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  高冷專用 2017-05-10 00:00:00

  防止污染的主要措施是： (1 )改善環(huán)境條件。接種室與培養(yǎng)室要定期做好消毒與凈化，接種前工作臺或接種箱要開紫外燈30min以上。培養(yǎng)室的相對濕度應(yīng)控制在70％左右，相對濕度太高時可以用抽濕機抽濕。 （2）接種人員的培訓(xùn)很關(guān)鍵，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，對接種中所需的工具，必須經(jīng)嚴(yán)格滅菌后才能使用。在超凈工作臺的操作區(qū)內(nèi)，不要放入過多的待用材料，避免氣流被擋住。還要定期檢查超凈工作臺的工作質(zhì)量[8]。 (3 )嚴(yán)查接種材料。淘汰被真菌與細(xì)菌污染的接種材料。 （4）經(jīng)常檢查消毒鍋的滅菌質(zhì)量，若發(fā)現(xiàn)問題要立即檢修。消毒鍋的壓力表降到零后不能馬上出鍋，因冷熱空氣作用產(chǎn)生的負(fù)壓效應(yīng)，使外界環(huán)境的冷空氣倒吸入已滅菌的培養(yǎng)瓶內(nèi)引起真菌污染，為避免該現(xiàn)象的發(fā)生，消毒后培養(yǎng)瓶應(yīng)待鍋內(nèi)稍冷卻后才出鍋[9]。 （5）檢查培養(yǎng)容器是否存在問題。培養(yǎng)容器封口多用塑料蓋、膠塞、棉塞、薄膜等，塑料蓋用久了易老化，密封性差，也會造成污染。林盛等配制了一種“4號消毒液”對培養(yǎng)瓶瓶口進(jìn)行消毒處理，可以把培養(yǎng)基污染率控制在0.3％以下[10]。 3 繼代培養(yǎng)中污染的FZ 初始階段所獲得的無菌材料理論上是無菌的，但在后期或繼代培養(yǎng)中也會出現(xiàn)污染，這除了操作不慎帶菌外，繼代材料在培養(yǎng)室也可能被螨傳播的真菌污染。這類污染可從兩方面防止：（1）擴大繁殖時應(yīng)有合理的程序。在獲得了Z初的無菌培養(yǎng)物之后應(yīng)將其中一部分作為“原種”保存起來，分批繁殖和復(fù)檢后再提供給大規(guī)模生產(chǎn)。（2）可通過在培養(yǎng)基中加入KJ劑來防止[3]。許婉芳等將多菌靈用于金線蓮組織培養(yǎng)的YJ促生長，效果明顯優(yōu)于甲霜靈、甲基托布津及混合物，在含有多菌靈的培養(yǎng)基中生長的金線蓮，不受微生物污染，滅菌率達(dá)，無白化苗，苗健壯[11]。 對植物中的內(nèi)生細(xì)菌，由于它潛伏得較深，表面消毒方法無法將其消除，有時在外植體的初期培養(yǎng)中，包括前幾代的繼代培養(yǎng)，往往在培養(yǎng)基上不易被肉眼察覺，隨著繼代次數(shù)增加，菌量逐漸累積發(fā)展，才在培養(yǎng)基上顯現(xiàn)出來[12]。黃小榮等則認(rèn)為植物組培中細(xì)菌污染的原因是休眠細(xì)菌芽孢萌發(fā)的結(jié)果[13]?？梢酝ㄟ^在培養(yǎng)基中添加KJ素、莖尖培養(yǎng)、降低PH值等措施防止和減少細(xì)菌等內(nèi)生菌污染。 王亦菲等在彩色海芋快速繁殖至4～5代時，添加200mg/L的青霉素GK，能有效YZ內(nèi)生菌的生長，且不影響繁殖系數(shù)[14]。翟建中等在長春蔓的組織培養(yǎng)中，對了YZ內(nèi)生細(xì)菌 Xanthomonas sp.，使用鏈霉素的作用大于慶大霉素和頭孢唑林鈉，培養(yǎng)基中同時使用二種KJ素，有利于FZ細(xì)菌的抗藥性，能較長時期地控制細(xì)菌污染的發(fā)展，但鏈霉素劑量，會對植物產(chǎn)生毒性[15]。 在培養(yǎng)基中添加KJ劑，選擇合適的濃度非常關(guān)鍵，濃度低了效果差而濃度高又容易對植物產(chǎn)生毒害，影響增殖或使培養(yǎng)的材料變黑，出現(xiàn)死苗、白化苗等。兩種或兩種以上的抗生素結(jié)合使用可以FZ細(xì)菌的抗藥性?？