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  深海天使I361 2012-08-17 00:00:00

  現(xiàn)在還有一種方法;是時間分辨熒光免疫層析法。原理就是利用鑭系元素為標記物的免疫分析技術，主要是利用鑭系元素的螯合物熒光時間較長，高強度的特性。 以安一生物生產(chǎn)的β內(nèi)酰胺類抗生素快速檢測試劑盒為例簡述操作步驟：1.將樣品回復至室溫；2.將吸取150微升稀釋液至凍干品后加入待測奶樣150微升；3.37攝氏度加熱3分鐘后插入免疫層析條在加熱3分鐘；4.取出免疫層析條，吸干下端殘留液體，放置3分鐘，5.用讀數(shù)儀讀取。 如果不需要定量，可以采用膠體金試劑。只要看線出不出就行了

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  lubin131 2010-04-08 00:00:00

  牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法 隨著奶牛飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展，抗生素在預防和ZL奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是：diyi，ZL泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內(nèi)移行到乳腺殘留進入牛奶中，資料表明ZL后的奶牛，其擠出的牛奶5天內(nèi)都有抗生素殘留；其二，為了預防奶牛疾病并提高產(chǎn)量，在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由于牧場管理不善，擠奶、儲奶沒有嚴格的衛(wèi)生制度和配套的設施，人為添加或造成牛奶抗生素的污染。 牛奶中含有抗生素，不僅對人的健康造成很大的危害，而且對乳品加工企業(yè)帶來經(jīng)濟損失（因無法生成酸奶和奶酪）。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學飼養(yǎng)、精心管理；正確擠奶和預防疾病外，還要規(guī)范抗生素的使用，按國標中有關規(guī)定，用藥后的奶牛5天后所產(chǎn)的牛奶才可作為原料乳，并且要檢測其殘留。世界糧農(nóng)組織（FAO）、世界衛(wèi)生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國的食品和藥品管理局（FDA）等對食品中抗生素Z大殘留量都有明確的規(guī)定，我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）。 目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類：生物測定法（微生物測定法、放射受體測定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯(lián)免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯(lián)用技術）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。 TTC法 TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）的檢測法，屬生物檢測法。其測定原理基于抗生素對微生物的YZ作用。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培育2.5~3小時后，加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發(fā)生還原反應，所以樣品呈無色狀態(tài);如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色.這樣實驗后樣品顏色不變的為陽性，樣品染成紅色的為陰性。 TTC法的具體操作步驟: 1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養(yǎng)基，在36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15小時后，再以脫脂乳以至于1:1稀釋待用; 2.取待檢樣液9mL，在80℃水浴加熱5分鐘后冷卻到37℃以下，加活菌液1mL，在36℃±1℃水浴2小時，加入4%的TTC指示劑0.3mL， 36℃±1℃水浴培養(yǎng)30分鐘; 3.若樣液顏色不變?yōu)殛栃裕始t色為陰性;若陽性的樣液，再置于水浴中培養(yǎng)30分鐘，不顯色的為陽性，呈紅色為陰性. TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青霉素:4ppb，鏈霉素:500ppb，慶大霉素:400ppb，卡那霉素:5000ppb.它具有費用低，易開展的優(yōu)點;缺點是耗時長，要求操作人員需有一定專業(yè)知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程控制都要求嚴格遵守操作規(guī)程，否則易出現(xiàn)假陽性，以致出現(xiàn)檢驗結果的不穩(wěn)定性。 Delvotest? sp法（戴爾沃檢測法） 該法Z早在香港傳到廣東的，其使用是基于20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須“無抗”且要求采用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產(chǎn)并由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養(yǎng)2.5～3小時后會產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變?yōu)辄S色;若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素， 嗜熱芽胞菌生長受到YZ而無法產(chǎn)酸，指示劑將不變色. Delvotest? sp 法的操作步驟: 1.以無菌操作將一片營養(yǎng)藥片夾放入小試管內(nèi); 2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內(nèi); 3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恒溫器中培養(yǎng); 4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質(zhì)是黃色，則為陰性， 如果底部2/3的固體介質(zhì)是紫色，則為陽性. Delvotest? sp 法具有廣譜性，可檢測到?