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做液相色譜分析主含量峰總是出現(xiàn)劈峰現(xiàn)象,這是怎么回事?。壳笾附?

自由雞xW 2016-12-01 07:20:22 490  瀏覽
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全部評論(1條)

  • 石上清泉1118 2016-12-02 00:00:00
    流動相不適合待測物,使得待測物以兩種形式存在,根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu),加入適量的鹽或調(diào)節(jié)pH

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伸舌峰一般是由柱過載或柱結(jié)構(gòu)塌陷導(dǎo)致的(發(fā)生伸舌峰的一個原因是色譜柱內(nèi)發(fā)生溝流或色譜柱結(jié)構(gòu)的坍塌)。

如果在制造商推薦的條件下使用色譜柱,這種情況則很少發(fā)生。

大多數(shù)硅膠柱在pH2-8的范圍內(nèi)可以保持穩(wěn)定。

pH低于2時,鍵合相會發(fā)生水解;pH高于8時,硅膠會溶解。

如果(如果您需要)在此pH范圍以外使用(操作)HPLC系統(tǒng),請確保選擇在選定條件下會保持穩(wěn)定的色譜柱。

圖5顯示了因柱過載(色譜柱發(fā)生溝流)導(dǎo)致的伸舌峰。

圖5a中顯示了正常的峰值形(峰形);在大約500次注射(進樣)后,觀察到伸舌峰(圖5b)。

使用這種方法便會出現(xiàn)這種變化,并且在每次運行的過程中會經(jīng)常出現(xiàn)(這種改變是該方法所特有,經(jīng)常在前一次分析結(jié)束后,下一次分析開始時突然發(fā)生)。

出現(xiàn)伸舌峰后,唯yi有效的解決辦法就是更換色譜柱。

該柱為100x2.1mm(直徑(內(nèi)徑)),色譜柱填充5mC18顆粒(柱內(nèi)填充5μm 粒徑的C18填料) 。流動相A是10mM碳酸氫銨(pH9.0) ; B是甲醇(MeOH)。

該方法包括5%B等度洗脫段,接下來是80%B的沖洗(然后用80%B淋洗)。

這種特殊的色譜柱可專門用于高達100%的水流動相,且無封端。

當(dāng)流動相pH值升高時,封端可保護硅膠免于溶解。

在這種情況下,所使用的色譜柱流動相pH應(yīng)遠(yuǎn)高于推薦的范圍,并且無需保護性封端。硅膠在pH為9時會逐漸溶解,直到柱床結(jié)構(gòu)不再穩(wěn)定,并且柱床會發(fā)生移動,
產(chǎn)生空隙(塌陷)或通道,而這又會導(dǎo)致圖5b伸舌峰的形成。

可以使用較低的流動相pH或采用在較高pH下能夠保持穩(wěn)定狀態(tài)的色譜柱,以避免這一問題(避免這一問題)。

圖5. 過載導(dǎo)致的伸舌峰。(a)正常的峰形;(b)伸舌峰。來源[2]。


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