本生資訊| ELISA試劑盒的真?zhèn)稳绾舞b別?

　　在國(guó)內(nèi)生物研究蓬勃發(fā)展的現(xiàn)在，假冒無視科學(xué)研究的嚴(yán)謹(jǐn)性和嚴(yán)肅性，讓廣大的科研工作者被動(dòng)造假，嚴(yán)重破壞了科研氛圍，擾亂了市場(chǎng)秩序，聯(lián)科生物整理了一些鑒別這些假冒偽劣ELISA試劑盒的方法，供廣大的科研工作者和用戶參考，讓希望對(duì)廣大科研工作者有所幫助。

　　購(gòu)買前

　　【方法一】向廠家索要或從其網(wǎng)站下載說明書，查找ELISA的性能指標(biāo)：準(zhǔn)確度(加標(biāo)回收率、稀釋線性)、精密度(板內(nèi)差、板間差)、靈敏度、樣本值、特異性、校準(zhǔn)。一般來說，除了校準(zhǔn)不一定每份說明書都有外，其余的指標(biāo)一般都需要羅列(部分樣本需要高倍稀釋的，可能沒有準(zhǔn)確度這個(gè)指標(biāo))。如果無法提供這些性能指標(biāo)，則說明該試劑盒可能是假貨，或者試劑盒開發(fā)過程不夠科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，有可能無法檢測(cè)出真實(shí)的樣本值。

　　【方法二】對(duì)于夸大ELISA涵蓋的指標(biāo)的范圍，尤其是不常見的種屬，可先去ELISA試劑盒網(wǎng)站上搜索，如果搜索不到該種屬的ELISA試劑盒，則有可能是假貨，需要小心謹(jǐn)慎。

　　【方法三】將“廠家名”、“ELISA”和“假貨”等關(guān)鍵詞在網(wǎng)上搜索，有的網(wǎng)站或論壇都會(huì)有打假曝光臺(tái)。

　　購(gòu)買后

　　【方法一】檢查說明書、包裝盒的質(zhì)量，通常假冒偽劣產(chǎn)品為了降低成本，印刷的質(zhì)量會(huì)比較差。其次仔細(xì)閱讀說明書，如上所示查找ELISA的性能指標(biāo)。

　　【方法二】

　?、?利用干擾實(shí)驗(yàn)即可鑒別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原，方法如下：

　　(1)將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody:antigen=1:2的混合孵育液

　　(2)37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體

　　(3)后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物

　　(4)實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是非目的抗原，該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。

　　(5)如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性，則說明試劑盒檢測(cè)抗體已被目的抗原中和或干擾，影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測(cè)作用，則該試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是目的抗原。

　?、?如果購(gòu)買了兩盒同一公司的ELISA試劑盒A和B，利用交叉實(shí)驗(yàn)即可鑒別ELISA試劑盒是否造假，方法如下：

　　(1)取出購(gòu)買的試劑盒A的包被板兩條。

　　(2)一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(3)另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(4)后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物。

　　(5)實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線一致則說明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的同一個(gè)指標(biāo)而非A和B，即該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。

　　(6)如果兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線不一致則說明兩個(gè)ELISA試劑盒檢測(cè)的不同指標(biāo)，試劑盒A只能檢測(cè)A，不能檢測(cè)B，即該試劑盒為正常的ELISA試劑盒。

　　ELISA 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來。

激光遙距甲烷檢測(cè)儀如何鑒別真?zhèn)?

       據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，歐洲烈酒的出口額達(dá)到了 100 億歐元，帶來了近 90 億歐元的貿(mào)易凈差額，成為歐洲地區(qū)價(jià)值Z高的農(nóng)產(chǎn)品出口項(xiàng)目。正如歐盟的成員國(guó)一樣，蒸餾酒也是種類繁多，共有 46 個(gè)品種，包括一系列蘊(yùn)含產(chǎn)區(qū)和歐盟文化的產(chǎn)品。比如蘇格蘭威士忌是Z為暢銷的威士忌品牌，銷往 200 多個(gè)國(guó)家。2014 年蘇格蘭威士忌出口額達(dá) 39.5 億歐元，相當(dāng)于英國(guó)每秒就有 135 歐元的貿(mào)易凈差額。蘇格蘭威士忌以及其他知名歐洲烈酒作為優(yōu)質(zhì)的化產(chǎn)品 , 因此也成為非法造假者的主要造假對(duì)象。

       偽造產(chǎn)品影響商品的直銷：它損害了品牌和烈酒類的聲譽(yù), 其引發(fā)食品安全問題也令人擔(dān)憂 , 這些問題也對(duì)相關(guān)的烈酒生產(chǎn)商造成影響。造假者使用工業(yè)酒精生產(chǎn)假冒偽劣的烈酒，降低了品質(zhì)的同時(shí)嚴(yán)重危害了消費(fèi)者的健康。

