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蛋白質(zhì)之間相互作用的研究方法有哪些

拖班 2017-02-20 11:05:33 529  瀏覽
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  • 盧英財 2017-02-21 00:00:00
    研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的實驗方法主要包括:a、凝膠阻滯實驗; b、DNase 1 足跡實驗;c、甲基化干擾實驗; d、體內(nèi)足跡實驗; f、拉下實驗。研究蛋白質(zhì)/ 核酸相互作用近期采用的新技術(shù)有:核酸適體技術(shù)、生物信息學(xué)方法、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)以及納米技術(shù)等。 蛋白(綠色熒光蛋白或紅色熒光蛋白)的載體中,共轉(zhuǎn)染到功能細(xì)胞中(一般選用 COS7 細(xì)胞)表達帶有熒光的融合蛋白.這樣,相互作用的兩種蛋白就被標(biāo)上不同的熒光,可以在細(xì)胞內(nèi)用熒光顯微鏡直接觀測.在進行精確細(xì)胞定位或共定位時,必須用共聚焦熒光顯微鏡觀測.因為共聚焦熒光顯微鏡(相當(dāng)于醫(yī)院給病人診斷的 CT)觀測的是細(xì)胞內(nèi)一個切面上的顏色.如果在一個切面上在同一區(qū)域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區(qū)域內(nèi)有相互作用.普通熒光顯微鏡看到的是一個立體圖象,無法確定蛋白質(zhì)共定位現(xiàn)象.在進行定位或共定位同時,也可以對細(xì)胞核進行染色.這樣,在細(xì)胞中就有三種顏色.細(xì)胞核的顯色幫助你確定共定位發(fā)生的位置.上面介紹的活細(xì)胞定位,其優(yōu)點是表達的熒光蛋白熒光強,沒有背景,觀測方便.

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四通道P4SPR分析儀用于蛋白質(zhì)-核酸之間的相互作用分析

介紹

DNA、RNA和PNA等核酸可以采用與蛋白質(zhì)活性位點結(jié)合的活性結(jié)構(gòu)。與蛋白質(zhì)-抗體結(jié)合類似, 蛋白質(zhì)-核酸 (NA) 結(jié)合表現(xiàn)出各種親和力,這可以通過改變NA的序列來調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)-NA對的親和力。這種設(shè)計NA序列以與靶蛋白達到特定親和力范圍的篩選策略被用于新興的應(yīng)用,例如個性化YL。SPR(Surface Plasmon Resonance)是一種功能強大的無標(biāo)記技術(shù),可以提供蛋白質(zhì)-NA結(jié)合動力學(xué)數(shù)據(jù),以便支持學(xué)術(shù)和臨床研究,從而理解和調(diào)節(jié)核心細(xì)胞過程,如轉(zhuǎn)錄調(diào)控。

 

Affinité的P4SPR分析儀

Affinité的P4SPR具有獨特的方法來識別DNA 上的結(jié)合配體、定量靶蛋白以及確定結(jié)合親和力和結(jié)合動力學(xué)。NA固定的簡單性和儀器的易用性使這種方法在培訓(xùn)后的幾分鐘內(nèi)對任何人(從本科生到宇航員、高級化學(xué)家到科學(xué)家)都是直觀的。

 

 

Affinité的技術(shù)已用于測定蛋白質(zhì)-DNA相互作用。  在該測定中,雙鏈DNA片段在SPR芯片上雜交,以無標(biāo)記方法監(jiān)測與可溶性蛋白質(zhì)的相互作用。該方法適用于任何硫醇化核酸鏈的應(yīng)用。

 

Lacl repressor protein / dsDNA

 
 

使用dsDNA對蛋白質(zhì)進行分步檢測

 


SPR分析儀P4SPR簡要介紹

便攜4通道表面等離子體共振儀(P4SPR)可以在任何需要的地方提供高質(zhì)量的表面等離子體共振SPR數(shù)據(jù)。其專有的光學(xué)設(shè)計沒有移動部件,使其更加緊湊和堅固。此外,P4SPR建立在先進設(shè)備中的基準(zhǔn)SPR技術(shù)基礎(chǔ)上:薄金屬膜傳感器。使用USB供電的P4SPR進行的每次實驗分析都會同時進行三次測量樣品并記錄高精度數(shù)據(jù)的參考信號。您可以使用TraceDrawer或喜歡的數(shù)據(jù)處理軟件快速處理文本文件中的輸出數(shù)據(jù),以提取定性和定量信息如濃度、結(jié)合、選擇性、動力學(xué)和親和力等。大多數(shù)SPR應(yīng)用目前都是針對生物分子的相互作用。革新性SPR分析儀P4SPR使SPR解決方案更容易為現(xiàn)有和潛在用戶所用,同時也正在開發(fā)新興應(yīng)用如測量和監(jiān)測小分子和納米粒子。