-內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素，如磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等，其中對青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青霉素:3ppb，鏈霉素:300ppb，慶大霉素:400ppb，卡那霉素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴格實用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優(yōu)點；但也易出現(xiàn)假陽性，實驗證明：當牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時，便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。 Snap?法 該方法是酶聯(lián)免疫法，由美國IDEXX公司生產(chǎn)其檢測分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認證，它利用了竟爭酶聯(lián)免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫，使樣品內(nèi)的抗生素與內(nèi)置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合，然后進行洗滌和顯色，內(nèi)置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體，通過酶的作用分解可形成有色物質(zhì)，通過測定色度并與參照物對照，就可以確定結果是陽性或陰性。 Snap?法操作步驟： 1.加入乳樣于樣品管中，搖勻，加熱樣品和檢測板5分鐘; 2.加入乳樣于樣品孔中，當激活圓環(huán)開始退卻時，按Snap鍵; 3.反應4分鐘，由Snap?讀數(shù)儀讀取并打印結果.檢測讀數(shù)小于1.05時判為陰性，大于1.05時判為陽性. Snap?法是一種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法，其敏感性和特異性好，檢測的靈敏度以普遍使用的?-內(nèi)酰胺類計：青霉素:5ppb，阿莫西林:10ppb，氨芐西林:10ppb，頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環(huán)素等的檢測，則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速準確， 9分鐘內(nèi)即可檢測出牛奶中?-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，且有半定量的讀數(shù)，可監(jiān)控牧場用藥的情況；檢測儀器穩(wěn)定性良好，結果重現(xiàn)性高，整個檢測過程簡單方便；但需購置專用儀器和試劑，成本較高。 GX液相色譜檢測法 它是一種理化檢測方法，是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程采用了氣相色譜理論，通過高壓液相和高靈敏度的檢測器，分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經(jīng)過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，但檢測程序復雜，費用較高，需購買色譜儀等檢測設備，不適合小型檢驗室。 傳統(tǒng)的抗生素檢測方法不少，有的操作煩瑣，有的實驗條件要求高，有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳制品生產(chǎn)企業(yè)造成經(jīng)濟上和時間上的損失，而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒于牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛(wèi)生問題，乳品企業(yè)及牧場應重視和加強檢測工作，應用一些簡單、快速和準確性高的方法來監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量，保證消費者的健康。 http://szddi.com/foodonline/newsdetail.asp?id=15933 反應原理 本產(chǎn)品主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的。在整個反應當中，樣品中氯霉素含量越多，反應呈色就越淡。反之，樣品中氯霉素含量越少，則呈色越深。 試劑盒組成 1、微量測試孔：每條8孔，每板12條 2、氯霉素標準溶液： 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶 3、10倍濃縮萃取稀釋液：一瓶，30ml/瓶 4、10倍濃縮洗滌液：一瓶，30 ml /瓶 5、氯霉素酶標記物： 一瓶，8 ml/瓶 6、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶 7、反應終止液：一瓶，13 ml/瓶 使用說明 A、注意事項 1、使用前先將氯霉素標準溶液6瓶，濃縮萃取稀釋液，濃縮洗滌液，酶標記物，底物溶液及微量測試孔條置于室溫下，回溫30分鐘。 2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配制 用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1： 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水)，即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。 3、回溫后，取出所需微量測試孔條，將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好，置于4oC保存。 B、樣品制備 1.待測物為生乳，則依以下方法進行處理 (5倍稀釋) 取100ul待測生乳加入400ul萃取稀釋液，振蕩混合后備用。 2.待測物為蜂蜜，則依以下方法進行處理 a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中，震蕩約5分鐘，使其充分混合均勻。 b.離心10分鐘(3000rpm)，取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50℃下氮氣吹干(溫度請勿超過50oC)。 c.加入0.5ml萃取稀釋液，震蕩約10秒鐘后備用。 3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理 a.