2019年底，新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)肆虐，它的出現(xiàn)及其在世界范圍內(nèi)的廣泛傳播引發(fā)科技工作者對(duì)ZL新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)藥物的廣泛關(guān)注。鑒于COVID-19的高傳播性，并且目前尚沒(méi)有疫苗對(duì)其進(jìn)行有效預(yù)防，研發(fā)ZL該肺炎的藥物就變得尤為重要。Z近，瑞德西韋、磷酸氯喹和法匹拉韋等多種藥物已被證明在抗擊COVID-19方面具有潛在活性。

       迪馬科技一直致力于為藥物研發(fā)和檢測(cè)提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持，針對(duì)抗COVID-19藥物檢測(cè)，迪馬科技技術(shù)人員開(kāi)發(fā)了一種快速LC-MS/MS方法。應(yīng)用該方法可以同時(shí)快速測(cè)定6種潛在ZL藥物。本方法選用Endeavorsil^? 1.8 μm C18色譜柱，在4.5分鐘內(nèi)即可完成6種藥物的同時(shí)檢測(cè)。方法具有簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)。可以預(yù)期，該方法的應(yīng)用必將使得這些潛在藥物的檢測(cè)變得更加方便、GX，并有助于抗COVID-19藥物的進(jìn)一步研究和檢測(cè)。

       六種化合物的分子結(jié)構(gòu)如下：

瑞德西韋

磷酸氯喹

法匹拉韋

洛匹那韋

沙奎那韋

利托那韋

1、適用范圍

       本方法適用于瑞德西韋、磷酸氯喹、法匹拉韋、洛匹那韋、沙奎那韋、利托那韋6種潛在ZLCOVID-19藥物的檢測(cè)。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

       單標(biāo)儲(chǔ)備液：磷酸氯喹溶于甲醇:水(1:1 v/v)混合溶液中，瑞德西韋、法匹拉韋、洛匹那韋、沙奎那韋、利托那韋溶于甲醇溶液中。

       單標(biāo)中間液：將各單標(biāo)儲(chǔ)備液配置成4 mg/mL的中間液，稀釋液為甲醇。

       混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：各單標(biāo)濃度見(jiàn)表一，稀釋液為流動(dòng)相。

3、色譜條件

       色譜柱：Endeavorsil^? 1.8 μm C18, 100 × 2.1 mm(Cat＃: 87003)

       液相系統(tǒng)：Agilent 1290 Infinity UPLC、AB SCIEX 4000 + MS

       流動(dòng)相：A:0.1％甲酸水溶液   B:0.1％甲酸乙腈溶液 

       流速：0.2 mL/min  

       進(jìn)樣量：1 μL

       溫度：30 ℃

       掃描方式：ESI +

       梯度設(shè)置：

4、檢測(cè)結(jié)果

圖1六種化合物檢測(cè)TIC圖

圖2 六種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖

表1六種化合物檢測(cè)參數(shù)和結(jié)果

       利用Endeavorsil^? 1.8 μm C18色譜柱，6種潛在ZLCOVID-19藥物能夠在4.5分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)完全分離 (圖1)。表1列出了洗脫順序、樣品濃度、保留時(shí)間、離子對(duì)信息。

5、結(jié)論

　　本文提供了一種有效的同時(shí)檢測(cè)6種潛在ZLCOVID-19藥物的方法，其優(yōu)點(diǎn)包括：流動(dòng)相簡(jiǎn)單、分析速度快、靈敏度高和色譜峰形良好。據(jù)檢索，本方法為國(guó)內(nèi)外shou次利用LC-MS/MS同時(shí)分離、測(cè)試和確證6種潛在ZLCOVID-19藥物的檢測(cè)方法。迪馬科技希望本方法能夠?yàn)镃OVID-19ZL藥物在研發(fā)、生產(chǎn)以及臨床試驗(yàn)等階段的常規(guī)測(cè)試中提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持。

６、相關(guān)產(chǎn)品信息

       LC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定6種潛在ZL新型冠狀病毒肺炎藥物相關(guān)產(chǎn)品信息：

       針對(duì)“新型冠狀病毒 2019nCoV”，博日公司diyi時(shí)間推出了基于不同樣本來(lái)源、樣本量的核酸提取及熒光定量 PCR檢測(cè)的方案，詳細(xì)介紹如下：

       一、樣本前處理

       二、核酸提取
       核酸提取是分子檢測(cè)的基礎(chǔ)，高質(zhì)量核酸也是保證下游檢測(cè)結(jié)果的前提，博日的核酸提取深得廣大疾控、臨床和科研院?？蛻舻男刨嚭拖矏?ài)，無(wú)論是病毒類(lèi)還是病原體類(lèi)的試劑盒均能保證高質(zhì)量的核酸提取。

