展青霉素是一種世界范圍內(nèi)的水果污染物，在多種水果、水果制品和果酒中均有發(fā)現(xiàn)，對(duì)人及動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性作用。當(dāng)人攝取了展青霉素，可通過(guò)影響細(xì)胞膜的透過(guò)性間接地引起生理呼吸異常。鑒于展青霉素的毒性及其污染情況，開(kāi)展展青霉素的檢測(cè)非常必要。

逗點(diǎn)生物采用新的自主研發(fā)的Copure?228多功能凈化柱，建立蘋(píng)果醋中展青霉素的LC-MS/MS檢測(cè)方法。該方法低、中、高三個(gè)水平的加標(biāo)回收率均在90-100 %之間，RSD小于2 %，操作簡(jiǎn)便快捷，與國(guó)內(nèi)外的競(jìng)品相比，具有回收率高和凈化效果好的優(yōu)勢(shì)，能夠作為蘋(píng)果醋中展青霉素的參考方法。

展青霉素是一種世界范圍內(nèi)的水果污染物，在多種水果、水果制品和果酒中均有發(fā)現(xiàn)，對(duì)人及動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性作用。當(dāng)人攝取了展青霉素，可通過(guò)影響細(xì)胞膜的透過(guò)性間接地引起生理呼吸異常。鑒于展青霉素的毒性及其污染情況，開(kāi)展展青霉素的檢測(cè)非常必要。

逗點(diǎn)生物采用最 新自主研發(fā)的Copure?228多功能凈化柱，建立蘋(píng)果醋中展青霉素的LC-MS/MS檢測(cè)方法。該方法低、中、高三個(gè)水平的加標(biāo)回收率均在90-100 %之間，RSD小于2 %，操作簡(jiǎn)便快捷，與國(guó)內(nèi)外的競(jìng)品相比，具有回收率高和凈化效果好的優(yōu)勢(shì)，能夠作為蘋(píng)果醋中展青霉素的參考方法。

參照 《GB 5009.185-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中展青霉素的測(cè)定》。

一、樣品前處理

1.1  樣品提取

（1）稱(chēng)取4 g樣品，加入一定量同位素內(nèi)標(biāo)工作液，混合均勻，用乙腈定容至25 mL。

（2）渦旋5 min，6000 r/min離心5 min，取上清液，待凈化用。

1.2  樣品凈化

（1）向玻璃試管中加入10 mL樣品提取液。

（2）將凈化柱橡膠頭從試管頂端插入試管中，并向下壓凈化柱至試管底端。

（3）將凈化柱上部?jī)艋蟮臉悠诽崛∫喝〕鲋翗悠菲炕駿P管中。

（4）取5 mL凈化提取液，加入20 μL乙酸，氮?dú)獯蹈桑? mL乙酸溶液復(fù)溶，渦旋30 s 溶解殘?jiān)?，過(guò)微孔濾膜，上機(jī)分析。

二、儀器條件

儀器設(shè)備：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀 SCIEX Triple Quad? 4500

色譜柱：ACQUITY UPLC T3 2.1*50mm 1.8μm

流動(dòng)相：A：一級(jí)水    B：乙腈

流動(dòng)相梯度：初始95%A，95%A（0min~3min），0%A（3.2min~4min），95%A（4.2min ~6.0min）

流速：0.3 mL/min

柱溫：室溫

進(jìn)樣體積：10.0 mL

質(zhì)譜條件：

檢測(cè)方式：多離子反應(yīng)檢測(cè)（MRM）；

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

安譜實(shí)驗(yàn)帶你打通關(guān)

展青霉素，別名棒曲霉素，廣泛存在于爛蘋(píng)果中，具有很強(qiáng)的毒性，對(duì)人體有極強(qiáng)的損傷，在2019年的國(guó)抽檢測(cè)項(xiàng)目中榜上有名。國(guó)標(biāo)GB 2761—2011規(guī)定了展青霉素的限量值為50μg/kg。

目前食品中展青霉素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是國(guó)標(biāo)《GB 5009.185-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中展青霉素的測(cè)定》，其方法是：用MAX小柱凈化，液質(zhì)方法檢測(cè)。安譜實(shí)驗(yàn)依據(jù)國(guó)標(biāo)方法，運(yùn)用CNW Poly-Sery MAX小柱（SBEQ-CA3381）和Athena UHPLC C18色譜柱，用液質(zhì)的方法對(duì)蘋(píng)果汁中的展青霉素進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果穩(wěn)定可靠，回收率高。

