目前新冠病毒不斷，對于人類日常生活都造成了嚴(yán)重的影響。核酸檢測是新冠病毒的一種檢測方法，在核酸檢測的具體流程中，核酸提取是十分關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。根據(jù)已公開報道，TRIS、EDTA等試劑在核酸提取中發(fā)揮著重要的作用。

核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，包括脫氧核糖核酸和核糖核酸兩類，是生命的最基本物質(zhì)之一。核酸提取是指利用物理、化學(xué)等方法將核酸從樣品中分離出來的過程，是核酸擴增、DNA片段連接、載體構(gòu)建、高通量測序等一系列分子生物學(xué)分析的前提技術(shù)，是生命科學(xué)研究、生物及時應(yīng)用及基因診斷中非常重要的一項技術(shù)，因此，核酸的提取具有十分重要的意義。

一般來說，核酸提取是需要多步驟的工作，首先需要對細(xì)胞、組織材料等生物樣本材料進行破碎處理，失活核酸酶，釋放核酸，而TRIS、EDTA等試劑的作用主要體現(xiàn)在釋放核酸環(huán)節(jié)。

核酸在酸性溶液中易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。而TRIS即三羥甲基氨基甲烷，PH緩沖范圍：7.0-9.0，能夠維持待提取樣品裂解后釋放的核酸的穩(wěn)定性，以避免核酸的降解，提高核酸的濃度和純度。

EDTA即乙二胺四乙酸，其能夠與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等金屬離子結(jié)合，可防止金屬離子激活蛋白酶，從而減少金屬離子對核酸質(zhì)量的影響。

綜上，TRIS、EDTA等試劑在核酸提取過程中，能夠充分有效地裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的核酸能夠充分釋放，得到濃度更高的核酸，有利于提高核酸的質(zhì)量，保證后續(xù)操作的準(zhǔn)確性。

湖北新德晟材料成立已有數(shù)十年，專業(yè)從事生物緩沖劑、酶制劑、采血管添加劑、化學(xué)發(fā)光試劑、卡波姆等產(chǎn)品的生產(chǎn)研發(fā)。目前德晟的產(chǎn)品已銷往多個國家，產(chǎn)品質(zhì)量可靠，可滿足于不同行業(yè)客戶的需求，價格低可詳談，根據(jù)所需量可控價格。有意向了解可以來電咨詢，德晟歡迎您的來電。

如何選擇緩沖劑？

選擇緩沖體系，其解離常數(shù)pKa值應(yīng)該在設(shè)定的pH上下一個pH值單位內(nèi)，因為緩沖液的pKa變化超過一個pH單位時，其緩沖能力就會明顯下降；

緩沖體系不應(yīng)影響蛋白質(zhì)的活性或者DNA的穩(wěn)定性，并避免其他離子的干擾；

另外，還要考慮溫度的影響：溫度不僅對緩沖液有影響，對細(xì)胞也有影響，大多數(shù)動物細(xì)胞在37℃的生理狀況下pH為7.0~7.5，而在溫度下降到0℃時可達到8.0。

一、磷酸鹽緩沖液的優(yōu)缺點：

是使用很廣泛的一種緩沖劑，由于它有二級解離，所以緩沖的pH值范圍很廣，可配置各種pH值的酸性、堿性和中性緩沖液。

優(yōu)點：

易配成各種濃度

適用pH范圍寬

pH受溫度影響小

稀釋后pH變化小

缺點：

易與常見的鈣離子、鎂離子及重金屬離子締合成沉淀。

二、Tris緩沖液的優(yōu)缺點：

Tris緩沖液是在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑，其本身為弱堿，常用有效pH在“中性”范圍。

優(yōu)點：

堿性較強，可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的但范圍pH緩沖液；

對生物化學(xué)過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀；

易吸收空氣中的CO2，所以配制的緩沖液要蓋嚴(yán)密封；

此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定干擾作用，所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。

