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  huitoushian510 2015-07-27 00:00:00

  染原因1.1 外植體 ①年齡、種類和大小。成年植株帶菌多；生理年齡老的材料帶菌多；雜菌和內(nèi)生菌多的外植體、有病蟲害的植株，均易污染；室外生長的材料帶菌多；表面有泥土的材料、地下器官均帶菌多；表面積大的材料比表面積小的材料帶菌多[1-2]。 ②取材時期和部位。雨季菌類繁殖旺盛，此時材料帶菌多；陽光Z強時紫外線較強，殺菌效果好，此時材料帶菌較少；選取了不清潔、生長不旺盛部位的材料帶菌多[1]。 ③滅菌效果。外植體滅菌是組織培養(yǎng)的關(guān)鍵，滅菌效果直接決定了組織培養(yǎng)的成敗，滅菌方法和滅菌劑處理不當(dāng)導(dǎo)致滅菌效果差，使外植體帶菌。1.2 組織培養(yǎng)過程中各技術(shù)環(huán)節(jié)操作不規(guī)范①培養(yǎng)基。使用長菌的母液配制培養(yǎng)基；培養(yǎng) 基pH值高、添加的有機成分均可導(dǎo)致細菌污染；培養(yǎng)基分裝好后沒有及時封口或封口后沒有立即滅菌；培養(yǎng)容器口沒有封嚴導(dǎo)致滅菌后細菌和真菌孢子再次進入培養(yǎng)容器使培養(yǎng)基污染；封口用的塑料蓋、封口膜長時間在日光燈照射下易老化、破裂，導(dǎo)致密封性差，不慎使用后可能導(dǎo)致培養(yǎng)基污染；橡皮筋長時間在日光燈照射下也易松動、斷裂，雜菌可能趁機進入培養(yǎng)容器；滅菌方法不當(dāng)導(dǎo)致培養(yǎng)基污染；滅菌時間過短導(dǎo)致培養(yǎng)基滅菌不徹底；滅菌時間達到后立即打開滅菌鍋，導(dǎo)致容器內(nèi)壓力差過大，使外部雜菌有可能被倒吸入容器中[1]；過濾較多溶液后，濾膜過濾效果較差，使過濾后的溶液有菌，加入培養(yǎng)基后造成污染。 ②培養(yǎng)容器和接種器具。培養(yǎng)容器不清潔；培養(yǎng)容器被污染后滅菌不徹底，再次使用時導(dǎo)致污染；高壓滅菌鍋或烘箱內(nèi)培養(yǎng)容器、接種器具裝得過滿，影響滅菌效果；培養(yǎng)容器、接種器具滅菌時間過短導(dǎo)致滅菌不徹底；滅菌結(jié)束后立即打開高壓滅菌鍋或烘箱，強烈的冷熱對流會導(dǎo)致冷空氣被吸入包扎層內(nèi)而重新造成污染帶菌[1]。 ③接種人員。過長指甲；雙手未清洗干凈；衣服和頭發(fā)有很多灰塵，接種時不換拖鞋、接種服、帽子和口罩；不慎將已污染的培養(yǎng)材料拿入超凈工作臺，轉(zhuǎn)接后再次污染；培養(yǎng)容器中接種的培養(yǎng)物過多；超凈工作臺上物品擺放過多、過高使氣流被擋住，導(dǎo)致滅菌效果差；接種時說話或咳嗽會呼出大量細菌；操作時手超出工作臺面；手接觸培養(yǎng)容器邊緣，放在器皿、接種器械上方致使微生物落入培養(yǎng)容器中；打開培養(yǎng)容器的塞子、蓋或封口膜時空氣進入帶來灰塵；接種過程中器械被手或帶菌材料污染后未經(jīng)消毒，再次使用后又污染了材料；沒有在超凈工作臺下風(fēng)方向操作而使菌類隨風(fēng)飄落到容器中[3]；中途離開超凈工作臺后馬上又繼續(xù)接種，將培養(yǎng)基、器械等物品拿入超凈工作臺繼續(xù)接種而帶入灰塵，順風(fēng)飄入器皿。服裝、帽子、口罩、拖鞋長期穿戴后較臟，表面有大量灰塵，未經(jīng)清洗反復(fù)穿戴后造成污染。 美國進口普衛(wèi)欣天 貓有效防霧霾出門做好防護④接種室和培養(yǎng)室。人員的進出導(dǎo)致接種室和培養(yǎng)室空氣中存在大量細菌和真菌，尤其是接種過程中非工作人員的進出；接種室設(shè)計不合理，造成室內(nèi)灰塵、細菌過多；超凈工作臺置于灰塵太多的地方，過濾裝置使用過久、保養(yǎng)不當(dāng)造成失效；組培室、接種室門窗封閉不嚴，蒼蠅等趁機飛入，利于雜菌傳播；培養(yǎng)室面積大易污染，室內(nèi)溫度高、空氣濕度大，菌類繁殖旺盛也會加重污染

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