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- 秩jLpT欠慈藤 2017-05-04 00:00:00
- 你既然還在問要加什么，那我估計(jì)你的抗體濃度titration也沒做吧。這個(gè)實(shí)驗(yàn)很可能就會(huì)失敗的。 做流式的實(shí)驗(yàn)，在使用任何一個(gè)抗體之前，都需要做titration。簡(jiǎn)單的說就是找出每個(gè)抗體在你所使用的染色條件下的Z佳工作濃度。抗體濃度沒有優(yōu)化的情況下，要么會(huì)增加陰性細(xì)胞的非特異信號(hào)，要么陽性細(xì)胞的信號(hào)變?nèi)酢?具體的步驟就是你準(zhǔn)備好5-6個(gè)樣本管，細(xì)胞量和濃度都一致，用不同濃度的抗體來染色。上機(jī)檢測(cè)后就算染色指數(shù)（SI）。 SI=(陽性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度-陰性細(xì)胞群平均熒光強(qiáng)度)/(2*陰性細(xì)胞群熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)差） SIZ高的那個(gè)就是Z佳抗體工作濃度。 這個(gè)做好以后才考慮做其他的實(shí)驗(yàn)。其他要考慮的因素有是否要封閉，是否要共染其他標(biāo)記，是否要做補(bǔ)償。還有，要染死細(xì)胞以排除在分析結(jié)果之外等等。
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