       工業(yè)酒精中添加了化學(xué)物質(zhì)使其不能飲用。按照法律規(guī)定添加的痕量物質(zhì)如飲用能造成重大的健康危害。甲乙酮和甲醇這些化合物添加到工業(yè)酒精中能有效防止其被用于飲用消費(fèi)。

       大量的分析技術(shù)被用來檢測(cè)攙假的威士忌和烈酒。威士忌和烈酒的摻假鑒定方法眾多，但這些方法需在實(shí)驗(yàn)室里操作，并由經(jīng)驗(yàn)豐富的操作員來進(jìn)行樣品分析。本文建立了便攜式氣相色譜質(zhì)譜儀鑒定蘇格蘭威士忌以及其他烈酒摻假的方法，該方法操作簡(jiǎn)單方便。針對(duì)蘇格蘭威士忌摻假的標(biāo)記物進(jìn)行分析有助于檢測(cè) 摻假蘇格蘭威士忌的多種化合物的分析。工業(yè)酒精中的標(biāo)記物的化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú) 一無二，采用 GC/MS 可以很容 易檢測(cè)并準(zhǔn)確定性。Torion 便攜式氣質(zhì)的質(zhì)量數(shù)范圍 （41-500 m/z) 無法用于甲醇檢測(cè)，但甲醇往往與其他 化合物一起用作工業(yè)酒精的標(biāo)記物。故本方法無需檢測(cè)甲醇就可以有效鑒定摻假烈酒。無論在貨物口岸， 流動(dòng)倉(cāng)庫(kù)或銷售點(diǎn)都可以直接現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，避免了這些危險(xiǎn)商品流通至顧客。

       為了將的氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，需要開發(fā)簡(jiǎn)單穩(wěn)定的硬件，易于使用的軟件，還有樣品前處理技術(shù)以及進(jìn)樣技術(shù)。該系統(tǒng)可供無氣質(zhì)聯(lián)用操作經(jīng)驗(yàn)的非專業(yè)人員使用。PerkinElmer Torion T-9 是一款一體化的， 堅(jiān)固耐用的便攜式氣質(zhì)聯(lián)用儀。采用鋰電池供電，內(nèi)置氣瓶供氣及軟件操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，使得該系統(tǒng)可由非化學(xué)專業(yè)背景的人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)操作。T-9 氣質(zhì)聯(lián)用儀與采樣方法相結(jié)合，使現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)游刃有余，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以清晰易懂的表格呈現(xiàn)于觸屏上。本文中主要介紹了快速鑒定蘇格蘭威士忌及其他烈酒中工業(yè)酒精的整體解決方案。在本方法中，在工業(yè)酒精樣品中添加濃度范圍為 1-5% 的微量化合物，并對(duì)其進(jìn)行定性定量分析。在工業(yè)酒精中的化學(xué)標(biāo)記物具有唯yi的化學(xué)結(jié)構(gòu)，易于氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定，并獲得定性結(jié)果。在氣質(zhì)聯(lián)用儀系統(tǒng)中，前端的氣相色譜部分主要起到色譜分離作用，確保烈酒中的芳香 族化合物不會(huì)干擾檢測(cè)，避免標(biāo)記化合物被掩蓋，或?qū)е洛e(cuò)誤鑒定的結(jié)果。偽造者企圖去除這些標(biāo)記化合物， 使其濃度變低，從而避免被檢測(cè)到。氣質(zhì)聯(lián)用儀具有很高的靈敏度，能夠檢測(cè)到極低濃度的標(biāo)記物。

方法建立 

       實(shí)驗(yàn)方法選擇通用的氣質(zhì)實(shí)驗(yàn)條件，方法參數(shù)見表 1。 在乙醇水溶液（V/V,40/60）中添加標(biāo)記物，添加濃度范 圍為 ppm 至百分比級(jí)別。移取 1ml 上述樣品至 10ml 頂空瓶中，采用特氟龍涂層的隔墊密封，隨后樣品中的揮 發(fā)性化合物在氣液兩相中進(jìn)行分配達(dá)到平衡狀態(tài)，平衡時(shí)間為 10 分鐘。為了獲得Z佳的頂空采樣時(shí)間，在 0.5- 5min 范圍內(nèi)進(jìn)行優(yōu)化選擇。采用不同濃度的樣品和采樣 時(shí)間優(yōu)化整個(gè)實(shí)驗(yàn)方法。Custodion? SPME 采樣針針頭用于頂空瓶中采樣。SPME 萃取纖維頭長(zhǎng) 1 厘米，并涂有吸附劑。本實(shí)驗(yàn)采用的萃取纖維涂層選擇通用型寬沸 點(diǎn)的聚二甲基硅氧烷 PDMS 和二乙烯基苯 DVB 材料。將 SPME 萃取纖維頭暴露在樣品的頂空相中，揮發(fā)性化合物被富集在萃取纖維上，供便攜式氣質(zhì)檢測(cè)。

Table 1. Method Parameters.

