液質(zhì)聯(lián)用儀方法開發(fā)--舊的色譜柱有峰，同型號新的色譜柱不出峰
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液質(zhì)聯(lián)用儀方法開發(fā)--舊的色譜柱有峰，同型號新的色譜柱不出峰是為啥？
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- 意祥福 2018-04-08 10:41:34
- 建議仔細(xì)查看一下質(zhì)譜圖，舊柱子上的出峰是什么，是否和代謝物相關(guān)，有沒有可能是舊柱子上的殘留物？
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峰形問題
可能致因
預(yù)防措施/解決方案
峰拖尾
與活性硅醇的相互作用
使用超高純度硅基（硅膠基質(zhì)）固定相
添加堿性流動相添加劑（如TEA）- 超高純度相則不需要
在固定相中與金屬離子螯合
同上
錯誤的流動相pH值（流動相pH值不當(dāng)）
降低流動相pH值以YZ硅烷醇電離
增加緩沖液濃度
玻璃料阻塞（篩板堵塞）
倒沖洗柱（反沖色譜柱）
使用串聯(lián)（在線）過濾器
柱無效（色譜柱失效）
倒沖洗柱（反沖色譜柱）
更換柱 （色譜柱）
死體積未清掃（過大）
盡量減少連接器數(shù)量
使用較短的連接管
檢查所有配件是否緊固
分裂峰
保護(hù)柱或分析柱入口（進(jìn)樣）端污染
拆下保護(hù)柱卡套（卸除保護(hù)柱芯）并進(jìn)行分析 - 必要時更換保護(hù)柱
倒沖洗（反沖）分析柱
對于頑固殘留（強(qiáng)保留污染物），應(yīng)嘗試再生法（對色譜柱進(jìn)行再生）
更換柱
玻璃料阻塞 （篩板堵塞）
倒沖洗柱（反沖色譜柱）
使用串聯(lián)（在線）過濾器
樣品溶劑與流動相不兼容
在流動相中注入樣品 （用流動相溶解樣品）
同時洗脫第二組分
注射前使用樣品清理 （進(jìn)樣前先凈化樣品）
通過改變流動相或柱相（色譜柱固定相） 來改變選擇性
柱超載（色譜柱過載）
使用更高容量的固定相
增加柱的直徑 （增加色譜柱內(nèi)徑）
減少樣本（樣品）量
伸舌峰
柱中通道的形成 （色譜柱內(nèi)形成通道）
更換柱 （色譜柱）
在建議的色譜柱（色譜柱建議的）pH值范圍內(nèi)操作
柱超載 （色譜柱過載）
注入更少量或更稀釋的樣品溶液 （減少進(jìn)樣體積或進(jìn)一步稀釋樣品）
使用更高容量的固定相
樣品溶劑與流動相不兼容
在流動相中注入樣品（用流動相溶解樣品進(jìn)樣）
低溫
增加柱的溫度 （升高柱溫）
- ov-225填充柱色譜柱可以測出酯的峰嗎
- 氣相色譜儀不出峰的原因？
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- 求助：色譜柱的長度對于峰高和峰面積有怎樣的影響？
- 做樣品的時候，信號值比較低，峰高和峰面積比較小，如果把柱子換成短柱或把定量環(huán)加大可以使峰面積增強(qiáng)嗎？謝謝！
- 氣相色譜儀頂空進(jìn)樣不出峰，手動進(jìn)樣有峰是可以說頂空儀又問題？
- 氣相色譜的不出峰的原因有哪些？
- 氣相色譜儀不出峰怎么辦
氣相色譜儀在進(jìn)樣后檢測信號沒有變化，不出峰時該如何應(yīng)對呢？
1、降低色譜柱恒溫槽的溫度，冷卻色譜柱后，檢查載氣系統(tǒng)是否正常，載氣是否進(jìn)入儀器，以免損傷色譜柱或污染檢測器。
2、檢測器火焰是否正常。如果檢測器火焰不能點著或容易熄滅時，可以對點火線圈、點火極、氣體的流量、TCD鎢絲及鎢絲電流設(shè)置等進(jìn)行檢查，以排除故障。
3、檢查注射器是否存在問題，如堵塞等，并且需要對進(jìn)樣口和檢測器的石墨墊圈是否漏氣、色譜柱是否有斷裂漏氣等進(jìn)行檢測。