 

購買P4SPR分析儀時,包含的物品如下:

l  P4SPR儀器(1)

l  USB線纜(1個USB 2.0 mini-B,1個USB 2.0 micro-B)

l  P4SPR操作軟件

l  金(Au)芯片(10)

l  PDMS流體通道(3)

l  硬質(zhì)塑料外殼

l  導(dǎo)管和連接器

l  帶有P4SPR控制軟件的USB密鑰

l  TraceDrawer生物分子分析許可證(可選)

 

技術(shù)規(guī)格

規(guī)格參數(shù)

物理尺寸(L×W×H)

175 × 155 × 55 mm,

6.9 × 6.1 × 2.2 inch

重量

< 1.3千克(2.9磅)

光源

多色光源

微流體池

4通道PDMS

流動池體積

<20 μL

樣品體積

大于50 μL

靈敏度

2750 nm/RIU

CV系數(shù)(3通道)

>0.6%

折射率分辨率

1μ RIU

折射率范圍

1.30 – 1.39

親和力范圍(蛋白質(zhì))

10^-10 ~ 10^-5 M

濃度范圍(生物分子和小分子)

10^-15 ~ 10^-3 M

電源要求

USB供電(<200 mA)

計算器和平臺要求

Window XP/7/8/10,有2個USB端口


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四通道P4SPR分析儀用于蛋白質(zhì)-抗體之間的相互作用分析

介紹

免疫分析是一種用于臨床研究、診斷測試和學(xué)術(shù)研究等領(lǐng)域中生物化學(xué)標(biāo)記物是否存在和含量的檢測技術(shù)。盡管目前存在幾種免疫分析的測定方法,但它們都依賴于抗體與其靶蛋白之間的特異性結(jié)合相互作用??贵w-蛋白質(zhì)結(jié)合動力學(xué)和強度攜帶有該系統(tǒng)的獨特信息。這可以使用 SPR 作為免疫分析形式來收集這些重要的信息。

 

盡管 SPR 是一種能夠快速跟蹤蛋白質(zhì)組學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)的強大的分析技術(shù),但其高昂的成本和復(fù)雜性限制了其在學(xué)術(shù)機構(gòu)中的大量應(yīng)用。

 

Affinité的P4SPR分析儀

Affinité的P4SPR設(shè)備的簡單、低成本且易于操作等特點降低了SPR應(yīng)用的障礙。

 

緊湊的P4SPR,其外形尺寸與一個A4書本相當(dāng),可以在實驗室工作臺上很容易地設(shè)置,并在幾分鐘的培訓(xùn)中由任何人 (從本科生到宇航員,高級化學(xué)家到周末科學(xué)家)操作。P4SPR 的堅固設(shè)計提供了從幾分鐘到幾個小時的獨特的靈活測定時間,以適應(yīng)廣泛的生物分子相互作用動力學(xué)。

 


Affinité的技術(shù)已通過前列腺癌(PSA / anti-PSA)、酶檢測(β-乳糖酶)、免疫球蛋白等一系列蛋白質(zhì)-抗體相互作用得到驗證。它適用于無標(biāo)記形式的 ELISA 型分析。我們的防污技術(shù)可在復(fù)雜的生物流體(包括血清和血漿)中提供高信噪比。Affinité將滿足您對蛋白質(zhì)-抗體相互作用的監(jiān)測需求。

 

Cluster of Differentiation 64 / IgG Fab

 

Fab修飾的 SPR 芯片上 CD64 的滴定曲線

 



SPR生物分析儀P4SPR簡要介紹

便攜4通道表面等離子體共振儀(P4SPR)可以在任何需要的地方提供高質(zhì)量的表面等離子體共振SPR數(shù)據(jù)。其專有的光學(xué)設(shè)計沒有移動部件,使其更加緊湊和堅固。此外,P4SPR建立在先進設(shè)備中的基準(zhǔn)SPR技術(shù)基礎(chǔ)上:薄金屬膜傳感器。使用USB供電的P4SPR進行的每次實驗分析都會同時進行三次測量樣品并記錄高精度數(shù)據(jù)的參考信號。您可以使用TraceDrawer或喜歡的數(shù)據(jù)處理軟件快速處理文本文件中的輸出數(shù)據(jù),以提取定性和定量信息如濃度、結(jié)合、選擇性、動力學(xué)和親和力等。大多數(shù)SPR應(yīng)用目前都是針對生物分子的相互作用。革新性SPR分析儀P4SPR使SPR解決方案更容易為現(xiàn)有和潛在用戶所用,同時也正在開發(fā)新興應(yīng)用如測量和監(jiān)測小分子和納米粒子。

 

購買P4SPR分析儀時,包含的物品如下:

  • P4SPR儀器(1)

  • USB線纜(1個USB 2.0 mini-B,1個USB 2.0 micro-B)

  • P4SPR操作軟件

  • 金(Au)芯片(10)

  • PDMS流體通道(3)

  • 硬質(zhì)塑料外殼

  • 導(dǎo)管和連接器

  • 帶有P4SPR控制軟件的USB密鑰

  • TraceDrawer生物分子分析許可證(可選)

 

技術(shù)規(guī)格

規(guī)格參數(shù)

物理尺寸(L×W×H)

175 × 155 × 55 mm,

6.9 × 6.1 × 2.2 inch

重量

< 1.3千克(2.9磅)

光源

多色光源

微流體池

4通道PDMS

流動池體積

<20 μL

樣品體積

大于50 μL

靈敏度

2750 nm/RIU

CV系數(shù)(3通道)

>0.6%

折射率分辨率

1μ RIU

折射率范圍

1.30 – 1.39

親和力范圍(蛋白質(zhì))

10^-10 ~ 10^-5 M

濃度范圍(生物分子和小分子)

10^-15 ~ 10^-3 M

電源要求

USB供電(<200 mA)

計算器和平臺要求

Window XP/7/8/10,有2個USB端口


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盡管 SPR 是一種能夠快速跟蹤蛋白質(zhì)組學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)的強大的分析技術(shù),但其高昂的成本和復(fù)雜性限制了其在學(xué)術(shù)機構(gòu)中的大量應(yīng)用。

 

Affinité的P4SPR

Affinité的P4SPR設(shè)備的簡單、低成本且易于操作等特點降低了SPR應(yīng)用的障礙。

 

緊湊的P4SPR,其外形尺寸與一個A4書本相當(dāng),可以在實驗室工作臺上很容易地設(shè)置,并在幾分鐘的培訓(xùn)中由任何人 (從本科生到宇航員,高級化學(xué)家到周末科學(xué)家)操作。P4SPR 的堅固設(shè)計提供了從幾分鐘到幾個小時的獨特的靈活測定時間,以適應(yīng)廣泛的生物分子相互作用動力學(xué)。

 

Affinité的技術(shù)已通過前列腺癌(PSA / anti-PSA)、酶檢測(β-乳糖酶)、免疫球蛋白等一系列蛋白質(zhì)-抗體相互作用得到驗證。它適用于無標(biāo)記形式的 ELISA 型分析。我們的防污技術(shù)可在復(fù)雜的生物流體(包括血清和血漿)中提供高信噪比。Affinité將滿足您對蛋白質(zhì)-抗體相互作用的監(jiān)測需求。

 

Cluster of Differentiation 64 / IgG Fab

 

Fab修飾 SPR 芯片上 CD64 的滴定曲線

 



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便攜4通道表面等離子體共振儀(P4SPR)可以在任何需要的地方提供高質(zhì)量的表面等離子體共振SPR數(shù)據(jù)。其專有的光學(xué)設(shè)計沒有移動部件,使其更加緊湊和堅固。此外,P4SPR建立在Z先進設(shè)備中的基準(zhǔn)SPR技術(shù)基礎(chǔ)上:薄金屬膜傳感器。使用USB供電的P4SPR進行的每次實驗分析都會同時進行三次測量樣品并記錄高精度數(shù)據(jù)的參考信號。您可以使用TraceDrawer或喜歡的數(shù)據(jù)處理軟件快速處理文本文件中的輸出數(shù)據(jù),以提取定性和定量信息如濃度、結(jié)合、選擇性、動力學(xué)和親和力等。大多數(shù)SPR應(yīng)用目前都是針對生物分子的相互作用。革新性SPR分析儀P4SPR使SPR解決方案更容易為現(xiàn)有和潛在用戶所用,同時也正在開發(fā)新興應(yīng)用如測量和監(jiān)測小分子和納米粒子。

 

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l  金(Au)芯片(10

l  PDMS流體通道(3

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l  導(dǎo)管和連接器

l  帶有P4SPR控制軟件的USB密鑰

l  TraceDrawer生物分子分析許可證(可選)

 

技術(shù)規(guī)格

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6.9 × 6.1 × 2.2 inch

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4通道PDMS

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大于50 μL

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CV系數(shù)(3通道)

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親和力范圍(蛋白質(zhì))

10^-10 ~ 10^-5 M

濃度范圍(生物分子和小分子)

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蛋白質(zhì)純化是生物科學(xué)研究和藥物開發(fā)中的關(guān)鍵步驟,而蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的連接方法對于保證純化過程的效率與穩(wěn)定性至關(guān)重要。本文將詳細(xì)探討蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的連接方法,包括不同設(shè)備的選擇、連接方式以及優(yōu)化方案,幫助研究人員在實驗過程中提高工作效率,確保實驗結(jié)果的可靠性和 reproducibility。通過深入了解每種連接方法的特點與適用場景,您將能夠根據(jù)具體的實驗需求,選擇合適的方案,大限度地提高蛋白質(zhì)純化的質(zhì)量和產(chǎn)量。

