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  tygkj0 2008-11-16 00:00:00

  酶促反應速度V ，底物濃度S ，酶濃度E ，反應時間T， 產物濃度P ，米氏常數(shù)Km 研究酶促反應是為了測定酶活力，而所說的酶促反應速度是指初速度。 酶促反應速率曲線圖（P-T）表明，在Z初T內，P與T呈直線關系，即V保持不變，隨著T延長，V下降。原因是：逆反應加速，PH的改變影響酶活力，產物對酶的YZ等。要排除上述干擾，測酶活時只能用直線部分，即初速度。 在任何S下，V都與E成正比 初V與T無關 當S<<Km時，V與S成正比 當S>>Km時，V=Vmax

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  461068727 2008-11-15 00:00:00

  你說的是控制變量法研究嗎？ 一般保持一個變量 即 底物濃度不變 不同的酶濃度梯度 來研究酶活性 活著酶濃度不變 研究底物不同濃度對酶活性影響

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  mdaocax4206 2008-11-15 00:00:00

  酶消化時間通常依酶的濃度，底物的濃度和純度而定，通常是30 分鐘到2 個小時，甚至更長些，但不能過長。因為商品酶極有可能含有雜酶，時間過久，微量的雜酶的酶反應也會積累到干擾整個酶反應的程度。 一般保持一個變量 即 底物濃度不變 不同的酶濃度梯度 來研究酶活性 活著酶濃度不變 研究底物不同濃度對酶活性影響 如果買過來的商品酶的話 基本上每個酶都有說明的 多少當量的底物對應多少酶 注意溫度對酶活性的影響 這個因素很重要 還有純度也會有較大影響

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  ttnkttnkttnktt 2008-11-15 00:00:00

  當?shù)孜餄舛茸銐驎r，酶濃度越大反應速率越快，這個時間就要看底物有多少了 當?shù)孜餄舛纫欢〞r，起初還是酶濃度越大反應越快，隨著時間消逝，由于底物濃度不斷減少直到不足，反應時間也停止，即使酶濃度再大也無法反應了 以上都是在溫度等影響酶活性條件不變時 作圖時要注意情況1，橫底物濃度，縱反應速率，是逐漸放緩的曲線 情況2 橫酶的濃度，縱反應速率 正比例直線

