有用戶講高通量組織研磨儀設(shè)備實(shí)驗(yàn)室用的少，其實(shí)主要是你沒有看到，你往農(nóng)業(yè)領(lǐng)域去看看，對(duì)種子等樣品的研磨基本都是應(yīng)用的高通量多樣品組織研磨儀，說起這組織研磨儀，那就不得不提提他應(yīng)用的特點(diǎn)有哪些了，真的是讓人超助力！

　　高通量組織研磨儀采用上下垂直高速振蕩模式，可快速促進(jìn)細(xì)胞快速破碎、細(xì)胞裂解、組織均勻，使樣品研磨更加均勻；對(duì)樣品研磨的重復(fù)性更好，樣品間無交叉污染，節(jié)省時(shí)間和人工成本，是一種高通量、高效率、高效率的樣品預(yù)處理技術(shù)。其還具有冷凍組件，可滿足用戶研磨和保存溫度敏感樣品的需求。

　　高通量組織研磨儀儀應(yīng)用性能：

　　1、超高通量組織研磨儀一次可處理多個(gè)樣品

　　2、超高效率處理，利用垂直振蕩研磨技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)完成困難樣品研磨、均質(zhì)

　　3、高均一性，批量處理樣品，程序化處理機(jī)制，均一性、重復(fù)性更好

　　4、更人性化，可調(diào)角度彩色觸摸顯示屏，可編輯、調(diào)用、存儲(chǔ)500種方法

　　5、適用性廣，程序可調(diào)，更多研磨瓶、研磨介質(zhì)可供選擇，完美契合不同樣品研磨、混勻需求

　　6、安全可靠，雙重門鎖，研磨過程更安全；設(shè)置保密程序，限制查看特定方法

　　7、適用于對(duì)多種樣品的干磨、濕磨、冷凍研磨

　　8、分隔設(shè)計(jì)，使用封閉式的專用研磨罐或一次性的離心管，避免樣品交叉污染。

　　高通量組織研磨儀那獨(dú)特的水平?jīng)_擊研磨原理可使其樣品的研磨效果更好；如果采用冷凍操作，樣品研磨和核酸提取都沒有問題；該高通量組織研磨儀的研磨范圍廣，使用封閉樣品管不產(chǎn)生交叉污染，更安全，其樣品的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率更高。另外，該高通量組織研磨儀不只只是應(yīng)用在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，在生物醫(yī)藥、地質(zhì)、法醫(yī)、食品、冶金、化工、環(huán)境、質(zhì)檢、高校等各行各業(yè)均有應(yīng)用，對(duì)生物樣品的研磨，那也是可圈可點(diǎn)的。

　　由于傳統(tǒng)研磨方法應(yīng)用缺點(diǎn)的顯現(xiàn)，更突出了高通量組織研磨儀應(yīng)用的重要性，對(duì)樣品的研磨粉碎大大提高了對(duì)其的研磨效率和質(zhì)量。由于研磨設(shè)備的外形小巧、運(yùn)行噪音小、研磨速度快、樣品研磨充分等特點(diǎn)的展現(xiàn)，使其成為了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的新型多功能樣品制備儀器。

