全部評(píng)論(1條)
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- 廖冰6 2016-09-22 00:00:00
- 1材料和方法 1.1材料ICR和C57BL/6小鼠.所有實(shí)驗(yàn)用小鼠均在SPF動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度控制在℃，光控，自由采食.Co60滅菌飼料；孕馬血清，46~48h后給供體鼠注射hCG，hCG注射當(dāng)日下午和雄鼠合籠，次日6：30~8：00檢查雌鼠有無陰栓以判定是否已經(jīng)交配. 1.2.1.2受體鼠的預(yù)備實(shí)驗(yàn)開始前提前預(yù)備輸精管結(jié)扎雄鼠，挑選至少兩次和雌鼠交配后都不能使其受孕的結(jié)扎雄鼠備用.實(shí)驗(yàn)第3日下午合籠受體鼠和結(jié)扎雄鼠，次日06：30～08：00檢查雌鼠有無陰栓以判定是否已經(jīng)交配，交配成功的雌鼠作為胚胎移植的受體鼠. 1.2.1.3受精卵的收集處死供體鼠，打開腹腔，取出輸卵管.將輸卵管置于M2培養(yǎng)液中，用小鑷子撕開輸卵管膨大部，可見有卵團(tuán)溢出，用吸管〔5-6〕將卵團(tuán)轉(zhuǎn)移至含有透明質(zhì)酸酶的M2培養(yǎng)液滴中，吹吸數(shù)次，洗掉卵細(xì)胞四周的泡沫細(xì)胞.將受精卵轉(zhuǎn)移至含有M16培養(yǎng)液滴的培養(yǎng)皿中，37℃，50mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)短暫培養(yǎng). 1.2.2胚胎移植方法將106只受體雌鼠隨機(jī)分為兩組，其中一組采用傳統(tǒng)的胚胎移植方法〔4〕；另一組采用改進(jìn)的胚胎移植方法. 1.2.2.1傳統(tǒng)的胚胎移植方法〔4〕用水合氯醛麻醉受體鼠，沿受體鼠背部中線Z后一根肋骨水平切1cm左右切口，輕輕撥開切口，可見位于卵巢上方的白色脂肪墊.用小鑷子夾住白色脂肪墊將其拉到體外，用小血管夾夾住，并靠其重力起固定作用，以防輸卵管縮回體腔.用移卵管吸15～20個(gè)受精卵預(yù)備移植.將小鼠轉(zhuǎn)到解剖鏡下仔細(xì)尋找到輸卵管.可見輸卵管被一層呈半透明的囊膜所包繞，將囊膜撕破而暴露輸卵管，將移卵管內(nèi)受精卵移植到輸卵管膨大部.
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