      場(chǎng)景一：適用于大于等于 16個(gè)樣本的新型冠狀病毒等病毒核酸的提取

       配套試劑和儀器：

       特點(diǎn)：

       GX快速：博日儀器能實(shí)現(xiàn) 35min內(nèi)快速實(shí)現(xiàn) 3296個(gè)樣本的高通量自動(dòng)化核酸提?。?/p>

       靈敏度高：DNA病毒可以達(dá)到 10I U/ mL，RNA病毒可以達(dá)到 50I U/ mL；

       操作簡(jiǎn)單：使用預(yù)分裝試劑盒僅需加入樣本與 pK即可上機(jī)操作，且提取無(wú)需核酸助沉劑，保證了多次實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性；

       應(yīng)用廣泛：本試劑盒均采用前沿技術(shù)，適用樣本類(lèi)型廣泛，可輕松提取如痰液、唾液、肺泡灌洗液、 （鼻咽）拭子、培養(yǎng)細(xì)胞及其他體液樣本 （如全血、血漿、血清、腹水、腦脊液、口腔液等）等中的病毒核酸，可用于下游如 NGS，qPCR等的檢測(cè)；

       穩(wěn)定可靠：博日全自動(dòng)核酸提取純化儀配備更全面的深孔加熱模塊，大幅度降低預(yù)設(shè)溫度與管內(nèi)實(shí)際溫差，較小孔間溫度差，從而極大地提高了裂解和洗脫的效率，試劑配套儀器，使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

       場(chǎng)景二：適用于大于等于 16個(gè)樣本的新型冠狀等病毒、支原體類(lèi)、衣原體類(lèi)及細(xì)菌類(lèi)等引起呼吸道疾病的病原體的核酸提取。

       配套試劑＆儀器：

       特點(diǎn)：

       GX快速：博日儀器配套試劑能實(shí)現(xiàn) 40min內(nèi)快速實(shí)現(xiàn) 3296個(gè)樣本的高通量自動(dòng)化核酸提取；

      靈敏度高：DNA病毒可以達(dá)到 10I U/ mL，RNA病毒可以達(dá)到 50I U/ mL；

      操作簡(jiǎn)單：獨(dú)特的裂解成分能將樣本中的病毒、支原體、衣原體或革蘭陰性、陽(yáng)性細(xì)菌的核酸輕松釋放，配合預(yù)分裝試劑盒，得到高質(zhì)量的核酸；

       應(yīng)用廣泛：本試劑盒均采用前沿技術(shù)，適用樣本類(lèi)型廣泛，可輕松提取如痰液、唾液、肺泡灌洗液、（鼻咽）拭子、培養(yǎng)細(xì)胞及其他體液樣本（如全血、血漿、血清、腹水、腦脊液、口腔液等）等的病原體核酸，適用于下游 NGS，qPCR檢測(cè)；

       穩(wěn)定可靠：博日全自動(dòng)核酸提取純化儀配備更全面的深孔加熱模塊，大幅度降低預(yù)設(shè)溫度與管內(nèi)實(shí)際溫差，且 NPA96核酸具有水平震蕩模式，可同時(shí)進(jìn)行前處理，試劑配套儀器，使檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。

       簡(jiǎn)單快速：整個(gè)提取過(guò)程在 30mi n內(nèi)完成；

       應(yīng)用范圍廣：本試劑盒均采用前沿技術(shù)，適用樣本類(lèi)型廣泛，可輕松提取痰液、唾液、肺泡灌洗液、 （鼻咽）拭子、培養(yǎng)細(xì)胞及其他體液樣本（如全血、血漿、血清、腹水、腦脊液、口腔液等），適用于下游 NGS，qPCR檢測(cè)；

       高靈敏：DNA病毒可以達(dá)到 10I U/ mL，RNA病毒可以達(dá)到 100I U/ mL；

       安全性高：產(chǎn)品中無(wú)有毒試劑；

       穩(wěn)定性好：常溫保存；

       純度高：純化后的病毒核酸不含 PCR/ RTPCRYZ劑等污染物

       三、Real Ti me熒光定量 PCR檢測(cè)

       實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法是目前公認(rèn)的病原微生物分子檢測(cè)和鑒定技術(shù)，博日在微生物定量 PCR分析方面，提供Z精確，Z靈敏的檢測(cè)方案。

       針對(duì)場(chǎng)景: 適用于 2019nCoV新冠狀病毒等核酸的熒光定量檢測(cè)