　　高通量組織研磨儀利用磨球在高速運(yùn)轉(zhuǎn)下慣性力的影響下，會(huì)對(duì)物料產(chǎn)生強(qiáng)大的沖擊和高頻摩擦，快速完成對(duì)物料的細(xì)磨、混合分散。該研磨設(shè)備可為各種樣品實(shí)驗(yàn)提供前處理操作，更有助于樣品性質(zhì)的進(jìn)一步分析，獲得實(shí)準(zhǔn)確的驗(yàn)結(jié)果。
　　
　　組織研磨儀對(duì)生物樣品的組織研磨操作：
　　
　　1、把準(zhǔn)備好待研磨的樣品放到離心管內(nèi)，加入磨珠，但不能注滿，使其試樣和磨球占有磨罐體積的1/3，其余空間用于更好的對(duì)樣品研磨。
　　
　　2、待磨罐放在研磨機(jī)器內(nèi)后，將其固定，蓋上鎖蓋。
　　
　　3、可在數(shù)顯控制顯示器上對(duì)其樣品的研磨參數(shù)進(jìn)行設(shè)定，開啟儀器的研磨，待研磨程序結(jié)束后，即可取出研磨后的樣品。
　　
　　4、待應(yīng)用設(shè)備研磨完試樣后，需對(duì)其進(jìn)行維護(hù)清洗，進(jìn)行歸位放置，避免殘留的研磨液損傷儀器。
　　
　　另外在使用研磨設(shè)備前，需將儀器放置在干燥通風(fēng)的環(huán)境中，插入電源，觀察設(shè)備的控制顯示燈是否顯示正常，接通儀表，檢查控制按鈕能否正常使用，儀器在空載時(shí)是否有異常噪音出現(xiàn)。還需根據(jù)振動(dòng)情況，檢查儀器的各個(gè)部件是否緊固，判斷彈簧是否正常；還要看其零件是否有損壞，主要看其零件的損壞部位和磨損部位。與此同時(shí)，還要檢查儀器機(jī)殼各部位的螺栓是否緊固，電機(jī)電源線是否有泄漏現(xiàn)象等。在檢驗(yàn)設(shè)備，確認(rèn)沒有異常后，可開機(jī)進(jìn)行樣品的研磨處理。
　　
　　研磨儀對(duì)樣品的研磨不但比傳統(tǒng)研磨更省時(shí)省力，且無樣品間的交叉污染，而這也是傳統(tǒng)研磨所存在的弊端；而對(duì)樣品的高通量組織研磨更是易于樣品的粉碎，加速了試樣研磨的進(jìn)程，避免了更多樣品研磨過程中的意外狀況的發(fā)生。

有用戶講高通量研磨設(shè)備實(shí)驗(yàn)室用的少，其實(shí)主要是你沒有看到，你往農(nóng)業(yè)領(lǐng)域去看看，對(duì)種子等樣品的研磨基本都是應(yīng)用的高通量組織研磨儀，說起這研磨設(shè)備，那就不得不提提他應(yīng)用的特點(diǎn)有哪些了，真的是讓人超助力！

高通量組織研磨儀采用上下垂直高速振蕩模式，可快速促進(jìn)細(xì)胞快速破碎、細(xì)胞裂解、組織均勻，使樣品研磨更加均勻；對(duì)樣品研磨的重復(fù)性更好，樣品間無交叉污染，節(jié)省時(shí)間和人工成本，是一種高通量、高效率、高效率的樣品預(yù)處理技術(shù)。其還具有冷凍組件，可滿足用戶研磨和保存溫度敏感樣品的需求。

高通量研磨儀那獨(dú)特的水平?jīng)_擊研磨原理可使其樣品的研磨效果更好；如果采用冷凍操作，樣品研磨和核酸提取都沒有問題；該研磨設(shè)備的研磨范圍廣，使用封閉樣品管不產(chǎn)生交叉污染，更安全，其樣品的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率更高。

高通量研磨儀應(yīng)用性能：

1、超高通量研磨一次可處理多個(gè)樣品

2、超高效率處理，利用垂直振蕩研磨技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)完成困難樣品研磨、均質(zhì)

3、高均一性，批量處理樣品，程序化處理機(jī)制，均一性、重復(fù)性更好

4、更人性化，可調(diào)角度彩色觸摸顯示屏，可編輯、調(diào)用、存儲(chǔ)500種方法

5、適用性廣，程序可調(diào)，更多研磨瓶、研磨介質(zhì)可供選擇，完美契合不同樣品研磨、混勻需求

6、安全可靠，雙重門鎖，研磨過程更安全；設(shè)置保密程序，限制查看特定方法

7、適用于對(duì)多種樣品的干磨、濕磨、冷凍研磨

8、分隔設(shè)計(jì)，使用封閉式的專用研磨罐或一次性的離心管，避免樣品交叉污染。

另外，該研磨設(shè)備不只只是應(yīng)用在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，在生物醫(yī)藥、地質(zhì)、法醫(yī)、食品、冶金、化工、環(huán)境、質(zhì)檢、高校等各行各業(yè)均有應(yīng)用，對(duì)生物樣品的研磨，那也是可圈可點(diǎn)的。

