一、DNA帶模糊

原因：

1.DNA降解；

2.電泳緩沖液陳舊；

3.所用電泳條件不合適；

4.DNA上樣量過多；

5.DNA樣含鹽過高；

6.有蛋白污染；

7.DNA變性。

解決辦法：

1.避免核酸酶污染；

2.電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；

3.電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過20V/cm，溫度<30℃;巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)<15℃;核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力；

4.減少凝膠中DNA上樣量；

5.電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽；

6.電泳前酚抽提去除蛋白；

7.電泳前勿加熱，用20mM NaCI緩沖液稀釋DNA。

二、帶弱或無DNA帶

原因：

1.DNA的上樣量不夠；

2.DNA降解；

3.DNA走出凝膠；

4.對(duì)于EB染色的DNA，所用光源不合適。

解決辦法：

1.增加DNA的上樣量；聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高，上樣量可適當(dāng)降低；

2.避免DNA的核酸酶污染；

3.縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度；

4.應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源。

三、DNA帶缺失

原因：

1.小DNA帶走出凝膠；

2.分子大小相近的DNA帶不易分辨；

3.DNA 變性；

4.DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適。

解決辦法：

1.縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度；

2.增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度；

3.電泳前請(qǐng)勿高溫加熱DNA鏈，以20mM NaCl Buffer稀釋DNA；

4.在脈沖凝膠電泳上分析。

         液相色譜儀除了日常維護(hù)保養(yǎng)外，使用高純度溶劑不僅能保護(hù)液相系統(tǒng)，也能增加結(jié)果的可靠性。HPLC級(jí)表示化學(xué)試劑的純度，是可在GX液相色譜中使用的試劑的純度，制備色譜法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC級(jí)試劑。

         樣品在注入液相系統(tǒng)前，必須選擇一種合適的HPLC溶劑。在反相GX液相色譜中，當(dāng)樣品溶劑與流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度有差異,尤其是前者的洗脫強(qiáng)度較強(qiáng)時(shí),就會(huì)產(chǎn)生峰的變形及柱效的降低。解決該問題最有效的方法是使用流動(dòng)相作為溶劑溶解樣品,這樣既可以避免樣品溶劑和流動(dòng)相之間任何強(qiáng)度或粘度的不匹配，也可以減少樣品分析時(shí)基線的漂移。溶劑在流動(dòng)相中起著重要的作用，并有助于將進(jìn)樣品通過分離柱后輸送到檢測(cè)器。為了滿足不同的分析要求，可以購買不同純度等級(jí)的溶劑來使用，HPLC分析需要使用高純度的溶劑，但是同時(shí)也要考慮成本和實(shí)用性等方面。

         HPLC級(jí)溶劑的純度通常超過99.9％，并且瓶身標(biāo)簽上還會(huì)標(biāo)明其他雜質(zhì)的含量。但是雜質(zhì)會(huì)導(dǎo)致多余的峰，從而干擾色譜圖中的主峰，對(duì)我們的分析結(jié)果產(chǎn)生干擾。雜質(zhì)產(chǎn)生的原因有很多，可能溶劑純度不夠，可能是瓶身不干凈或者軟管不干凈，還可能是溶劑吸濾頭的過濾雜質(zhì)效果不好。恒譜生不銹鋼流動(dòng)相進(jìn)樣口過濾器能安全有效地保護(hù)泵和止回閥，尺寸小，適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)和多種小瓶口的存儲(chǔ)池容器。吸濾阻力較小，幾乎沒有背壓和形成空化，兼容多種流動(dòng)相管路，無需換吸濾頭即可配不同規(guī)格的吸管，過濾微粒污染物效果好，無氣泡，溶劑利用率高。

        在整個(gè)紫外線可見波長(zhǎng)范圍內(nèi)，沒有溶劑是100％透明的，常用的HPLC溶劑在一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)顯示出透明性。大多數(shù)應(yīng)用中會(huì)使用紫外線檢測(cè)器，因此所選的溶劑應(yīng)該盡可能具有低的紫外線截止波長(zhǎng)，讓大多數(shù)的樣品組分在高于截止值的波長(zhǎng)處顯示出可測(cè)量的吸收度。除此之外，溶劑的粘度越高，填充柱中固定相的阻力將導(dǎo)致背壓越高，因此所選溶劑也應(yīng)具有低粘度才是比較理想的。

        大多數(shù)的溶劑在密封瓶中才能維持它的穩(wěn)定性，但某些溶劑的保存期限有限。使用時(shí)要注意查看使用期，注意在有效期內(nèi)使用，不要購買過多的溶劑避免ZH用不完產(chǎn)生了浪費(fèi)行為。

      作為ZH的建議，所有溶劑在使用前通過進(jìn)樣口過濾器過濾并脫氣，這樣的預(yù)防措施將提高HPLC系統(tǒng)的使用壽命，也有助于增加分析結(jié)果的可靠性。

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