1. 蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的構(gòu)成與連接需求

蛋白質(zhì)純化過程通常需要多個系統(tǒng)和設(shè)備的配合,包括但不限于色譜柱、流動相系統(tǒng)、樣品注射系統(tǒng)和檢測儀器。為了確保每一環(huán)節(jié)的高效運行,各個系統(tǒng)的連接方式必須得到精確設(shè)計。合理的連接方法不僅能提高系統(tǒng)的穩(wěn)定性,還能降低操作中的誤差,提高純化效率。

通常,蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的連接方法涉及流體通路的設(shè)計,包括管道、泵、閥門和分配器的連接。每個系統(tǒng)之間的連接方式應(yīng)確保流體流動的順暢性和穩(wěn)定性,并能夠應(yīng)對不同壓力和流量要求。需要特別注意的是,連接點的密封性、管道的內(nèi)徑與材質(zhì)、以及操作過程中的溫度控制,這些都會直接影響純化過程的質(zhì)量。

2. 常見的蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)連接方式

(1) 軟管與接頭連接

軟管與接頭的連接是常見的一種連接方式,尤其適用于低壓力系統(tǒng)。軟管的柔性設(shè)計使得它能夠在有限的空間內(nèi)靈活布置,并能適應(yīng)不同規(guī)格的連接接頭。對于流動相較為復(fù)雜或者需要快速更換系統(tǒng)的實驗,這種連接方式具有很大的便利性。

使用軟管時,接頭的密封性和材質(zhì)的選擇至關(guān)重要。通常,建議選用不含金屬雜質(zhì)的高質(zhì)量材料,避免在蛋白質(zhì)純化過程中引入不必要的污染物。根據(jù)實際需求,可以選擇硅膠、聚氨酯或氟塑料等不同材質(zhì)的軟管。

(2) 硬管與快速連接系統(tǒng)

對于高壓、需要精確控制流量的實驗,硬管與快速連接系統(tǒng)的組合則顯得更加重要。這種連接方式通常應(yīng)用于需要較高流量和壓力控制的色譜系統(tǒng)。硬管材質(zhì)通常為不銹鋼或高耐壓塑料,能夠在高壓條件下保持穩(wěn)定性。

快速連接系統(tǒng)則通過快捷的卡扣設(shè)計,可以快速拆卸、組裝,減少設(shè)備更換時間。在自動化實驗和大規(guī)模蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)中,這種連接方式的高效性尤為突出。

(3) 聯(lián)鎖閥門與自動化系統(tǒng)的結(jié)合

自動化蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)中,聯(lián)鎖閥門和智能控制系統(tǒng)的結(jié)合使用可以實現(xiàn)更的實驗操作。這些系統(tǒng)通過電子傳感器監(jiān)控流體的狀態(tài),并根據(jù)反饋自動調(diào)節(jié)流量、壓力等參數(shù)。閥門之間的聯(lián)鎖設(shè)計則避免了人為操作錯誤,確保了實驗過程的穩(wěn)定性。

3. 連接方法的優(yōu)化建議

在選擇合適的連接方式時,研究人員應(yīng)根據(jù)實驗的具體要求,綜合考慮以下幾個因素:

  • 流量與壓力要求:系統(tǒng)是否需要大流量和高壓處理,這將直接影響管道和連接件的選擇。
  • 清潔與消毒要求:高純度蛋白質(zhì)的提純過程要求系統(tǒng)設(shè)備必須能夠高效清洗,連接點應(yīng)易于拆卸清洗,防止交叉污染。
  • 操作與維護的便利性:在多次使用的實驗環(huán)境中,連接系統(tǒng)的拆卸與維護便利性至關(guān)重要,過于復(fù)雜的連接會增加操作難度。
  • 自動化程度與智能控制:根據(jù)實驗規(guī)模,選用適合的自動化系統(tǒng),能夠提高實驗效率,減少人為操作帶來的誤差。

4. 結(jié)語

蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)的連接方法是影響純化效果和實驗效率的關(guān)鍵因素。合理的連接方案不僅能優(yōu)化流體通路,提升純化效果,還能確保系統(tǒng)的長期穩(wěn)定運行。通過合理選擇軟管與接頭、硬管與快速連接系統(tǒng),或是聯(lián)鎖閥門與自動化系統(tǒng)的組合,能夠使整個實驗過程更加高效與精確。專業(yè)的連接方案在蛋白質(zhì)純化的各個環(huán)節(jié)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,保障研究工作的成功開展。

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