股睾投嗑`等一般不耐高溫，需要采用過濾滅菌，在生產(chǎn)中添加起來很不方便，而苯甲酸鈉、山梨酸鉀、丙酸鈉等常用作食品中的防腐劑，能耐高溫高壓，在組培生產(chǎn)中使用比較方便。 植物材料中的內(nèi)生菌也可采用反復(fù)莖尖培養(yǎng)的方法來脫除。因為致病菌在植物體內(nèi)的分布是不均勻的，通過維管束傳播，莖尖分生組織是不帶菌的，通過反復(fù)的莖尖培養(yǎng)既可脫除內(nèi)生菌又可脫病毒。 除了歐文氏菌屬外，大多數(shù)細(xì)菌在介質(zhì)PH小于4.5時不能生長。在紫苑屬、鳶尾屬、薔薇屬植物組織培養(yǎng)中，將培養(yǎng)基的PH值由5.8調(diào)至3.9～4.3，可防止大量的細(xì)菌污染[7]。胡慶等用低PH值（3.10）水培并改善容器通氣條件，能使嚴(yán)重細(xì)菌污染的綠巨人團塊正常增殖，對單株的生長無害，可生根的苗的比例比常規(guī)固培要高，基本解決了遭嚴(yán)重細(xì)菌污染后仍能帶菌生產(chǎn)的問題[16]。 對已污染的培養(yǎng)物，有時因植物材料難得或重新發(fā)生要花費很多時間，也可切取較大的植株重新消毒接種。李春燕等用400或600萬單位/L的青霉素?zé)o菌水溶液分別浸泡銀白楊組培細(xì)菌污染苗60min或40min，可有效FZ組培中的細(xì)菌污染。經(jīng)處理過的苗繼代培養(yǎng)時，不再重復(fù)出現(xiàn)細(xì)菌污染現(xiàn)象，且苗分化能力強，生根培養(yǎng)時，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率高[17]。李穎等的實驗研究證明，如果繼代培養(yǎng)中只有真菌污染，采用3%的多菌靈無菌液浸泡0.5h以上即可，用無菌水沖洗后接種或不用無菌水沖洗直接接種都可消除真菌污染。如果在細(xì)菌污染和細(xì)菌、真菌同時污染的情況下，可采用 HgCl2消毒法，把污染的培養(yǎng)苗切割成較長的莖段作外植體，用自來水沖洗0.5h，再在超凈工作臺上用乙醇和HgCl2進(jìn)行短時間的處理即可再度建立無菌苗培養(yǎng)體系[18]。 4 減少培養(yǎng)基中的有機成分 培養(yǎng)基中有機物的存在是污染產(chǎn)生的重要原因，去除有機物也是減少污染的一條途徑。宋鋒惠等在阿月渾子的組織培養(yǎng)中，除去培養(yǎng)基中的VB1、VB6、煙酸等（保留肌醇）有機成分，經(jīng) 2～3代培養(yǎng)后，能YZ細(xì)菌生長，對叢生芽生長增殖沒有影響。原因是這些都是某些細(xì)菌生長的必需物質(zhì)，除去這些有機物后，細(xì)菌無法生長發(fā)育，逐漸死亡減少[19]。由日本的古在豐樹教授shouchuang的植物無糖組培快繁技術(shù)則完全除去了培養(yǎng)基中的有機成分，輸入可控制量的CO2氣體作為碳源，并通過控制環(huán)境因子，促進(jìn)植株光合作用速率，使之由異養(yǎng)型轉(zhuǎn)變?yōu)樽责B(yǎng)型，因而植株長勢良好，污染率明顯降低[20]。由于去除了糖，組培苗由玻璃瓶內(nèi)培養(yǎng)改為箱式大容器培養(yǎng)，也可以整個培養(yǎng)室作為培養(yǎng)容器，甚至不需要嚴(yán)格的無菌操作，也極少污染，這項技術(shù)至少在許多植物組培苗的促根階段應(yīng)用是十分成功的。 美國進(jìn)口普衛(wèi)欣天 貓有效防霧霾出門做好防護(hù) 口罩的阻塵效率的高低是以其對微細(xì)粉塵，尤其對 2.5微 米以下的呼吸性粉塵的阻隔效率為標(biāo)準(zhǔn)。因為這一粒徑的粉塵能直接入肺泡，對人體健康造成的影響Z大。紗布口罩，其阻塵原理是機械式過濾，就是當(dāng)粉塵沖撞到紗布時，經(jīng)過—層層的阻隔，將一些大顆粒粉塵阻隔在沙布中。對于一些微細(xì)粉塵，尤其是小于2.5微米的粉塵，就會從紗布的網(wǎng)眼中穿過去，進(jìn)入呼吸系統(tǒng)。防塵口罩，其濾料活性炭纖維氈墊或無紡布組成，那些小 于 2.5微米的呼吸性粉塵在穿過此種濾料的過程中。

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