全部裝備任你挑

1

樣品前處理

取2g蘋(píng)果汁（如果是渾濁未過(guò)濾果汁，7000r/min離心10min去除懸浮物），加入標(biāo)品（上機(jī)濃度50ppb），待凈化。

2

SPE操作過(guò)程

活化：6mL甲醇  

平衡：6ml水  

上樣：待凈化液 

淋洗：3mL乙酸銨溶液，3mL水，抽干  

洗脫：4mL甲醇  

濃縮：在洗脫液中加入20 μL乙酸，置40℃下用氮?dú)饩従彺抵两?，用乙酸溶液定容?.0mL，渦旋30s溶解殘留物，0.22 μm 濾膜過(guò)濾，收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。

3

色譜條件

液相條件:                                       

色譜柱：Athena UHPLC C18（2.1*50mm，5μm）；

流動(dòng)相：乙腈：水=5:95，等度洗脫；

流速：300μL/min；

柱溫：30oC；

進(jìn)樣量：10μL；

質(zhì)譜參數(shù):

Ionization Mode： ESI-

Capillary Voltage: 4000V

Gas Temp：350oC

Gas flow：8 L/min

Nebulizer：35 psi

4

實(shí)驗(yàn)譜圖

▲50ppb標(biāo)準(zhǔn)品譜圖（基質(zhì)配標(biāo)）

▲蘋(píng)果汁譜圖（空白）

▲蘋(píng)果汁譜圖（加標(biāo) 50ppb）

5

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：蘋(píng)果汁中含有1.6μg/kg的展青霉素，符合國(guó)標(biāo)限量標(biāo)準(zhǔn)（50μg/kg）。

6

實(shí)驗(yàn)耗材

更多檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)解讀

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技術(shù)經(jīng)驗(yàn)干貨分享

VX關(guān)注公眾號(hào)：安譜實(shí)驗(yàn)學(xué)堂

黃曲霉毒素(aflatoxins)是一種由黃曲霉和寄生曲霉等真菌經(jīng)過(guò)聚酮途徑產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)通常包含一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)?，天然產(chǎn)生的黃曲霉毒素根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)不同分為B?、B?、G? 、G?四種。

食品遭受產(chǎn)毒真菌以及霉菌毒素污染的問(wèn)題在世界范圍內(nèi)反復(fù)發(fā)生，被污染的農(nóng)作物作為飼料資源被畜禽食用后， 攜帶的霉菌毒素又可在肉、蛋、奶等食品中蓄積，通過(guò)食物鏈傳遞， 危害人類(lèi)健康。

逗點(diǎn)生物采用最新自主研發(fā)的Copure?228多功能凈化柱，建立玉米粉中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?檢測(cè)的LC-MS/MS檢測(cè)方法。該方法低、中、高三個(gè)水平的加標(biāo)回收率均在90-100 %之間，RSD小于5 %，操作簡(jiǎn)便快捷，與國(guó)內(nèi)外的競(jìng)品相比，具有回收率高和脫色凈化效果好的優(yōu)勢(shì)，能夠作為玉米粉中黃曲霉毒素檢測(cè)的參考方法。

本方法適用于谷物及其制品、豆類(lèi)及其制品、堅(jiān)果及籽類(lèi)、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的測(cè)定。

參照 《GB 5009.22-2016  食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》。

一、樣品前處理

1.1  樣品提取

（1）稱(chēng)取 5 g試樣于50 mL離心管中，加入一定量同位素內(nèi)標(biāo)工作液振蕩混合后靜置30 min。

（2）加入20 mL乙腈-水溶液（84+16），渦旋混勻，置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20 min，在6000 r/min下離心10 min，取上清液備用。

1.2  樣品凈化

（1）向玻璃試管中加入10 mL樣品提取液。

（2）將Copure? 228多功能凈化柱（貨號(hào)：COAF228）橡膠頭從試管頂端插入試管中，并向下壓凈化柱至試管底端。

（3）將凈化柱上部?jī)艋蟮臉悠诽崛∫喝〕鲋翗悠菲炕駿P管中。

（4）取5 mL凈化提取液，氮?dú)獯蹈?，? mL初始流動(dòng)相復(fù)溶，渦旋 30s 溶解殘?jiān)?，過(guò)微孔濾膜，上機(jī)分析。