缺點：

pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1

溫度效應(yīng)大，如4℃時pH=8.4，37℃時pH=7.4

三、HEPES緩沖液的優(yōu)缺點：

HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

優(yōu)點：

在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時能維持較恒定的pH值，并對細(xì)胞無毒性作用。

缺點：

在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒，與其他緩沖劑相比價格略貴。

四、PIPES緩沖液的優(yōu)缺點：

PIPES是哌嗪緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。

優(yōu)點：

該緩沖劑不會與金屬絡(luò)合，因此可用于含金屬離子的溶液；

可以用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細(xì)胞，以及代替草甘膦緩沖液。

缺點：

當(dāng)溶液的pH值升高到6.5以上時，PIPES的游離酸才容易溶解，但是PIPES的鈉鹽很容易溶解；

如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低pH下的溶解度；

像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應(yīng)的實驗，因為它會導(dǎo)致自由基的形成。

我們很多都知道VTM病毒保存液是病毒檢測中用到的，那么它是用于病毒的核酸檢測還是用于無癥狀患者或接種了疫苗的人的抗體檢測呢，不用VTM能不能進行檢測呢？可能有些人就不太清楚了。

病毒保存液主要是病毒采樣管中添加的成分，并不是每個樣品采集處都能進行PCR 檢測，因此需要對采集到的病毒拭子樣品進行運輸。樣本送到檢測機構(gòu)后，通過PCR擴增等方法來進行分析，屬于病毒的核酸檢測。

進行病毒樣本采集用的采樣管由采樣管、采樣拭子（鼻、咽拭子）以及管內(nèi)添加的病毒保存液組成。而保存液又分為滅活型和非滅活型兩種：

滅活型保存液：成分有高濃度的裂解鹽，不僅能夠快速的破壞病毒宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜，還能夠變性蛋白質(zhì)，使病毒的蛋白質(zhì)變性沉淀，從而讓核酸擺脫蛋白質(zhì)纏繞，釋放出核酸；同時還含有緩沖液EDTA和Tris與核酸酶抑zhi劑。

非滅活保存液：成分有Hanks溶液，主要由多種無機鹽、緩沖劑、葡萄糖、0.4%酚紅在滅菌條件下制成，與細(xì)胞生長狀態(tài)的pH值、滲透壓及無菌條件一致，使病毒宿主細(xì)胞體外存活時間延長；另外還含有蛋白保護劑保護病毒穩(wěn)定性，以及緩沖劑與冷凍保護劑。

病毒保存液及采樣管的使用：

采樣前,在標(biāo)簽上注明樣品信息;

根據(jù)不同的實驗?zāi)康?用采樣拭子在相應(yīng)的部位采樣;

具體采樣方法有以下幾種:

a)鼻腔采集:將拭子頭輕輕插入鼻腔內(nèi)采樣,用另一拭子以同樣方式采集另一鼻腔樣本將拭子頭浸入采樣液中,折斷尾部;

b)咽部采集:用拭子采集咽喉部樣本,同樣將拭子頭侵入采樣液中,折斷尾部。

為進一步強化新冠疫情檢測服務(wù)能力，優(yōu)化核酸檢測工作管理，提供受檢人員信息采集、樣品送檢管理、檢測結(jié)果復(fù)核、陽性樣品追蹤、檢測報告上傳各環(huán)節(jié)效率和質(zhì)量，青軟青之設(shè)計并開發(fā)了一套新冠核酸檢測系統(tǒng)——高通量核酸快速檢測系統(tǒng)，實現(xiàn)快速采集、匯總各區(qū)域篩查數(shù)據(jù)，解決檢測過程中多角色的精細(xì)化、規(guī)范化管理，滿足疫情時集中大批量核酸檢測，快速排查核酸陽性人員，有效支撐和保障區(qū)域疫情防控檢測工作的數(shù)字化、專業(yè)化管理，實現(xiàn)區(qū)域防控檢測的高質(zhì)、高效實施管理。 高通量核酸快速檢測系統(tǒng)功能包括個人信息填報、采樣點采樣、試樣檢測、檢測結(jié)果審核、報告管理、追溯溯源、檢測返工、個人檢測結(jié)果查詢等功能。