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  微影中心1 2017-09-07 00:56:02

  酶促反應動力學（kinetics of enzyme-catalyzed reactions）： 酶反應動力學主要研究酶催化的反應速度以及影響反應速度的各種因素。在探討各種因素對酶促反應速度的影響時，通常測定其初始速度來代表酶促反應速度，即底物轉化量<5%時的反應速度。 1．底物濃度對反應速度的影響： ⑴底物對酶促反應的飽和現(xiàn)象：由實驗觀察到，在酶濃度不變時，不同的底物濃度與反應速度的關系為一矩形雙曲線，即當?shù)孜餄舛容^低時，反應速度的增加與底物濃度的增加成正比（一級反應）；此后，隨底物濃度的增加，反應速度的增加量逐漸減少（混合級反應）；Z后，當?shù)孜餄舛仍黾拥揭欢繒r，反應速度達到一Z大值，不再隨底物濃度的增加而增加（零級反應）。 ⑵米氏方程及米氏常數(shù)：根據(jù)上述實驗結果，Michaelis & Menten 于1913年推導出了上述矩形雙曲線的數(shù)學表達式，即米氏方程： ν= Vmax[S]/(Km+[S])。其中，Vmax為Z大反應速度，Km為米氏常數(shù)。 ⑶Km和Vmax的意義： ①當ν=Vmax/2時，Km=[S]。因此，Km等于酶促反應速度達Z大值一半時的底物濃度。 ②當k-1>>k+2時，Km=k-1/k+1=Ks。因此，Km可以反映酶與底物親和力的大小，即Km值越小，則酶與底物的親和力越大；反之，則越小。 ③Km可用于判斷反應級數(shù)：當[S]<0.01Km時，ν=（Vmax/Km）[S]，反應為一級反應，即反應速度與底物濃度成正比；當[S]>100Km時，ν=Vmax，反應為零級反應，即反應速度與底物濃度無關；當0.01Km<[S]<100Km時，反應處于零級反應和一級反應之間，為混合級反應。 ④Km是酶的特征性常數(shù)：在一定條件下，某種酶的Km值是恒定的，因而可以通過測定不同酶（特別是一組同工酶）的Km值，來判斷是否為不同的酶。 ⑤Km可用來判斷酶的Z適底物：當酶有幾種不同的底物存在時，Km值Z小者，為該酶的Z適底物。 ⑥Km可用來確定酶活性測定時所需的底物濃度：當[S]=10Km時，ν=91%Vmax，為Z合適的測定酶活性所需的底物濃度。 ⑦Vmax可用于酶的轉換數(shù)的計算：當酶的總濃度和Z大速度已知時，可計算出酶的轉換數(shù)，即單位時間內每個酶分子催化底物轉變?yōu)楫a物的分子數(shù)。 ⑷Km和Vmax的測定：主要采用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法和Hanes作圖法。 2．酶濃度對反應速度的影響：當反應系統(tǒng)中底物的濃度足夠大時，酶促反應速度與酶濃度成正比，即ν=k[E]。 3．溫度對反應速度的影響：一般來說，酶促反應速度隨溫度的而加快，但當溫度增加達到某一點后，由于酶蛋白的熱變性作用，反應速度迅速下降。酶促反應速度隨溫度升高而達到一Z大值時的溫度就稱為酶的Z適溫度。酶的Z適溫度與實驗條件有關，因而它不是酶的特征性常數(shù)。低溫時由于活化分子數(shù)目減少，反應速度降低，但溫度升高后，酶活性又可恢復。 4．pH對反應速度的影響：觀察pH對酶促反應速度的影響，通常為一鐘形曲線，即pH過高或過低均可導致酶催化活性的下降。酶催化活性Z高時溶液的pH值就稱為酶的Z適pH。人體內大多數(shù)酶的Z適pH在6.5～8.0之間。酶的Z適pH不是酶的特征性常數(shù)。 5．YZ劑對反應速度的影響： 凡是能降低酶促反應速度，但不引起酶分子變性失活的物質統(tǒng)稱為酶的YZ劑。按照YZ劑的YZ作用，可將其分為不可逆YZ作用和可逆YZ作用兩大類。 ⑴不可逆YZ作用： YZ劑與酶分子的必需基團共價結合引起酶活性的YZ，且不能采用透析等簡單方法使酶活性恢復的YZ作用就是不可逆YZ作用。如果以ν～[E]作圖，就可得到一組斜率相同的平行線，隨YZ劑濃度的增加而平行向右移動。酶的不可逆YZ作用包括專一性YZ（如有機磷農藥對膽堿酯酶的YZ）和非專一性YZ（如路易斯氣對巰基酶的YZ）兩種。 ⑵可逆YZ作用： YZ劑以非共價鍵與酶分子可逆性結合造成酶活性的YZ，且可采用透析等簡單方法去除YZ劑而使酶活性完全恢復的YZ作用就是可逆YZ作用。如果以ν～[E]作圖，可得到一組隨YZ劑濃度增加而斜率降低的直線?？赡鎅Z作用包括競爭性、反競爭性和非競爭性YZ幾種類型。 ① 競爭性YZ：YZ劑與底物競爭與酶的同一活性ZX結合，從而干擾了酶與底物的結合，使酶的催化活性降低，這種作用就稱為競爭性YZ作用。其特點為：a.競爭性YZ劑往往是酶的底物類似物或反應產物；b.YZ劑與酶的結合部位與底物與酶的結合部位相同；c.YZ劑濃度越大，則YZ作用越大；但增加底物濃度可使YZ程度減??；d.動力學參數(shù)：Km值增大，Vm值不變。典型的例子是丙二酸對琥珀酸脫氫酶（底物為琥珀酸）的競爭性YZ和磺胺類藥物（對氨基苯磺酰胺）對二氫葉酸合成酶（底物為對氨基苯甲酸）的競爭性YZ。 ② 反競爭性YZ：YZ劑不能與游離酶結合，但可與ES復合物結合并阻止產物生成，使酶的催化活性降低，稱酶的反競爭性YZ。其特點為：a.YZ劑與底物可同時與酶的不同部位結合；b.必須有底物存在，YZ劑才能對酶產生YZ作用；c.動力學參數(shù)：Km減小，Vm降低。 ③ 非競爭性YZ：YZ劑既可以與游離酶結合，也可以與ES復合物結合，使酶的催化活性降低，稱為非競爭性YZ。其特點為：a.底物和YZ劑分別獨立地與酶的不同部位相結合；b.YZ劑對酶與底物的結合無影響，故底物濃度的改變對YZ程度無影響；c.動力學參數(shù)：Km值不變，Vm值降低。 6．激活劑對反應速度的影響：能夠促使酶促反應速度加快的物質稱為酶的激活劑。酶的激活劑大多數(shù)是金屬離子，如K+、Mg2+、Mn2+等，唾液淀粉酶的激活劑為Cl-。

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