: 280 ℃

溶劑延遲: 6 min

電子轟擊電離源(EI): 選擇離子監(jiān)測模式(SIM)，分組監(jiān)測見下表

選擇離子監(jiān)測組表

06 添加回收結(jié)果

綠茶和紅茶中多種農(nóng)藥殘留量的GCMS檢測添加回收結(jié)果

14種農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)(10 ug/mL)TIC圖

方法四：SPE-UPLC-MS/MS法

01 適用范圍

本方法適用于綠茶、花茶、鐵觀音、紅茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測，定量限0.1 mg/kg。

02 標(biāo)準(zhǔn)品配制

單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品，用水配制成1000 μg/mL的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液: 分別吸取各單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液。

03 提取

取1 g茶葉于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振蕩10 min，超聲10 min，8000 rpm離心5 min，取5 mL上清液，待凈化。

04 凈化

ProElut GLY 6 mL (Cat.#:  65938)

(1)活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，棄去流出液；

(2)上樣：將待凈化液加入柱中，棄去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混勻，濾液過0.22 μm尼龍濾膜，上機(jī)分析。

注: 同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

05 UPLC-MS/MS條件

5.1 UPLC 條件

色譜柱: Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#: 99302)

流  速: 0.2 mL/min

進(jìn)樣量: 10 μL

柱  溫: 35 ℃

流動(dòng)相: A: 乙腈 B: 5 mM乙酸銨溶液，氨水調(diào)節(jié)至pH=11

梯度設(shè)置:

5.2 質(zhì)譜條件

電離模式: ESI

掃描方式:   負(fù)離子掃描

檢測方式:   多反應(yīng)監(jiān)測   

電噴霧電壓:   -4500 V

霧化氣壓力:   60 psi  

輔助氣壓力:   60 psi

氣簾氣壓力:   35 psi   

離子源溫度:   550 ℃

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

06 添加回收結(jié)果

茶葉中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS檢測添加回收結(jié)果

相關(guān)產(chǎn)品

       丙酸及其鈉鹽和鈣鹽是面包、糕點(diǎn)、豆類制品、原糧、生濕面制品及醬油和醋中常常添加的防腐劑，用來防止霉菌的生成?！禛B 2760-2014 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定了丙酸及其鈉鹽和鈣鹽的使用范圍和限量。

       2020年《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》(簡稱國抽)與2019年相比，新增了非發(fā)酵性豆制品(腐竹、油皮及其再制品)中丙酸的檢驗(yàn)項(xiàng)目，迪馬科技按照2020年版國抽細(xì)則的要求，參考《GB 5009.120-2016 食品中丙酸鈉、丙酸鈣的測定》建立了多種樣品基質(zhì)中丙酸的檢測方法，采用固相萃取凈化，可耐純水的 Spursil(思博爾) C18液相色譜柱分離，HPLC檢測，大大降低了樣品基質(zhì)帶來的干擾，方法中涵蓋了2020版國抽細(xì)則中需檢測丙酸的樣品基質(zhì)，可供廣大分析工作者參考！

食品中丙酸的測定SPE-HPLC法

1、適用范圍

本方法適用于糕點(diǎn)、月餅、非發(fā)酵性豆制品、醋中丙酸的檢測，定量限0.10 g/kg。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取100 mg標(biāo)準(zhǔn)品至10 mL容量中，用水溶解，并定容至刻度，濃度為10 mg/mL；

標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取1 mL的10 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，濃度為1.0 mg/mL。

3、提取

取5.0 g樣品至100 mL燒杯中，加入20 mL水，加入0.5 mL的1.0 mol/L磷酸溶液，超聲提取10 min，用1.0 mol/L磷酸溶液調(diào)pH為3.0左右，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，將試樣全部轉(zhuǎn)移至50 mL塑料離心管中，靜置5 min，8000 rpm下離心5 min，收集5 mL上清液，待凈化。

4、凈化

ProElut PLS 500 mg/6 mL (Cat.# 68005)

(1)活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水；

(2)上樣：加入待凈化液，棄去流出液；

(3)淋洗：加入5 mL 10%甲醇水溶液，棄去流出液；

(4)洗脫：加入5 mL 40%甲醇水溶液，收集流出液，混勻，供HPLC分析。

5、分析條件

色譜柱：Spursil C18 250 mm × 4.6 mm，5 μm (Cat.# 82006)

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：20 μL

柱溫：25 ℃

檢測器：UV 214 nm

流動(dòng)相：A:1.5 g/L磷酸氫二銨溶液，用1.0 mol/L磷酸溶液調(diào)pH 3.1   B:50%甲醇水溶液

梯度設(shè)置

6、添加回收結(jié)果

糕點(diǎn)、月餅、非發(fā)酵性豆制品、醋中丙酸的添加回收結(jié)果

7、相關(guān)產(chǎn)品