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問(wèn)答社區(qū)

PCR純化的原理

石宇辰stlye 2010-07-11 05:38:32 588  瀏覽
  • RT 要求具體,有網(wǎng)址也行

參與評(píng)論

全部評(píng)論(4條)

  • 馬莎520 2010-07-12 00:00:00
    1 過(guò)柱回收,利用XX膜吸附DNA; 2 磁珠吸附純化DNA 3 玻璃奶吸附純化DNA 具體的問(wèn)人家試劑公司吧

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    評(píng)論

  • 潛新兒 2010-07-20 00:00:00
    可以到QIAGEN,博大泰克,TAKALA等公司網(wǎng)站上去看具體產(chǎn)品!

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    評(píng)論

  • 梅眉辣擠誘犢 2010-07-12 00:00:00
    PCR技術(shù)的基本原理 類似于DNA的 天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加 熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;②模板DNA與引 物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 2~4分鐘,2~3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。到達(dá)平臺(tái)期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

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    評(píng)論

  • jmbmbmbmbm 2017-10-14 20:13:21
    你說(shuō)的是PCR產(chǎn)物的純化吧? 先用溶液溶解含DNA的瓊脂糖凝膠,然后加入有吸附柱的離心管中 吸附柱吸附DNA 離心,將含瓊脂糖的溶液去除; 接下來(lái)加入去鹽的漂洗液進(jìn)一步去除雜質(zhì);因PH值的原因,DNA還是吸附在吸附柱上的膜上; Z后加入純水或者TE溶解液,在這個(gè)條件下DNA會(huì)溶解在其中,通過(guò)離心將液體離下來(lái),得到的液體就是純化好的PCR產(chǎn)物了

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