       可靠性：選取新型冠狀病毒（2019nCoV）WuhanHu1株 Or f 1ab以及 N基因區(qū)，設(shè)計(jì)同時(shí)覆蓋該基因兩個(gè)位點(diǎn)的兩組特異性引物及熒光探針，而對(duì)其它冠狀病毒無(wú)交叉反應(yīng)。采用GX的一步法熒光 RTPCR反應(yīng)系統(tǒng)確保檢測(cè)結(jié)果的靈敏度和準(zhǔn)確性。

       特異性：適用于新型冠狀病毒核酸檢測(cè)，與甲型 H1N1，冠狀病毒 OC43，冠狀病毒 HKU1等核酸，甲型 H1N1流感病毒、甲 3型流感病毒、乙型流感病毒、冠狀病毒 OC43、冠狀病毒 HKU1、冠狀病毒 229E、冠狀病毒 NL63等臨床陽(yáng)性樣本、中東呼吸綜合征冠狀病毒等樣本均無(wú)交叉反應(yīng)。

       防污染：一步法完成 RTPCR，無(wú)須逆轉(zhuǎn)錄及 PCR處理，完全閉管擴(kuò)增和檢測(cè)，同時(shí)避免假陽(yáng)性結(jié)果。

       操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短：只需 1. 5個(gè)小時(shí)即可完成結(jié)果判讀。

（來(lái)源：杭州博日科技有限公司）

維生素是維持人體生命活動(dòng)所必需的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，大多數(shù)由食物供給，屬于人體內(nèi)的一類(lèi)調(diào)節(jié)物質(zhì)。維生素分為水溶維生素和脂溶維生素，脂溶性維生素是不溶于水而溶于脂類(lèi)的一類(lèi)維生素，在人體生長(zhǎng)、代謝、發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，包含維生素A、維生素D、維生素E和維生素K。

VD在肝臟可轉(zhuǎn)化為25羥基維生素D(25OH-VD)，其濃度水平與體內(nèi)的VD直接相關(guān)，因此體內(nèi)25OH-VD2、25OH-VD3可作為檢測(cè)VD水平的生物標(biāo)志物。VK是激活凝血因子以及蛋白質(zhì)C和S的必須輔助因子，目前已知主要有K1、K2、K3、K4幾種形式，四烯甲萘醌VK2(MK4)既是VK2的家族成員，也是肝外組織中K1的代謝物。當(dāng)這些脂溶性維生素缺乏或過(guò)量時(shí)均會(huì)對(duì)人體造成傷害。具體見(jiàn)下表：

一次性評(píng)估體內(nèi)多種維生素水平，才能全面“查漏補(bǔ)缺”。準(zhǔn)確測(cè)定人體中性維生素的含量，可以幫助臨床醫(yī)生準(zhǔn)確評(píng)估人體維生素營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)、吸收障礙或毒性水平。

解決方案

沃特世團(tuán)隊(duì)依托質(zhì)譜平臺(tái)ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-S IVD和 TQ-XS IVD開(kāi)發(fā)了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)技術(shù)在維生素檢測(cè)中的應(yīng)用，在5 min內(nèi)即可完成6種脂溶性維生素的同時(shí)分析。前處理采用Andrew Alliance機(jī)器人搭配Oasis μElution PRiME HLB的固相萃取板，實(shí)現(xiàn)樣本前處理自動(dòng)化，并解決LC-MS/MS檢測(cè)維生素的各種挑戰(zhàn)和難點(diǎn)。該方法檢出限低、分離效果好、穩(wěn)定性佳，可滿足臨床高通量自動(dòng)化檢測(cè)需求。

圖1. Andrew+移液機(jī)器人用于6種脂溶性維生素前處理操作時(shí)的工作臺(tái)布局，以及ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-XS IVD檢測(cè)平臺(tái)。

實(shí)驗(yàn)部分

 前處理

• 樣本預(yù)處理：取100 μL 血清或者BSA稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，加入內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混勻，隨后加入乙腈沉淀蛋白，離心取上清液，做SPE凈化。

 液相色譜條件

• 液相色譜系統(tǒng)：ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)
  

• 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱, 1.7 μm，2.1 mm x 50 mm

• 進(jìn)樣體積：5 μL

結(jié)果與討論

 高通量，一針進(jìn)樣，同時(shí)檢測(cè)

該方案5 min內(nèi)即可完成6種脂溶性維生素的同時(shí)測(cè)定，可同時(shí)檢測(cè)血清中維生素A(VA)、25-羥基維生素D2(25OHVD2)、25-羥基維生素D3(25OHVD3)、維生素E(VE)、維生素K1(VK1)、四烯甲萘醌K2(VK2-MK-4)，真正實(shí)現(xiàn)“一針進(jìn)樣，同時(shí)檢測(cè)”。

