液相色譜峰面積進(jìn)樣量的關(guān)系是什么？

氣相色譜苯系物進(jìn)樣量會(huì)導(dǎo)致什么后果？

緩沖液或流動(dòng)相添加劑不足會(huì)導(dǎo)致峰拖尾。

緩沖液主要用來(lái)使樣品處于（保持）恒定的離子化狀態(tài)，從而穩(wěn)定保留情況（時(shí)間），并在Z大程度上減少因離子相互作用而導(dǎo)致的峰拖尾現(xiàn)象。

緩沖液還可YZ硅膠表面上的硅烷醇基團(tuán)的電離現(xiàn)象（的硅醇基離子化）。

但是對(duì)于低純度硅膠材料來(lái)說(shuō)，由于其硅烷醇更容易被電離，所以它的挑戰(zhàn)性更高（當(dāng)然，這對(duì)于低純度的硅膠材料是更大的挑戰(zhàn)，因?yàn)榭赡芨喙璐蓟鶗?huì)離子化的）。

添加劑濃度對(duì)峰形的影響如圖2所示。

在這種情況下，三氟乙酸（TFA）會(huì)作為蛋白質(zhì)樣品成分的離子對(duì)試劑，也會(huì)產(chǎn)生（可提供）低pH流動(dòng)相以YZ硅烷醇電離。

通常，0.1％TFA可以（作為添加劑）用于蛋白質(zhì)和肽分離。

如圖2a和b所示，該濃度足以在Z大程度上改善高純度和中純度硅膠柱的拖尾現(xiàn)象。

然而，如果TFA濃度下降（降低）十倍（圖2c，d），兩個(gè)相（兩個(gè)固定相）的拖尾均會(huì)隨之增加。高純度硅膠仍可（仍然）保持可接受的峰形，但中純度色譜柱的峰拖尾則無(wú)法接受。

緩沖液和其它流動(dòng)相添加劑的一個(gè)共同特征是：作用效果（例如峰拖尾的減少、保留時(shí)間的穩(wěn)定）會(huì)從低濃度開(kāi)始（開(kāi)始顯現(xiàn)），并隨著濃度的增加而繼續(xù)作用（增加），但會(huì)逐漸（趨平）維持在一個(gè)穩(wěn)定水平。

穩(wěn)定水平之下的添加劑濃度，可以保持穩(wěn)定的運(yùn)行；濃度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生（可能導(dǎo)致）溶解性問(wèn)題。

對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用來(lái)說(shuō)，10-25mM內(nèi)的添加劑已經(jīng)足夠了，但Z好根據(jù)具體情況確定。

圖2. 緩沖液濃度對(duì)峰拖尾的影響。

0.1％TFA與（a）高純度（b）中純度硅膠柱；0.01％TFA與（c）高純度和（d）中純度硅膠柱。

色譜柱：250x4.6mm, 5m, C18 300?；

流動(dòng)相：A: 0.1%或0.01%的TFA溶于水中；B: 0.1%或0.01%的TFA溶于ACN；5-70% B，30分鐘；

流量：1.0 mL/min, 280nm。

成分（保留順序）：核糖核酸酶A、細(xì)胞色素C、全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白、脫輔基肌紅蛋白。