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- dshdjd你 2017-05-16 00:00:00
- 高： 原理： 1.析溶解NaC1溶液DNA 2.用冷酒精提取含雜質(zhì)較少DNA 3.DNA沸水浴二苯胺染藍(lán)色 步驟： 1．提取細(xì)胞核物質(zhì)：順針向攪拌稍快稍重 5 min 2．溶解DNA： 3．析含DNA黏稠物：蒸餾水300mL逆針向攪拌緩慢 4．濾：取黏稠物 5．再溶解：順針向攪拌較慢3 min 6．濾：取濾液 7．提取含雜質(zhì)較少DNA逆針向攪拌稍慢5 min 8．DNA鑒定：沸水浴5min DNA提取三基本步驟每步驟具體根據(jù)品種類(lèi)、影響提取物質(zhì)及續(xù)步驟同區(qū)別 利用研磨或者超聲破碎細(xì)胞并通加入污劑除掉膜脂 加入蛋白酶醋酸鹽沉淀或者酚/氯仿抽提除掉細(xì)胞內(nèi)蛋白與DNA結(jié)合組蛋白 DNA冷乙醇或異丙醇沉淀DNA醇溶黏起步能除掉鹽 另外目前利用吸附柱提取DNA商業(yè)化試劑盒 2.細(xì)胞破碎 細(xì)菌堅(jiān)硬細(xì)胞壁首先要破碎經(jīng)胞三種;①機(jī)械：超聲波處理、研磨、勻漿;②化試劑：用SDS處理細(xì)胞;③酶解：加入溶菌酶或蝸牛酶都使細(xì)胞壁破碎 3.DNA提取幾種 (1).濃鹽 A. 利用RNADNA電解溶液溶解度同二者離用用1M 氯 納提取化鈉抽提，DNP粘液與含少量辛醇 氯仿起搖蕩，使乳化，再離除蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)凝膠停留水相及氯仿相間DNA位于層水相，用2倍體積95%乙醇DNA 鈉鹽沉淀. B. 用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除RNP，再1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇除蛋白. 兩種比較，種使核酸降解能少些. C.稀鹽酸溶液提取DNA ，加入適量污劑，SDS助于蛋白質(zhì)與DNA 離提取程YZ組織DNaseDNA 降解作用，氯化鈉溶液加入檸檬酸鈉作金屬離烙合劑.通用.15MNaCL，0.015M檸檬鈉，并稱(chēng)SSC溶液，提取DNA. （2）.陰離污劑; 用SDS或二甲苯酸鈉等污劑使蛋白質(zhì)變性，直接物材料提取DNA .由于細(xì)胞DNA與蛋白質(zhì)間借靜電引力或配位鍵結(jié)合，陰離污劑能夠破壞種價(jià)鍵，所用陰離污劑提取DNA （3）.苯酚抽提：苯酚作蛋白變性劑，同YZDNase降解作用.用苯酚處理勻漿液，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白表面含極性基團(tuán)與苯酚相似相溶蛋白溶于酚相DNA溶于水相離層取水層重復(fù)操作再合并含DNA 水相利用核酸溶于醇性質(zhì)用乙醇沉淀DNA DNA十粘稠物質(zhì)用玻璃漫漫繞團(tuán)取特點(diǎn)使提取DNA保持狀態(tài) （4）.水抽提:利用核酸溶解于水性質(zhì)，組織細(xì)胞破碎，用低鹽溶液除RNA沉淀溶于水使DNA充溶解于水，離收集清液.清加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌攪.別用66% 80%95%乙醇及丙銅洗滌，空氣干燥，既DNA品.提取DNA蛋白質(zhì)含量較高，故般用.除蛋白加改良，提取程加入SDS.
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