圖2. 6種脂溶性維生素的標(biāo)準(zhǔn)品和血清色譜圖。

 靈敏度高，線性范圍寬，滿足臨床檢測(cè)需求

正常人體血清中維生素A含量113 - 977 ng/mL；維生素E含量3.8 - 17 μg/mL；維生素D含量20 - 50 ng/mL；維生素K1含量為0.10 - 2.20 ng/mL。由于6種脂溶性維生素在血清中含量差異較大，VK1、MK4和25OH-VD2含量低，同時(shí)測(cè)定高低濃度物質(zhì)是串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定的難點(diǎn)，常存在低濃度、靈敏度差及高濃度過(guò)飽和現(xiàn)象。而Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD優(yōu)異的靈敏度及超寬線性范圍，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)準(zhǔn)確定量這幾種維生素。

自動(dòng)化前處理，滿足高通量檢測(cè)需求

Andrew+機(jī)器人可在無(wú)人值守狀態(tài)下自動(dòng)完成移液、震蕩、混勻和96孔板SPE前處理過(guò)程。不僅大幅節(jié)省了樣品處理的時(shí)間，提高了通量，還可以簡(jiǎn)化樣品制備過(guò)程、減少實(shí)驗(yàn)失誤，從而確保分析結(jié)果的穩(wěn)定重現(xiàn)。手動(dòng)前處理96個(gè)樣本的時(shí)間大概是2 - 3 h。如果用Andrew+做自動(dòng)化前處理，只需要提前把溶劑和樣本放到設(shè)置好的Domino blocks里中就可以完成自動(dòng)化前處理和SPE流程。過(guò)程僅需不到1 h就可以完成。

結(jié)論

本方案使用Waters UPLC I-Class超高效液相色譜系統(tǒng)搭載UPLC色譜柱進(jìn)行分離，再用Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀對(duì)血清樣品中6種脂溶性維生素定量檢測(cè)。96個(gè)樣本的前處理不到1 h，每個(gè)樣本的液相分析時(shí)間僅5 min，每天可以檢測(cè)至少200例樣本。6個(gè)脂溶性維生素的加標(biāo)回收率85% - 115%之間，精密度RSD<8%，保證該方法檢測(cè)樣品的準(zhǔn)確性和可靠性，可適用于臨床高通量、自動(dòng)化的樣品檢測(cè)。

全封閉Naica數(shù)字PCR新型冠狀病毒超敏檢測(cè)方案

Cycloud與MicroFuture合作

深藍(lán)云生物科技與北京微未來(lái)科技，基于國(guó)家疾控ZX和WHO推薦區(qū)域，針對(duì)2019新型冠狀病毒的四段保守序列作為檢測(cè)靶標(biāo)，開(kāi)發(fā)超敏的數(shù)字PCR檢測(cè)方法和快速的定量PCR檢測(cè)方法。

【圖源：北京微未來(lái)科技】

區(qū)段分別為：RdRP基因（特異性靶點(diǎn)），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S區(qū)位點(diǎn)。確保對(duì)2019新型冠狀病毒鑒定的高度特異性和靈敏度。      

與人冠狀病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型無(wú)交叉。

深藍(lán)云生物科技以專業(yè)服務(wù)科學(xué)為使命，愿所學(xué)，以致用，共戰(zhàn)病毒！

北京微未來(lái)科技有限公司以“解碼病原微生物，致力于傳染病防控”為企業(yè)使命。與北京深藍(lán)云生物科技共同在病毒的超敏檢測(cè)的數(shù)字PCR方法展開(kāi)深入合作。 

聯(lián)系方式：

公司名稱：北京深藍(lán)云生物科技有限公司
聯(lián)系電話：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

紫外線燈能殺死新型冠狀病毒嗎？

根據(jù)新發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療快速指南》，75%酒精、yi醚、氯仿、甲醛、含氯消毒劑、過(guò)氧乙酸和紫外線均可滅活病毒。因此，醫(yī)用紫外燈對(duì)殺滅病毒是有效的。

國(guó)家電光源質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)ZX（北京）的微信公眾號(hào)“國(guó)家電光源ZXNLTC”于2020年2月4日發(fā)布的《紫外線殺菌燈在防護(hù)2019新型冠狀病毒傳播中的應(yīng)用》中記載：“以ZX波長(zhǎng)253.7nm為代表的紫外輻射對(duì)細(xì)菌和病毒具有廣譜殺滅作用，其有效性在SARS病毒上得到了試驗(yàn)驗(yàn)證，理論上，基于紫外輻射的核酸破壞作用，一定劑量的紫外輻射可殺滅2019新型冠狀病毒，在無(wú)人條件下使用紫外殺菌燈，其殺菌消毒作用可通過(guò)破壞傳播途徑的方式達(dá)到傳染防護(hù)目的。”