　　很多情況下對(duì)生物樣品的研磨前處理都會(huì)選擇液氮冷凍研磨，只因液氮的冷凍低溫研磨不易損壞或降解生物樣品，同時(shí)還可增加樣品組織的硬度和脆性，能夠達(dá)到良好的破碎效果。

　　液氮冷凍研磨儀對(duì)生物樣品前處理的超低溫研磨是可有效抑制樣品核酸降解、活性喪失、減少樣品揮發(fā)、保留樣品含量。把生物樣品和磨珠同時(shí)放置在離心管中，使其在設(shè)備的高頻振蕩作用下，磨珠在離心管內(nèi)的高速碰撞和摩擦，可快速實(shí)現(xiàn)生物樣品的粉碎。

　　藥物活性成分的異構(gòu)體間往往會(huì)存在著很大的差異化，而這也是生物樣品實(shí)驗(yàn)前處理要面臨的主要問題，但在應(yīng)用液氮的低溫研磨后，這些問題居然都被輕易解決，且可有效避免分子因壓力和熱量而造成的降解。

　　液氮研磨儀具有通用性廣、效率高、靈活性強(qiáng)的性能特點(diǎn)，有效避免了傳統(tǒng)研磨帶來的一系列實(shí)驗(yàn)缺點(diǎn)，可能高效、快速、穩(wěn)定地裂解和純化各類生物樣品的核酸和蛋白質(zhì)。被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)所，特別是對(duì)試樣的RNA/DNA的分離。且液氮的低溫冷凍不會(huì)失去細(xì)胞的活性，對(duì)于試樣來說，它是一款有益的樣品前處理實(shí)驗(yàn)設(shè)備；對(duì)于那些難處理樣品使的粉碎，它更是能夠輕易解決，液氮的超低溫可使其冷凍到樣品的脆點(diǎn)，給樣品的實(shí)驗(yàn)前處理分析工作帶來了極大的便利。

　　綜上便是對(duì)液氮冷凍研磨設(shè)備對(duì)生物樣品的助力研磨的性能特點(diǎn)展現(xiàn)，同時(shí)也是很多實(shí)驗(yàn)用戶選擇冷凍液氮研磨設(shè)備的關(guān)鍵所在。

鎖相放大器用于生物樣品雙通道和多儀器模式SRS顯微技術(shù)的研究

一．簡(jiǎn)介 

拉曼散射光譜為生物分子的特異性檢測(cè)和分析提供了化學(xué)鍵的固有振動(dòng)指紋。那么什么是受激拉曼散射顯微鏡？受激拉曼散射(SRS)顯微技術(shù)是一種相對(duì)較新的顯微技術(shù)，是一種相干拉曼散射過程，允許使用光譜和空間信息進(jìn)行化學(xué)成像[18]，由于相干受激發(fā)射過程[1]能產(chǎn)生約103-105倍的增強(qiáng)拉曼信號(hào)，可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)視頻速率(約25幀/s)[2]的高速成像。SRS顯微鏡繼承了自發(fā)拉曼光譜的優(yōu)點(diǎn), 是一種能夠快速開發(fā)、label-free的成像技術(shù)，同時(shí)具有高靈敏度和化學(xué)特異性[3-6], 在許多生物醫(yī)學(xué)研究的分支顯示出應(yīng)用潛力,包括細(xì)胞生物學(xué)、脂質(zhì)代謝、微生物學(xué)、腫瘤檢測(cè)、蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊和制藥[7-11]。特別的是，SRS在對(duì)新鮮手術(shù)組織和術(shù)中診斷的快速組織病理學(xué)方面表現(xiàn)出色，與傳統(tǒng)的H&E染色幾乎完全一致[12,13]。此外，SRS能夠根據(jù)每個(gè)物種的光譜信息，對(duì)多種組分的混合物進(jìn)行定量化學(xué)分析[6,7,14]。

