Emulseo乳液破乳劑Fluo-Beaker經(jīng)過(guò)特殊配制，專(zhuān)門(mén)用于氟化油產(chǎn)生的液滴的破碎，從而獲得液滴內(nèi)部的產(chǎn)物，也就是分散相的產(chǎn)物，以便進(jìn)行后續(xù)的產(chǎn)物分析。破乳劑Fluo-Breaker廣泛應(yīng)用于單細(xì)胞分析、水凝膠/氫膠合成、微米和納米顆粒合成、單重乳液滴合成、PLGA合成等。

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摘要：用于靜脈注射的脂質(zhì)注射乳劑是大豆油制的無(wú)菌水包油乳劑，檢測(cè)脂質(zhì)體注射乳劑的平均粒徑大小以及尾端大顆粒分布對(duì)于人體健康顯得十分關(guān)鍵。USP 729著重介紹了采用光散法及光阻法來(lái)檢測(cè)脂質(zhì)注射乳劑平均粒徑以及尾端大顆粒分布的兩種方法。奧法美嘉公司旗下的Nicomp Z3000以及Accusizer A7000 APS兩款儀器很好的滿足了USP 729的要求，為客戶的檢測(cè)提供了完整的解決方案。

關(guān)鍵詞：脂質(zhì)注射乳劑、平均粒徑、尾端大顆粒、Nicomp Z3000、Accusizer A7000 APS

乳狀注射液又稱(chēng)脂肪乳注射液，是水包油的分散體系, 外觀呈半透明或不透明的乳狀液體, 為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。其制備工藝一般采用高壓均質(zhì)法或微射流法, 無(wú)論采用哪種制備方法, 脂肪乳的粒徑都無(wú)法得到完全均一的值, 存在一定粒徑分布范圍。

通常, 在脂肪乳中,當(dāng)油脂的密度低于周?chē)浇槊芏燃s10%時(shí), 乳析現(xiàn)象就會(huì)產(chǎn)生。乳析的乳劑只要輕輕攪拌, 乳滴仍能重新分布。但當(dāng)脂滴合并成直徑超過(guò)1μm的大脂滴時(shí), 脂滴的合并便是不可逆的過(guò)程, 脂滴會(huì)逐漸聚集, 1μm脂滴可“生長(zhǎng)”成 5μm甚至更大的脂滴顆粒, 直至自由脂滴從乳劑中析出，成為不穩(wěn)定脂肪乳。

1、工作原理

USP 729中著重介紹了檢測(cè)平均粒徑大小的動(dòng)態(tài)光散射法與檢測(cè)尾端大顆粒的光阻法。

檢測(cè)平均粒徑大小

動(dòng)態(tài)光散射（DLS）

動(dòng)態(tài)光散射（DLS），同樣理解為與光子相關(guān)的光譜法（PCS）。DLS或者說(shuō)PCS技術(shù)的基礎(chǔ)是分析由于懸浮在液體中的任何粒子（包括乳粒）的隨機(jī)布朗運(yùn)動(dòng)或擴(kuò)散而引起的散射光強(qiáng)隨時(shí)間的波動(dòng)。光強(qiáng)由合適的檢測(cè)器（例如光電倍增管）以給定的入射角度（通常為90度）測(cè)量，該檢測(cè)器可以測(cè)量由懸浮顆粒運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的快速隨機(jī)的散射光強(qiáng)度，測(cè)量得到的光強(qiáng)數(shù)據(jù)用來(lái)計(jì)算光強(qiáng)自相關(guān)管函數(shù)，利用斯托克-愛(ài)因斯坦方程計(jì)算樣品粒徑大小。

經(jīng)典光散射

經(jīng)典光散射，基于米氏散射理論。測(cè)量散射光角度來(lái)反映散射光強(qiáng)的變化，通常在大范圍的檢測(cè)角。

檢測(cè)尾端大顆粒

光阻法

單個(gè)粒子通過(guò)狹窄的光感區(qū)時(shí)阻擋了一部分入射光，引起到達(dá)檢測(cè)器的入射光強(qiáng)度瞬間降低，強(qiáng)度信號(hào)的衰減幅度理論上與粒子橫截面（假設(shè)橫截面積小于光感區(qū)的寬度），即粒子直徑的平方成比例。用系列標(biāo)準(zhǔn)粒子建立粒徑與強(qiáng)度信號(hào)大小的校正曲線。儀器測(cè)得樣品中乳粒通過(guò)光感區(qū)產(chǎn)生的信號(hào)，根據(jù)校正曲線計(jì)算出乳粒的粒徑及加權(quán)體積。使用單粒子光學(xué)傳感技術(shù)傳感器時(shí)，需知道重合限與最 佳流速。

2、相關(guān)儀器及標(biāo)準(zhǔn)

在儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試過(guò)程中規(guī)定了樣品體積精度、樣品流速、粒度響應(yīng)曲線直徑校準(zhǔn)、傳感器分辨率的各項(xiàng)要求。

平均粒徑

（1） 儀器：采用動(dòng)態(tài)光散射法的設(shè)備（可帶自動(dòng)稀釋?zhuān)┤鏝icomp Z3000

（2） 水：將蒸餾水透過(guò)一個(gè)0.2μm的濾膜過(guò)濾，通過(guò)超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無(wú)菌水。

（3） 標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。100nm，250nm和400nm三種不同尺寸標(biāo)準(zhǔn)的粒子

4） 樣品稀釋濃度：采用什么樣的最 佳稀釋方案以達(dá)到適當(dāng)?shù)纳⑸鋸?qiáng)度為基礎(chǔ)來(lái)分析是由儀器的規(guī)格決定的。因此，最 終樣品中乳膠的濃度必須根據(jù)所使用的動(dòng)態(tài)光散射設(shè)備決定。

（5） 系統(tǒng)適應(yīng)性通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)：按照標(biāo)準(zhǔn)操作測(cè)量，得到樣品光強(qiáng)徑平均粒徑以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)偏差。該系統(tǒng)適用于當(dāng)樣品達(dá)到穩(wěn)定溫度后，結(jié)果穩(wěn)定，并且平均三次測(cè)量平均粒徑的結(jié)果。變異系數(shù)不能超過(guò)NIST-可追溯平均粒徑的10%。

尾端大顆粒

（1）儀器：采用合適的具有或沒(méi)有自動(dòng)稀釋的并且由計(jì)算機(jī)控制操作的光阻法儀器進(jìn)行測(cè)量。如Accusizer A7000 APS

（2）水：將蒸餾水透過(guò)一個(gè)0.2μm的濾膜過(guò)濾，通過(guò)超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無(wú)菌水。

（3）標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。光阻法儀器的粒徑測(cè)量與計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性要通過(guò)兩個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)混合粒子5和10μm混標(biāo)獲得。

（4）樣品稀釋濃度：不帶有自動(dòng)稀釋的儀器需手動(dòng)進(jìn)行稀釋。配備了自動(dòng)稀釋系統(tǒng)，濃縮的樣品可以通過(guò)注射器或者特氟隆樣品線直接進(jìn)入儀器進(jìn)行分析，然后自動(dòng)稀釋?zhuān)瑑?yōu)化液滴濃度進(jìn)行分析。

（5）系統(tǒng)適應(yīng)性通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)置儀器的閾值為1.8μm，上限延申至50μm. 重復(fù)三次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)粒子的粒徑與每毫升數(shù)量。相關(guān)結(jié)果的平均粒徑應(yīng)該符合標(biāo)粒的期望值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以?xún)?nèi)，粒徑準(zhǔn)確度在90%到110%以?xún)?nèi)。另外，粒子每毫升顆粒數(shù)應(yīng)該與標(biāo)準(zhǔn)粒子濃度偏差在10%以?xún)?nèi)。

（6）樣品通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)：將儀器的閾值設(shè)定為1.8μm，上限延申至50μm。在任何情況下，只要測(cè)量5μm粒徑以上的粒子數(shù)足夠多，它就代表了樣品中由足夠多的球狀粒子，這些粒子在統(tǒng)計(jì)學(xué)上代表了原生乳液中的尾端大粒子。大于5μm的乳粒加權(quán)總體積占油相體積的百分比，其結(jié)果不得超過(guò)0.05%。

3、Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS

奧法美嘉旗下的Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS型號(hào)設(shè)備是典型的動(dòng)態(tài)光散射法和光阻法原理的設(shè)備，采用Nicomp 、SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過(guò)對(duì)樣品的準(zhǔn)確分析，集檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理及自動(dòng)沖洗等功能一體，操作便捷、高效。

Nicomp Z3000

相比于其他廠家的DLS設(shè)備，在常用的高斯分布下，又用自己獨(dú)特的Nicomp算法，可準(zhǔn)確分辨出樣品是否屬于多峰，給客戶提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，滿足客戶的需求。Nicomp Z3000可以檢測(cè)0.3nm-10μm的準(zhǔn)確粒徑分布。

Accusizer A7000 APS

采用SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)稀釋?zhuān)行П苊饬巳斯げ僮鲗?dǎo)致的檢測(cè)誤差，集檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理及自動(dòng)沖洗等功能一體，操作便捷、高效。

使用Accusizer APS光學(xué)粒度分析儀測(cè)試5μm和10μm的混合標(biāo)粒（批號(hào)：UH13A），結(jié)果如下圖所示：

參考資料

USP 729脂質(zhì)注射乳劑中球狀大小分布