       采用標(biāo)準(zhǔn)品建立工業(yè)酒精中標(biāo)記物的參比質(zhì)譜庫(kù)。該類 目標(biāo)化合物庫(kù)包含化合物的保留時(shí)間和質(zhì)譜圖。這兩個(gè)參數(shù)可用于化合物正交定性分析，同時(shí)采用兩個(gè)識(shí)別點(diǎn) 可保證化合物定性的準(zhǔn)確性。表 2 為德國(guó)、美國(guó)及歐洲的工業(yè)酒精中常見標(biāo)記化合物的譜庫(kù)信息列表

Table 2. Target List

       本方法在蘇格蘭威士忌中添加了歐洲和德國(guó)的工業(yè)酒精進(jìn)行試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，均檢出工業(yè)酒精標(biāo)記物。

Figure 1.Chromatogram and mass spectrum, with identification of  marker components in a Euro spike of a blended ScotchWhisky

       GC/MS 實(shí)驗(yàn)結(jié)果通常以化合物列表顯示，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員往往懂得如何解析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中，非專業(yè)人員未必了解甲基異丙基酮的檢出，即含有工業(yè)酒精。 T-9 便攜式氣質(zhì)軟件具有有害化合物標(biāo)記功能。利用危害程度分級(jí)來警示操作者，一個(gè)或多個(gè)的工業(yè)酒精標(biāo)記物被檢出。圖 2 為便攜式氣質(zhì)上液晶屏上的警告窗口。（樣品中有一個(gè)或多個(gè)化合物在目標(biāo)物庫(kù)中被檢出）

Figure 2. An example of an ‘Alert’ when a target compound in denatured alcohol is detected.

方法驗(yàn)證 

       以蘇格蘭威士忌為樣品進(jìn)行測(cè)試，確定Z低檢出限和動(dòng) 態(tài)范圍。在威士忌中添加工業(yè)酒精（產(chǎn)地：美國(guó)）（濃 度為0.1% -10%。工業(yè)酒精的化學(xué)品安全說明書（MSDS） 中標(biāo)明了甲基異丁基酮（MIBK）的含量為 1-4%。當(dāng)工 業(yè)酒精添加量為 0.1%-10% 時(shí)， MIBK 的濃度約為 10- 4000ppm。當(dāng)工業(yè)酒精添加量為 0.25% 時(shí)，MIBK 的濃度范圍為 25ppm-100ppm。

Table 3.The spirit drinks employed in this study

       在方法驗(yàn)證過程中，建立了簡(jiǎn)單的樣品前處理方法?，F(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的原則是采樣過程簡(jiǎn)單，又節(jié)約成本。Z初的實(shí)驗(yàn)方法采用 10mL 頂空瓶，用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)比較麻煩，且實(shí)驗(yàn)成本高。聚丙烯的自動(dòng)采樣管（15mL）, 通常用于實(shí)驗(yàn)室，具有成本低，采樣簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，非常適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。該采樣管具有刻度線，便于直接倒入，即可準(zhǔn)確量取烈酒體積。本實(shí)驗(yàn)中使用采樣管采樣，避免了移取過程，并用封口鉗密封，且節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。 

       樣品制備步驟：添加 2 毫升的待測(cè)白酒至樣品管中，并擰緊管帽。靜置 5 分鐘后，打開旋蓋，并插入固相微萃取進(jìn)樣針，用針基座緊緊頂住樣品管口。將固相萃取纖維頭伸出在頂空相中保持 30 秒。樣品被吸附在固相微萃取纖維上，并在氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)樣分析。

Figure 3. Sampling with theCUSTODION.The SPME fibre is  housed in a durable syringe that is operated like a ball point pen.