盡管在之前的研究[17]中已經(jīng)研究了痛風(fēng)中MSU的自發(fā)拉曼光譜，但微弱的信號(hào)強(qiáng)度阻礙了其用于快速組織學(xué)的應(yīng)用。因此，復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院華英匯教授 和復(fù)旦大學(xué)物理學(xué)系季敏標(biāo)教授團(tuán)隊(duì)將受激拉曼散射顯微技術(shù)用于人體痛風(fēng)組織病理成像[15]。研究人員應(yīng)用SRS和二次諧波（SHG）顯微鏡同時(shí)表征了晶型和非晶型MSU。在普通光鏡下，MSU晶體呈典型的針狀。這些晶體在拉曼峰630 cm-1的SRS上很容易成像，當(dāng)SRS頻率稍微偏離振動(dòng)共振時(shí)，表現(xiàn)出了高化學(xué)特異性的非共振行為，SRS信號(hào)消失。已知SHG對(duì)非中心對(duì)稱結(jié)構(gòu)敏感，包括MSU晶體和[17]組織中的膠原纖維。然而，由于拉曼極化率張量和二階光學(xué)磁化率對(duì)晶體對(duì)稱性[16]的依賴，研究者們發(fā)現(xiàn)線偏振光光束在晶體取向上傾向于產(chǎn)生SRS和SHG的強(qiáng)各向異性信號(hào)。因此，研究者們對(duì)泵浦光束和斯托克斯光束都應(yīng)用了圓偏振，以消除MSU晶體和膠原纖維的定向效應(yīng)。

Moku:Pro 的鎖相放大器 (LIA) 為受激拉曼散射 (SRS) 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中的自外差信號(hào)檢測(cè)提供了一種直觀、精確且穩(wěn)健的解決方案。高質(zhì)量的 LIA 是 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中具有調(diào)制傳輸檢測(cè)方案的關(guān)鍵硬件組件。在此更新的案例研究中，我們提供了有關(guān)雙 LIA 應(yīng)用程序的更多詳細(xì)信息和描述。

由于SRS 是一種相干拉曼散射過程，允許使用光譜和空間信息進(jìn)行化學(xué)成像[18]。它使用兩個(gè)同步脈沖激光器，即泵浦和斯托克斯（圖 1）相干地激發(fā)分子的振動(dòng)。當(dāng)入射到樣品上的兩束激光的頻率差與目標(biāo)分子的振動(dòng)頻率相匹配時(shí)，就會(huì)發(fā)生 SRS 過程。振動(dòng)激發(fā)的結(jié)果是泵浦光束將失去光子，而斯托克斯光束將獲得光子。當(dāng)檢測(cè)到泵浦光束的損失時(shí)，這稱為受激拉曼損失 (SRL) 檢測(cè)。強(qiáng)度損失 ΔI?/I? 通常約為 10 -7 -10 -4，遠(yuǎn)小于典型的激光強(qiáng)度波動(dòng)。為了克服這一挑戰(zhàn)，需要一種高頻調(diào)制和相敏檢測(cè)方案來從嘈雜的背景中提取 SRS 信號(hào)[19]。在 SRL 檢測(cè)方案中，斯托克斯光束以固定頻率調(diào)制，由此產(chǎn)生的調(diào)制傳輸?shù)奖闷止馐?LIA 檢測(cè)。

圖 1：受激拉曼損耗檢測(cè)方案。檢測(cè)到由于 SRS 引起的 Stokes 到泵浦光束的調(diào)幅傳輸。演示的泵浦光束具有 80 MHz 的重復(fù)率，Stokes 光束具有相同的 80 MHz 重復(fù)率，但也以 20 MHz 進(jìn)行調(diào)制。Δpump 是 LIA 在此檢測(cè)方案中提取的內(nèi)容