4、檢查樣品濃度、樣品進(jìn)樣量是否正確，是否存在問題。
5、對色譜柱溫度、進(jìn)樣器溫度、檢測器溫度、量程設(shè)定等分析條件進(jìn)行檢查。
6、確保儀器各部分正確連接及正常運行，如離子信號線與檢測器、放大器電路板的連接，輸出信號線與儀器、積分儀/工作站的連接等。
7、如果無法正常調(diào)零，需要對電路系統(tǒng)進(jìn)行檢查，以排除故障，如信號線、放大器電路板、輸出信號線、積分儀等是否出現(xiàn)故障。
8、觀察檢測器出口是否暢通，這點也格外重要。
- 同樣的對照品，用不同的色譜柱峰面積相同嗎
- 色譜柱能否為我的分析物提供良好的峰形？
ACE和ACE Excel硅膠基質(zhì)固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響，并且在為堿性化合物提供zhuo越峰形方面贏得了口碑。
峰拖尾可以降低分離度，降低靈敏度，甚至干擾準(zhǔn)確度和精密度（圖4）。
峰拖尾有許多潛在的原因，但分離堿性物質(zhì)時的主要原因是硅膠固定相載體顆粒表面上的酸性硅醇基與分析物上的氨基之間的相互作用（圖5）。
圖 4：峰拖尾對分離度和靈敏度的影響
隨著峰拖尾（Tf，拖尾因子）從1.0增加到2.0，分離度（Rs）從1.5下降到0.87。
由于峰寬增加以及峰面積保持不變，靈敏度（峰高）也隨著峰拖尾的增加而下降。
ACE色譜柱采用具有極低硅醇活性的超惰性硅膠制成。
這種超純硅膠采用ZL技術(shù)進(jìn)行有效鍵合和徹底封尾。
導(dǎo)致這種硅膠基質(zhì)的固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響。
ACE色譜柱的超惰性特性使其成為分離極性堿性化合物的理想選擇。
當(dāng)分離復(fù)雜堿性化合物時,與其他現(xiàn)代堿性去活色譜柱相比，ACE色譜柱總是能給出明顯更好的峰形和柱效（圖6）。
圖 5：峰拖尾相互作用
硅膠固定相載體表面上的酸性硅醇基可形成與堿性化合物相互作用的離子交換位點。
這種離子交換的相互作用通?？梢詫?dǎo)致峰保留（二次保留），并當(dāng)采用反相HPLC分離胺類化合物時引起峰拖尾。
一種幾乎消除了硅醇基對色譜分離不利影響的硅膠基質(zhì)固定相
圖 6：峰拖尾比較
條件
色譜柱尺寸：50 x 2.1 mm
流動相：40％甲醇，60％水
流速：0.2 mL/min
溫度：22oC
樣品：吡啶報告了堿性化合物（吡啶）在各種常見C18色譜柱上的塔板數(shù)。
在10％峰高下測量塔板數(shù)，以使峰拖尾納入在測量中。
ACE C18-PFP由于其超惰性性質(zhì)而達(dá)到了Z高塔板數(shù)。
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固定相名稱
特點
適用的化合物
反相色譜柱，根據(jù)特點解決非極性至極性化合物
ACE EXCEL C18
純經(jīng)典疏水C18，單一的疏水選擇性
廣泛的有機(jī)化合物
ACE EXCEL C18-AR
C18結(jié)合苯基，相當(dāng)于同時具備C18,苯基,親水AQ柱的選擇性，水穩(wěn)定， 與單一的苯基柱相比，在MS下的流失極小等同于C18,特別適合方法開發(fā)
疏水化合物，小至中等極性化合物，芳香性化合物
ACE EXCEL C18-PFP
C18結(jié)合五氟苯基，相當(dāng)于同時具備
C18,五氟苯基,親水AQ柱，及構(gòu)型的選擇性，水穩(wěn)定，與單一的五氟苯基柱相比，在MS下的流失極小等同于
C18,特別適合方法開發(fā)
疏水化合物，中至大極性化合物， 芳香性化合物，位置異構(gòu)體，同分異構(gòu)體等，發(fā)現(xiàn)更多雜質(zhì)的利器
ACE EXCEL SuperC18
