參與評論

評論

登錄后參與評論

全部評論(1條)

• 

  歐普照明世界 2017-05-06 00:00:00

  紫外線誘變選育α-淀粉酶高產(chǎn)菌株一、實驗目的 1.學習菌種的物理因素誘變育種基本技術(shù). 2.通過誘變技術(shù)篩選出高產(chǎn)ɑ-淀粉酶的菌株. 二、實驗原理 紫外線是一種Z常用有效的物理誘變因素，其誘變效應主要是由于它引起DNA結(jié)構(gòu)的改變而形成突變型.紫外線誘變一般采用15W或30W紫外線燈，照射距離為20~30 cm，照射時間依菌種而異，一般為1~3 min，死亡率控制在50％~80％為宜.被照射處理的細胞，必須呈均勻分散的單細胞懸浮液狀態(tài)，以利于均勻接觸誘變劑，并可減少不純種的出現(xiàn).同時，對于細菌細胞的生理狀態(tài)，要求培養(yǎng)至對數(shù)生長期為Z好. 本實驗以紫外線處理產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，通過透明圈法初篩，選擇淀粉酶活力高的生產(chǎn)菌株. 三、實驗材料 ⑴ 菌種 產(chǎn)淀粉酶枯草芽孢桿菌 ⑵ 器材 裝有15W或30W紫外燈的超凈工作臺、電磁力攪拌器（含轉(zhuǎn)子）、低速離心機、培養(yǎng)皿、涂布器、10mL離心管、（1、5、10mL）吸管、250mL三角瓶、恒溫搖床、培養(yǎng)箱、直尺、棉簽、橡皮手套、洗耳球 ⑶ 培養(yǎng)基和試劑 ① 無菌水、75%酒精 ② 0.5％碘液 碘片1g、碘化鉀2g、蒸餾水200mL.先將碘化鉀溶解在少量水中，再將碘片溶解在碘化鉀溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可. ③ 選擇培養(yǎng)基 可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，NaCl 0.5g，瓊脂2g，蒸餾水100mL，pH6.7.0，121℃滅菌20min. ④ 肉湯培養(yǎng)基 牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，蒸餾水100mL，pH7.7.4，121℃滅菌20min. 四、實驗步驟 ⑴ 菌體培養(yǎng) 取枯草芽孢桿菌一環(huán)接種于盛有20 mL肉湯培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，于37℃振蕩培養(yǎng)12h，即為對數(shù)生長期的菌種. ⑵ 菌懸液的制備 取5mL發(fā)酵液于10mL離心管中，以3000r/min離心10min，棄去上清液.加入無菌水9mL，振蕩洗滌，離心10min，棄去上清液.加入無菌水9mL，振蕩均勻. ⑶ 誘變處理 將菌懸液傾于無菌培養(yǎng)皿中（內(nèi)放一個磁力攪拌棒），置電磁力攪拌器上于超凈工作臺紫外燈下（距離30cm）照射0.1min. ⑷ 取0.0.2mL誘變后菌懸液于選擇培養(yǎng)基平板上，用涂布器涂勻.置37 ℃暗箱培養(yǎng)48h. ⑸ 在長出菌落的周圍滴加碘液，觀察并測定透明圈直徑（C）和菌落直徑（H），挑選C/H值Z大者接入斜面保藏. 五、注意事項 1.紫外線對人體的細胞，尤其是人的眼睛和皮膚有傷害，長時間與紫外線接觸會造成灼傷.故操作時要戴防護眼鏡，操作盡量控制在防護罩內(nèi). 2.空氣在紫外燈照射下，會產(chǎn)生臭氧，臭氧也有殺菌作用.臭氧過高，會引起人不舒服，同時也會影響菌體的成活率.臭氧在空氣中的含量不能超過0.1％~1％.

  贊(15)

  回復(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論