二．實(shí)驗(yàn)裝置

使用的激光系統(tǒng)能夠輸出兩個(gè) 80 MHz 的激光脈沖序列：斯托克斯光束在 1030 nm，泵浦光束在 790 nm。激光輸出也用于同步調(diào)制：80 MHz 參考被發(fā)送到分頻器以生成 20 MHz TTL 輸出。這些 20 MHz 輸出被使用兩次：一次作為電光調(diào)制器調(diào)制斯托克斯光束的驅(qū)動(dòng)頻率，另一次作為外部鎖相環(huán)的 LIA 輸入通道 2（B 中）的參考。泵浦光束由硅光電二極管檢測(cè)，然后被發(fā)送到 LIA 的輸入通道 1（In A）。來自輸出通道 1（Out A）的信號(hào)被發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡以進(jìn)行圖像采集。來自輸出通道 2 (Out B) 的信號(hào)被最小化（通過調(diào)整相移）。

2.1 單通道鎖相放大器配置

圖 2：典型的鎖定放大器配置設(shè)置

圖 2 演示了用于 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)的 LIA 的初始設(shè)置。在初始設(shè)置時(shí)，必須重新獲取鎖相環(huán)。輸入均配置為 AC：50 歐姆。通過調(diào)整相位度數(shù)優(yōu)化相移 (Df)，直到 Out A zui大化（正值）并且 Out B zui小化（接近零）。探針A顯示對(duì)應(yīng)于 DMSO zui高信號(hào)峰 (2913 cm-1 ) 的 SRS 信號(hào)，并zui大化輸出 A 的 103.3 mV。探針B表示正交輸出，最小化為零。一旦 LIA 針對(duì)校準(zhǔn)溶劑進(jìn)行了優(yōu)化，樣品就可以進(jìn)行成像了。

圖 3：2930 cm -1拉曼躍遷處的 SRS HeLa 細(xì)胞圖像

圖 3 是使用 Moku:Pro 鎖相放大器拍攝的 HeLa 細(xì)胞圖像。顯示的圖像是從 SRS 圖像生成的，拉曼位移為 2930cm-1，對(duì)應(yīng)于蛋白質(zhì)峰。低通濾波器設(shè)置為 40 kHz，對(duì)應(yīng)于 約4μs 的時(shí)間常數(shù)?？梢愿鶕?jù)SRS信號(hào)大小增加或減少增益。

2.2 雙通道成像

Moku:Pro 的 LIA 也適用于實(shí)時(shí)雙色 SRS 成像。這是通過在 SRS 成像中應(yīng)用正交調(diào)制并檢測(cè)LIA的X和Y輸出來執(zhí)行的。在這種情況下，斯托克斯調(diào)制有兩個(gè)部分：一個(gè) 20 MHz 脈沖序列生成SRS信號(hào)，另一個(gè) 20 MHz 脈沖序列具有90°相移，生成另一個(gè)針對(duì)不同拉曼波段的SRS信號(hào)[3]。由于90°相移，兩個(gè)通道（Out A和Out B）彼此正交，可以同時(shí)獲取兩個(gè)SRS圖像而不會(huì)受到干擾。

