雜交瘤技術(shù)又稱細胞融合技術(shù)，是將兩個或多個細胞融合成一個。 融合后形成的雜交瘤細胞承襲了兩親本細胞的特征。 自發(fā)的細胞融合很少發(fā)生，當加入一種融合劑，如：聚乙二醇（常用）、仙臺病毒或溶血卵磷脂后，兩種細胞就可發(fā)生融合。 首先是質(zhì)膜互相融合，形成具有兩個或多個核的異核體，細胞進一步分裂時，核互相融合，形成了雜交細胞。

雜交瘤技術(shù)優(yōu)缺點：

優(yōu)點：與傳統(tǒng)的免疫動物方法制備抗體相比，利用雜交瘤技術(shù)可以制備出高純度的單抗，并且可以進行單克隆抗體的大量生產(chǎn)。

缺點：a.操作步驟繁瑣。b.利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)出的單克隆抗體多為鼠源性，而鼠源性抗體在應(yīng)用中有諸多問題，例如被人類免疫系統(tǒng)所識別，產(chǎn)生人抗鼠抗體( HAMA）反應(yīng)、在人體循環(huán)系統(tǒng)中很快被清除等。

雜交瘤技術(shù)應(yīng)用：

①診斷應(yīng)用：單克隆抗體在疾病診斷中發(fā)揮了重要作用，其優(yōu)點在于診斷準確且無交叉反應(yīng)，例如在乙型肝炎及潛伏的乙型肝炎病毒的診斷中，單克隆抗體能顯著減少假陰性的漏診。

②治-療載體：單克隆抗體也可作為治-療疾病的載體。通過與抗腫瘤藥物結(jié)合，單克隆抗體能在體內(nèi)選擇性集中攻擊腫瘤細胞，具有靶向性，從而減少對正常組織的損傷并減輕抗-癌藥物的副作用。因此，載藥單克隆抗體被譽為“生物導-彈”。

③異種蛋白質(zhì)問題：目前大多數(shù)單克隆抗體為鼠-鼠型，對于人體來說屬于異種蛋白質(zhì)，容易引起排異反應(yīng)，限制了其在治-療中的應(yīng)用。

④人-人型單克隆抗體的研究：為了解決排異問題，研究者正在努力研發(fā)人-人型單克隆抗體，以利于其在治-療中的廣泛應(yīng)用。

雜交瘤技術(shù)常見問題解析：

①電融合和PEG融合的區(qū)別？

PEG化學融合是利用聚乙二醇分子能夠改變細胞膜結(jié)構(gòu)的特性來實現(xiàn)細胞融合的過程。聚乙二醇可以使兩個細胞接觸點質(zhì)膜的脂質(zhì)分子發(fā)生疏散和重組，兩個細胞接觸部位的質(zhì)膜由于相互親和以及彼此的表面張力作用，從而發(fā)生細胞融合。電融合則是先通過高頻交流電壓，使細胞成串珠狀排列，實現(xiàn)點接觸；然后施加方波脈沖，擊穿兩個細胞接觸部位的質(zhì)膜，質(zhì)膜脂質(zhì)分子發(fā)生重組，同時由于細胞表面張力作用，完成細胞融合。電融合法比PEG融合法有明顯的優(yōu)點：細胞融合率高，有利于雜交瘤的篩選；電脈沖擊穿對細胞的損傷小，有利于融合后細胞的生長增殖；可直接觀察融合過程；便于有目的地控制選擇融合條件。

②為什么要推薦進行2~3輪有限稀釋獲得穩(wěn)定的雜交瘤細胞株？

陽性單克隆細胞的獲得通常進行至少2輪有限稀釋，原因主要考慮兩點。第一，有限稀釋過程中，大多數(shù)是通過實驗者在顯微鏡下觀察細胞團狀態(tài)來判定是否是單克隆，存在一定的主觀經(jīng)驗值，至少進行兩輪有限稀釋可以增加判斷的準確性；第二，雜交瘤細胞由兩個細胞融合而成，存在基因的不穩(wěn)定性，連續(xù)2輪有限稀釋，客觀上增加了篩選中細胞培養(yǎng)時間，有利于淘汰不穩(wěn)定的雜交瘤細胞株。

③為什么要使用核酸免疫？

重組蛋白由于免疫靶向明確、劑量可控等優(yōu)勢，通常作為動物免疫階段的首-選免疫原。但有些重組蛋白因為表達純化困難，很難大量獲得并用于動物免疫；另外，重組蛋白與天然樣本之間存在或多少的結(jié)構(gòu)差異。而核酸免疫，跳過了蛋白表達純化的過程，成功避開了蛋白生產(chǎn)的難題，通過核酸體內(nèi)表達的蛋白結(jié)構(gòu)也更加接近天然蛋白，故而可以作為重組蛋白免疫的有效補充手段。但核酸免疫的免疫劑量很難判斷，整體免疫效價也會普遍低于蛋白和多肽免疫。

④除弗氏佐劑之外，免疫佐劑還有哪些？

免疫佐劑是指那些同抗原一起或預先注入機體內(nèi)能增強機體對抗原的免疫應(yīng)答能力或改變免疫應(yīng)答類型的輔助物質(zhì)。佐劑的免疫生物學作用是增強免疫原性、增強抗體的滴度、改變抗體產(chǎn)生的類型、引起或增強遲發(fā)超敏反應(yīng)等。除經(jīng)典的弗氏佐劑外，各類不同功能的佐劑也層出不窮，比較常見的有：1）無機佐劑，如磷酸鋁佐劑、氫氧化鋁佐劑；2）生物類佐劑，如以細菌胞壁或產(chǎn)物為主要組成的佐劑；3）具有佐劑活性的細胞因子類，如GSF、IL1、IL2、IFN -γ等；4）人工合成佐劑，如cpG等。

⑤雜交瘤融合后主克隆接種96孔細胞培養(yǎng)板數(shù)量通常是多少？

融合后的主克隆細胞接種96孔細胞培養(yǎng)板的數(shù)量與融合效率和脾細胞多少有密切關(guān)系。PEG化學融合后的主克隆，通常一只小鼠的脾細胞可以接種8-15塊96孔細胞培養(yǎng)板；電融合因為融合效率大大提高，通常一只小鼠的脾細胞可以接種30~50塊96孔細胞培養(yǎng)板。

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