chao強(qiáng)惰性的寬PH C18，酸性體系下對堿性化合物有極好峰形，堿性體系下
（PH=10.5）有很長壽命及柱效，
優(yōu)于同類的寬PH柱，適合需要通過變化
PH值的方法開發(fā)用戶
疏水化合物，大極性堿性化合物在反相下獲得很好保留與分離度的需求（堿性體系下使用）
ACE EXCEL C18-Amide
C18結(jié)合酰胺基，相當(dāng)于同時具備C18 與酰胺基的選擇性，水穩(wěn)定。相比其它公司的Amide柱，耐水，
MS下與C18一樣的低流失，超好的重現(xiàn)性與壽命，適合方法開發(fā)用戶
疏水化合物，大極性的有機(jī)酸，酚類，氨基酸，氨基酸鹽酸鹽類
ACE EXCEL CN-ES
長碳鏈結(jié)合氰基，同時具備類似C18與CN的選擇性，水穩(wěn)定，非常適合方法開發(fā)；
疏水化合物（物別有雙鍵，叁鍵差異的化合物），取代傳統(tǒng)CN，獲得重現(xiàn)穩(wěn)定性與壽命，可正相條件下使用
核殼快速分析寬PH反相柱
Ultracore SuperC18
是核殼chao強(qiáng)惰性的寬PH C18，酸性體系下對堿性化合物有極好峰形，堿性體系下（PH=10.5）有很長壽命及柱 效，優(yōu)于同類的寬PH柱，適合需要通過變化PH值的方法開發(fā)用戶，2.5u核殼有與1.7u全多孔一樣的柱效，但壓力低約一倍，壽命更長，適合UPLC快速低壓的方法開發(fā)需求
疏水化合物，大極性堿性化合物在反相下獲得很好保留與分離度的需求（酸、堿性體系下使用）
Ultracore SuperPhenyl- Hexyl
是核殼chao強(qiáng)惰性的寬PH 苯基己基柱， 酸性體系下對堿性化合物有極好峰形， 堿性體系下（PH=10.5）有很長壽命及柱效，優(yōu)于同類的寬PH柱，適合需要通過變化PH值的方法開發(fā)用戶，2.5u 核殼有與1.7u全多孔一樣的柱效，但壓力低約一倍，壽命更長，互補(bǔ)于C18的選擇性，適合UPLC快速低壓的方法開發(fā)需求
疏水化合物，芳香化合物，大極性堿性化合物在反相下獲得很好保留與分離度的需求（酸、堿性體系下使用）
表2：
Hilic反相下解決特大極性化合物的需要（流動相典型為高比例CAN與小比例水，避免用甲醇）
ACE-EXCEL Hilic-A
Hilic色譜柱，酸型交聯(lián)
適合Log P為負(fù)值的特大極性化合
物，在反相柱上難以或極弱保留的化合物的保留分離，對堿性物質(zhì)特異選擇性
ACE-EXCEL Hilic-B
Hilic色譜柱，丙胺型交聯(lián)
適合Log P為負(fù)值的特大極性化合
物，在反相柱上難以或極弱保留的化合物的保留分離，對酸性物質(zhì)特異選擇性
ACE-EXCEL Hilic-N
Hilic色譜柱，羥丙基型交聯(lián)
適合Log P為負(fù)值的特大極性化合物，在反相柱上難以或極弱保留的化合物的保留分離，通用型
其它獨立選擇性柱
ACE EXCEL NH2
可再生NH2
單糖，乳糖，蜂蜜中糖檢測
ACE Sil
正相Sil
大豆磷脂類，其它需正相的色譜柱
ACE EXCEL C18-HL
高碳載量C18
分離單一疏水差異極小物質(zhì)
ACE EXCEL Phenyl
獨立苯基
適合芳環(huán)類化合物的單一特別作用
ACE EXCEL C8
獨立C8柱
單一需求C8的用戶
ACE EXCEL AQ
獨立親水柱
適合反相下單一極性化合物
所有ACE產(chǎn)品均為超惰性硅膠基質(zhì)，對堿性化合物有Z佳峰形，基本對Et3N免疫！所有色譜柱有各 種粒徑(1.7u,2u,3u,5u,10u)，長短(20-300mm)，內(nèi)徑(0.075-50mm)組合選擇。
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