 4：使用正交調(diào)制和輸出在兩個(gè)不同的拉曼躍遷下同時(shí)獲得鼠腦樣本的雙通道 SRS 圖像

圖 4 是利用雙通道X&Y輸出同時(shí)在2930 cm -1和 2850 cm -1處生成兩個(gè) SRS 圖像的代表性圖像。

2.3 多儀器模式應(yīng)用

 在大多數(shù) SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)中，由于激光器總帶寬的限制，光譜范圍被限制在大約 300 cm -1左右。繞過這一技術(shù)障礙的一種方法是使用可調(diào)諧激光器掃描波長(zhǎng)。然而，波長(zhǎng)調(diào)諧速度很慢，而且對(duì)于時(shí)間敏感的實(shí)驗(yàn)（如活細(xì)胞成像）來說往往不夠。應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)的另一種解決方案是引入第三束激光束來掃描不同的拉曼過渡區(qū)域。這種能力對(duì)于兩個(gè)光譜區(qū)域的同時(shí)成像特別有吸引力：一個(gè)在指紋區(qū)域（例如 約1600 cm-1用于酰胺振動(dòng)）和一個(gè)在CH區(qū)域（例如 約2900 cm -1蛋白質(zhì)）。在 SRL 成像方法中，實(shí)驗(yàn)裝置由一個(gè)斯托克斯光束和兩個(gè)不同波長(zhǎng)的泵浦光束組成。此設(shè)置的常用檢測(cè)方法需要單獨(dú)的檢測(cè)器和單獨(dú)的 LIA。然而，Moku:Pro 的多儀器模式允許部署多個(gè)LIA，因此可以在不需要任何額外硬件妥協(xié)的情況下實(shí)施第二個(gè)LIA。

圖 5：Moku:Pro 多儀器鎖相放大器配置

圖 5 演示了LIA 的多儀器模式設(shè)置，用于同步 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)。對(duì)于Slot 1，In 1是di一個(gè)光電二極管的檢測(cè)信號(hào)，In 2是參考信號(hào)，Out 1是發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡的信號(hào)，Out 3被丟棄。對(duì)于 Slot 2，In 3 是第二個(gè)光電二極管的檢測(cè)信號(hào)，In 2 再次作為參考，Out 2 是發(fā)送到數(shù)據(jù)采集卡的信號(hào)，Out 4 被丟棄。此配置僅使用 4 個(gè) Moku 插槽中的 2 個(gè)。插槽 3 和 4 未分配，因此可用于進(jìn)一步的 LIA 或任何其他 Moku 儀器。輸入全部配置為 AC：50 歐姆。每個(gè) LIA 插槽（1 和 2）都遵循與單通道 LIA 配置相同的設(shè)置。

在三個(gè)激光器的情況下，Moku:Pro 的多儀器模式可以配置兩個(gè)鎖定放大器，將系統(tǒng)簡(jiǎn)化為一個(gè)設(shè)備，而不會(huì)有任何妥協(xié)。這使得研究人員可以同時(shí)拍攝兩張波數(shù)差較大的 SRS 圖像，利用一個(gè) Moku:Pro 來處理兩個(gè)光電二極管檢測(cè)器信號(hào)。

圖 6：HeLa 細(xì)胞 SRS 圖像使用多儀器設(shè)置在間隔較遠(yuǎn)的拉曼躍遷處拍攝

圖 6 是利用一個(gè)Moku:Pro處理兩個(gè)光電二極管檢測(cè)器信號(hào)同時(shí)拍攝兩個(gè)大波數(shù)差的 SRS 圖像的代表性圖像。

三．結(jié)論

 Moku:Pro 的 LIA 為大量 SRS 顯微鏡實(shí)驗(yàn)提供了出色的解決方案。在本文檔中，討論了典型的單通道 SRS 成像、雙通道成像和多儀器成像。用戶界面允許對(duì)提取低強(qiáng)度 SRS 信號(hào)進(jìn)行直觀和強(qiáng)大的控制。重要的是 Moku:Pro 的多儀器工具功能允許在多儀器同用的緊湊型系統(tǒng)上進(jìn)行復(fù)雜的成像實(shí)驗(yàn)。

圖 7：Moku:Pro 在多樂器模式下的使用圖像。In 1 和 In 3 分別是插槽 1 和插槽 2 中 LIA 的信號(hào)輸入。2 中是兩個(gè) LIA 插槽的參考。在所示的配置中，Out 1 和 Out 3 是記錄的信號(hào)，Out 2 和 Out 4 是插槽 1 和 2 的轉(zhuǎn)儲(chǔ)信號(hào)

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