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- 晧瀚 2017-01-15 00:00:00
- 在核算分子雜交中為什么都使用堿變性而不使用酸變性 DNA可以用堿變性而RNA不能采用堿變性的原因： 因?yàn)镈NA耐堿，而RNA中核糖的2‘羥基還在，可以在堿性條件下攻擊磷酸二酯鍵，使其斷裂。 堿變性法提取質(zhì)粒DNA原理： 普遍采用的堿變性法具有操作簡(jiǎn)便、快速、得率高的優(yōu)點(diǎn)。其主要原理是，利用染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在堿變性條件下（pH 12.6），染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性，質(zhì)粒DNA氫鍵也大部分?jǐn)嗔?，雙螺旋也有部分解開，但共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)完全分離，當(dāng)以pH 4.8的乙酸鈉將其pH調(diào)到中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)到原來(lái)的構(gòu)型，而染色體DNA不能復(fù)性，形成纏繞的致密網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，離心后，由于浮力密度不同，染色體DNA與大分子RNA、蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。分離質(zhì)粒DNA的方法一般包括3個(gè)基本步驟：培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增；收集和裂解細(xì)菌；分離和純化質(zhì)粒DNA。
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