       乙二胺四乙酸簡稱EDTA或者EDTA酸，分子式為C10H16N2O8 ，用H4Y表示其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

圖1：乙二胺四乙酸結(jié)構(gòu)式

       當(dāng)H4Y溶于水時，不僅可以將自身的H+給出去，形成不同形式的HXY（4-x)-陰離子；當(dāng)溶液酸度很高時，H4Y的兩個羧基可以接受H+分別以H5Y+或H6Y2+陽離子的形式存在于溶液中。因此EDTA在水溶液中可以H6Y2+、H5Y+、H4Y、H3Y-、H2Y2-、HY3-、Y4-等7種形式存在，而它們在水溶液中的具體存在形式及分布分?jǐn)?shù)與溶液pH息息相關(guān)（如圖2所示）。

圖2：EDTA各種存在形式的分布圖

       EDTA與金屬離子形成螯合物時，它的氮原子和氧原子與金屬離子鍵合形成具有多個五原子環(huán)的立體螯合物。EDTA螯合物的立體構(gòu)型如圖3所示。一般情況下,這些絡(luò)合反應(yīng)將按照1:1的比例進行反應(yīng)。

圖3：EDTA-M螯合的立體結(jié)構(gòu)

       例如在ZnCl2的滴定實驗中，以EDTA-2Na作為滴定劑，鉻黑T指示液作為指示劑，于氨-氯化銨緩沖溶液（pH=10）中滴定待測ZnCl2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。當(dāng)溶液滴定至由藍(lán)色變?yōu)樽霞t色時，此時達到反應(yīng)終點，以消耗EDTA-2Na的體積根據(jù)公式（1）計算ZnCl2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度（需要同時做空白試驗扣除空白的影響）。

C1:EDTA-2Na標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度

V1:消耗EDTA-2Na的體積

V2:消耗ZnCl2標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積

       EDTA由于其良好的化學(xué)性質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于化學(xué)分析中。迄今為止，它已經(jīng)成為分析化學(xué)中應(yīng)用最廣泛的螯合劑。EDTA除了作為螯合劑用于絡(luò)合滴定外，還作為掩蔽劑等應(yīng)用于各種分離和測定方法中。

Bicine(N,N-二羥乙基甘氨，CAS: 150-25-4)是一種白色粉末，它被廣泛用作緩沖劑的有機化合物。Bicine是兩性離子生物緩沖劑，通常在生物和生化研究中用作緩沖劑。它是Good’s的緩沖液之一，在20°C時的pKa為8.35。它是通過甘氨酸與環(huán)氧乙烷反應(yīng)，然后將所得內(nèi)酯水解而制備的。Bicine可用于氣體脫硫的胺系統(tǒng)中的污染物。它是在O 2，SO 2，H 2 S或硫代硫酸鹽存在下通過胺降解形成的。

1. Bicine作為Good's Buffer通常用于蛋白質(zhì)結(jié)晶的溶液中

Bicine是用途非常廣泛的一種Buffer,用于酶反應(yīng)緩沖液，電泳緩沖液，工作濃度從3-100mM。用于生物緩沖液，特別是低溫生化研究用；用于制備測定血清鳥嘌呤酶的穩(wěn)定底物溶液；采用交聯(lián)葡聚糖通過等速電泳對血漿蛋白進行分級分離中的間隔臂。

2. Bicine已在色譜和聚合酶鏈反應(yīng)中用作緩沖劑

Bicine是一種兩性氨基酸緩沖劑，在pH7.6-9.0范圍內(nèi)（25°C時pKa為8.3）有活性。是低溫生化反應(yīng)推薦使用的緩沖液。且其具有不參加和不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程，可耐化學(xué)作用和酶解作用等優(yōu)點，因此常在色譜和聚合酶鏈反應(yīng)中被用作緩沖劑。