二、儀器條件

儀器設(shè)備：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀 SCIEX Triple Quad? 4500 

色譜柱：Waters C18   2.1x100mm 1.7um

流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水    B：乙腈

流動(dòng)相梯度：初始80%A，20%A（0 min~2 min），20%A（2 min~3 min），

80%A（3 min~3.1min），80%A（3.1min~5min）

流速：0.3 mL/min

柱溫：室溫

進(jìn)樣體積：10.0 μL

質(zhì)譜條件：

檢測(cè)方式：多離子反應(yīng)檢測(cè)（MRM）；

表1 離子源控制條件

表2 離子選擇參數(shù)

（注：*為定量離子）

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3  玉米粉中黃曲霉毒素加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 不同品牌多功能凈化柱處理加標(biāo)樣品后的脫色效果圖（①玉米粉加標(biāo)樣品-未凈化處理    ②Copure?228-凈化處理    ③ 國(guó)外A品牌-凈化處理     ④ 國(guó)內(nèi)B品牌-凈化處理）

Copure?228脫色效果明顯，其脫色能力與國(guó)外A品牌相當(dāng)，并顯著優(yōu)于國(guó)內(nèi)B品牌。

圖2 使用Copure?228凈化后的加標(biāo)樣品的EIC色譜圖

四、訂購(gòu)信息

實(shí)驗(yàn)背景

       展青霉素，別名棒曲霉素，廣泛存在于水果中，具有很強(qiáng)的毒性，對(duì)人體有極強(qiáng)的損傷。故而，展青霉素的檢測(cè)也是國(guó)抽項(xiàng)目必檢項(xiàng)目，其中GB2761-2017規(guī)定食品中展青霉素的限量值為50ug/kg。

       近期CMA委員會(huì)將組織相關(guān)項(xiàng)目的審查，作為一個(gè)常檢項(xiàng)目，安譜實(shí)驗(yàn)特此就果汁中展青霉素的檢測(cè)方法給大家進(jìn)行分享：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.185-2016（食品中展青霉素的測(cè)定），使用CNW多功能凈化柱（SBEQ-CD228S），用液相和液質(zhì)對(duì)蘋(píng)果汁、山楂汁/片進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠，回收率高，完全滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)方法中的要求。

由于篇幅有限，本文只提供了部分譜圖供參考

如需要詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)譜圖等數(shù)據(jù)

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回復(fù)“展青霉素”獲取詳細(xì)資料吧

接下來(lái)，小編帶大家走進(jìn)安譜實(shí)驗(yàn)室

一起來(lái)學(xué)習(xí)具體檢測(cè)方案吧~

一、樣品前處理

       稱(chēng)取4g樣品（固體樣品山楂片用高速粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎待用）于50mL離心管中，加入21mL乙腈，混勻，而后在6000 r/min下離心10min，取上清液。

二、小柱操作過(guò)程

       步驟1：向試管中加入10mL樣品提取液，然后加入50μl乙酸

       步驟2：將228凈化柱橡膠頭從試管頂端插入試管中，并向下壓凈化柱至試管底端

       步驟3：將凈化柱上部?jī)艋蟮臉悠诽崛∫旱钩鲋翗悠菲炕駿P管中

       步驟4：取5ml凈化提取液，加入20μl乙酸，氮吹至干，用1ml乙酸溶液復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，上機(jī)分析

（過(guò)柱速度≤2mL/min）

三、色譜條件

01 液質(zhì)色譜條件

       色譜柱：Athena UHPLC C18液相色譜柱

       流動(dòng)相：A：0.5mM乙酸銨  B：乙腈

表1 流動(dòng)相梯度表

       流速：0.2ml/min   

       柱溫：30 ℃

       進(jìn)樣量：10μL

質(zhì)譜條件：

       ?離子源：電噴霧離子源

       ?掃描方式：負(fù)離子掃描模式

       ?檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）

02 液相色譜條件

       色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱（LAEQ-461572 4.6*150mm,5um）

       流速：0.2mL/min   

       柱溫：30 ℃

       進(jìn)樣量：10μL

       紫外檢測(cè)器條件：檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm

       流動(dòng)相：A：0.5mM乙酸銨  B：乙腈（梯度表參見(jiàn)液質(zhì)）

四、實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1 展青霉素標(biāo)準(zhǔn)品MRM譜圖

圖2 山楂汁加標(biāo)MRM譜圖

五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

六、實(shí)驗(yàn)耗材