抽取待檢動物血液，離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用，注意不要有溶血。 b.將3ml血清加入離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，震蕩混合約30秒。 c.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 d.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先將殘余物完全溶解后，再加入1 ml萃取稀釋液，震蕩約30秒鐘。 e. 離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 f.若有乳化現(xiàn)象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。 4. 待測物為雞肉或魚、蝦，則依以下方法進行處理 a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中，再加入6ml乙酸乙酯，并以均質(zhì)機均質(zhì)約1分鐘，再震蕩約30秒。 b.離心10分鐘(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮氣吹干。 c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml，先將殘余物完全溶解后(若未能完全溶解，可能會導致回收率降低)，再加入1 ml萃取稀釋液，震蕩約30秒鐘。 d.離心10分鐘(3000 rpm)，用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分，棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 e.若有乳化現(xiàn)象，請先將大部分上層液(正己烷)取出后，再將玻璃管置入80oC水中，隔水加熱約5~10分鐘，可改善乳化情形。待測物為血清、則依以下方法進行處理 5.待測物為內(nèi)臟(肝、心等)，則依以下方法進行處理(5倍稀釋) 同上述步驟a~d，但下層液吸出后，再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。 6.待測物為飼料，則依以下方法進行處理(10倍稀釋) 同上述步驟a~d，但下層液吸出后，再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。 C、操作步驟 本產(chǎn)品的酶標記物與氯霉素標準溶液均直接使用，無需再稀釋。 1、于適當微孔中分別加入100mL標準溶液(0，0.05，0.15，0.45，1.35和4.05ppb)。 2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。 3、再于每一微孔中另再加入50mL酶標記物。 4、輕敲盤子四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1小時。 5、將微孔中的反應液甩掉，再將洗液加滿每一微孔后甩掉，重復洗3次。 6、Z后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。 7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，輕敲盤子四周，使其充分混合。 8、于室溫下避光靜置溫育20分鐘。 9、于每一微孔中加入100mL反應終止液。 10、用酶標儀于波長450nm下判讀。 D、判定 1. 計算B/B0值。用樣品或標準液吸光度值(B)除以零標準吸光度值(B0)再乘以。 2. 以B/B0值為縱坐標，以標樣濃度的對數(shù)值為橫坐標，做標準半對數(shù)曲線。 3. 根據(jù)每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度。 4. 由于樣品經(jīng)過了預先稀釋，因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。 E、標準曲線 F、靈敏度 氯霉素試劑檢測盒的平均檢測下限為 0.05ppb，此濃度之吸光值與陰性標準溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。 G、 特異性 針對以下抗生素進行交叉反應之測試，結果如下： Chloramphenicol = Chloramphenicol(free base) <0.1% Gentamycin <0.1% Tetracycline <0.1% Penicillin G <0.1% Sulfamethazine <0.1% H、再現(xiàn)性 針對氯霉素檢測試劑盒精密度測試，重復6次，所得不同濃度標準溶液的吸光值變異系數(shù)(%CV)如圖2所示，顯示氯霉素試劑盒有很高的再現(xiàn)性: I、回收率 生乳(添加1.0ppb)104~117% 蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110% 雞肉(添加0.5ppb) 90~120% 血清(添加0.5ppb)100~120% 內(nèi)臟(添加1.0ppb) 100~120% 飼料(添加2.0ppb)80~110% 氯霉素檢測試劑盒 簡介 氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價格低廉等優(yōu)點，目前已被普遍應用于各類家禽、家畜、水產(chǎn)品及蜂制品的各種傳染性疾病的ZL。然而氯霉素有其嚴重的副作用，它會YZ人體的造血功能，從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥。目前，我國已禁止其使用。 我公司采用國內(nèi)外先進的工藝與技術，研發(fā)出氯霉素ELISA檢測試劑盒，簡化了樣品處理方式，使用簡便，省時省力省錢，整個操作過程不到90分鐘。本產(chǎn)品檢測范圍廣(雞肉、魚、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等)，回收率為80%－120%，靈敏度可達到0.05ppb，是各類企業(yè)及各級政府檢測機構的理想產(chǎn)品。 簡單 1． 樣品提取方便快捷。 2． 90分鐘得到結果。 3． 只需基本的實驗室設備。 4． 操作人員只需Z基本的實驗知識。 準確 1． 結果重現(xiàn)性高。 2． 精確至0.05ppb。 3． 與其它抗體的交叉反應率極低。 技術支持 我們?yōu)橛脩籼峁㈱方便、快捷、周到的服務。 產(chǎn)品規(guī)格 包裝：每包96孔 靈敏度: 0.05ppb 測試區(qū)間：0.05ppb－4.05ppb 檢測時間：80分鐘(提取后) 儲存條件：2-8℃

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