       本文測(cè)試了 15 個(gè)烈酒樣品，對(duì)其進(jìn)行采樣和檢測(cè)，均未檢出。然后 15 種列酒樣品中添加工業(yè)酒精的濃度為 0.25%，檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。在烈酒中添加工業(yè)酒精濃度為 10%， 工業(yè)酒精標(biāo)記物 MIBK 被檢測(cè)出來。在方法 開發(fā)的Z后一步是進(jìn)一步簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)報(bào)告，只有目標(biāo)庫(kù)中含有化合物在報(bào)告中列出。

總結(jié) 

       采用便攜式氣質(zhì)快速鑒定檢測(cè)烈酒中是否添加了工業(yè)酒 精用于提高酒精度。檢測(cè)底限的工業(yè)酒精添加濃度為 0.25%。雖然采取一些處理可以去除部分工業(yè)酒精標(biāo)識(shí)物，但依然能被便攜式氣質(zhì)檢出來。故實(shí)際樣品的檢測(cè) 要比預(yù)期還更具挑戰(zhàn)性：如使用 的工業(yè)酒精冒充烈酒。每個(gè)樣品分析時(shí)間大約 10 分鐘。數(shù)據(jù)分析軟件以 通俗易懂的報(bào)告模板呈現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)操作人員來說很清晰簡(jiǎn)明。

Figure 4. Chromatogram from single malt Scotchwhiskey showing  detection and identification of methyl isobutyl ketone (MIBK) co-eluting with a flavor/aroma compound.

感謝 

       Z初的方法開發(fā)由愛丁堡的蘇格蘭威士忌研究所 (SWRI) 發(fā)起。感謝 SWRI 的 Peter Cockburn 和安德魯 ? 霍布森博士為方法開發(fā)做出了貢獻(xiàn)。

      蘇格蘭威士忌研究所是蘇格蘭威士忌行業(yè)的研究機(jī)構(gòu)， 其使命是確?？沙掷m(xù)發(fā)展和保護(hù)蘇格蘭威士忌作為一個(gè)優(yōu)質(zhì)性產(chǎn)品。酒類檢測(cè)的方法開發(fā)作為歐盟放心食品項(xiàng)目的一部分。歐盟第七框架研究計(jì)劃提供了項(xiàng)目基金，并在歐盟第 613688 號(hào)協(xié)議下進(jìn)行研究，技術(shù)開發(fā)和成果演示。 

       檢測(cè)方法開發(fā)與基礎(chǔ)科學(xué)研究一樣有益于烈酒工業(yè)發(fā)展， 蘇格蘭威士忌研究所代表蘇格蘭威士忌協(xié)會(huì)從事蘇格蘭威士忌的真?zhèn)畏治?，他們的分析?bào)告用于支持對(duì)造假者的起訴。每年承擔(dān)來自世界各地的大約 150 種可疑威士忌樣品分析。

作者 :

Peter Cockburn

The Scotch Whisky Research Institute

PerkinElmer, Inc.

Waltham, MA

　　翡翠珠寶的成分復(fù)雜，且同時(shí)存在多種微量元素，如何快速準(zhǔn)確分析翡翠中的元素成分，并確定其中某些關(guān)鍵元素的含量，以此來判斷翡翠是否真假、是否經(jīng)過處理等。

　　X射線熒光光譜儀具有高準(zhǔn)確度、高穩(wěn)定性和高檢測(cè)速度等優(yōu)點(diǎn)，不破壞翡翠樣品進(jìn)行非接觸式檢測(cè)。X射線熒光光譜儀對(duì)翡翠進(jìn)行鑒定的過程如下：

　　準(zhǔn)備翡翠樣品，X射線熒光光譜儀會(huì)向翡翠樣品發(fā)出一束X射線，當(dāng)這些X射線進(jìn)入翡翠晶體中與翡翠元素相互作用時(shí)，會(huì)導(dǎo)致翡翠中元素發(fā)射出熒光X射線。儀器通過測(cè)量這些熒光X射線的強(qiáng)度和能量來確定翡翠中各元素的含量。

　　分析員將儀器測(cè)量到的熒光X射線數(shù)據(jù)與已知的元素光譜庫(kù)比對(duì)，通過比對(duì)來確定樣品中的元素成分。通過分析元素成分，判斷翡翠是否真假，是否經(jīng)過處理等。

　　需要注意的是，熒光光譜儀并不能判斷翡翠的顏色和紋理，只能用于分析其元素成分。

　　奧林巴斯手持光譜儀適用于金屬、合金、塑料以及藥品等多個(gè)行業(yè)的應(yīng)用。

　　X射線熒光光譜儀作為翡翠鑒定技術(shù)之一，具備以下優(yōu)勢(shì)：

　　1.準(zhǔn)確性高：X射線熒光光譜儀可以分析翡翠的元素成分，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

　　2.非侵入性：該技術(shù)不需要對(duì)翡翠進(jìn)行物理或化學(xué)處理，可以保護(hù)寶石完整性和價(jià)值。

　　3.快速性：只需在幾秒鐘內(nèi)對(duì)翡翠進(jìn)行掃描分析，可以節(jié)省時(shí)間。

　　贏洲科技作為奧林巴斯一級(jí)品牌代理商，擁有完整的售前售后服務(wù)體系，如有儀器購(gòu)買或維修需求，可聯(lián)系贏洲科技為您提供原裝零部件替換、維修。