3. Bicine在陽離子交換色譜中的流動相緩沖液和洗脫液

Bicine在薄層離子交換中的用途用于蛋白質(zhì)拆分層析方法已經(jīng)得到證實。Bicine已用于肽和蛋白質(zhì)結(jié)晶。四元過渡態(tài)類似物肌酸激酶在反應(yīng)緩沖液中使用了Bicine。一種蛋白質(zhì)SDS-PAGE的多相緩沖液系統(tǒng)并結(jié)合了Bicine的肽已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在體外診斷臨床試驗中。

4. 作為螯合劑應(yīng)用于土壤修復(fù)。

由于Bicine分子中含有兩個-OH，一個-COOH，有良好的螯合性能，能夠螯合銅、鎘，以及鉛離子等重金屬離子，但不能螯合鈣鎂離子。因此，Bicine常作為螯合劑用于修復(fù)重金屬污染的土壤。Bicine|150-25-4|在中性和酸性條件下對重金屬都有很好的洗脫能力，能夠高xiao去除污染土壤中的Cu、Cd、Pb的離子，Bicine|150-25-4|為活性組分的淋洗液，不僅能淋洗修復(fù)重金屬污染土壤，而且可避免土壤中植物營養(yǎng)元素鈣鎂的流失，安全環(huán)保，不會對環(huán)境造成二次污染。

德晟是專業(yè)體外診斷試劑及采血管添加劑試劑供應(yīng)商，專業(yè)提供如：CAPS，MOPS，TRIS，MOPSO，HEPES等緩沖劑及各種抗凝和促凝試劑。我司生產(chǎn)的緩沖劑純度＞99%，吸光度＜0.05，水溶性好，工藝穩(wěn)定，可保證產(chǎn)品外觀為純白色晶體粉末。

什么是核酸檢測？

核酸檢測是指通過特殊的技術(shù)手段檢測臨床樣本中是否存在特定的病原體核酸，從而診斷患者的感染原因。新型肺炎核酸檢測主要是看它的核酸，通過實時聚合酶鏈反應(yīng)，即RT-PCR方法來檢測。檢測的樣本鼻拭子或咽拭子從鼻腔或者口腔用棉簽沾取樣本再出來做一個檢測，這是目前簡單、快捷的一個方法。

核酸檢測中病毒滅活樣本保存液的優(yōu)勢是什么呢？

1.降低RNA降解造成假陰性

核酸樣本保存條件苛刻，RNA極易裂解，4℃僅可存放24h，運輸過程過長RNA就會出現(xiàn)提前被降解的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致檢測假陰性增多。病毒樣本保存液是采樣管內(nèi)一種病毒樣本保護性運輸介質(zhì)，防止病毒采樣后不能及時檢測在送檢過程中病毒降解，避免因病毒在檢測途中提前降解造成假陰性。

2.減小核酸提取過程的感染

所有人都知道新冠肺炎的傳染性高，檢測過程中稍有不慎會被感染。核酸檢測需要有專門的儀器和標(biāo)準(zhǔn)的分子檢測實驗室，需要PCR認(rèn)證人員操作，步驟繁瑣，全程需要5~8個小時，過程中感染風(fēng)險大。

病毒滅活樣本保存液采用裂解鹽可以快速對呼吸道病原體進行滅活、保存，使樣品失去感染性。由于是滅活病毒而不用培養(yǎng)病毒，首先需要的就是對病毒進行裂解失活、破壞其膜蛋白釋放核酸，大大降低了核酸提取過程中被感染的危險度。

德晟研發(fā)生產(chǎn)的病毒樣本保存液分為病毒滅活樣本保存液和非滅活型，非滅活型病毒樣本保存液可以完整保護好病毒的蛋白，可用于細(xì)胞培養(yǎng)。針對不同的需求所適用的病毒樣本保存液也會有所不同，有需求的可直接來電咨詢。