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黑膠蟲(chóng)的處理方法

小超201000 2018-11-27 17:28:21 718  瀏覽
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黑膠蟲(chóng)的處理方法
 
2018-11-27 17:28:21 718 0
細(xì)胞被“黑膠蟲(chóng)”污染了,怎么辦?



正在培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)“突然”惡化!

在顯微鏡下觀察,感覺(jué)有黑點(diǎn)狀的不明物體在游動(dòng)!

但沒(méi)看見(jiàn)懸浮物,也沒(méi)感覺(jué)培養(yǎng)基pH變化速度加快。

是不是支原體?--

但支原體怎可能在低倍數(shù)顯微鏡下看得這么清楚?

難道是它???


科研學(xué)術(shù)圈一直流傳著這樣一種生物——它,可以污染細(xì)胞,污染后短期內(nèi)不會(huì)影響貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞貼壁;同時(shí)污染后的培養(yǎng)基也不會(huì)像細(xì)菌、真菌污染之后的培養(yǎng)基迅速變黃渾濁,有菌絲團(tuán)漂浮在上清中。但是,沒(méi)有人能確切地說(shuō)出它到底是原蟲(chóng)還是其他病原微生物,也沒(méi)有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的圖像記錄,不管是相機(jī)實(shí)拍還是掃描電鏡,甚至都沒(méi)人能確定到底是“黑焦蟲(chóng)”還是“黑膠蟲(chóng)”。


1.“黑膠蟲(chóng)”究竟是什么?

有研究人員通過(guò)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的“黑膠蟲(chóng)”為變形桿菌a-2亞群,其存在于胎牛血清中。

但后又有研究表明“黑膠蟲(chóng)”并非生物,而是一種碳酸鈣納米顆粒或硅復(fù)合物,稱其為“硅小體”,來(lái)源于培養(yǎng)基對(duì)玻璃細(xì)胞培養(yǎng)器皿的侵蝕。


在“黑膠蟲(chóng)血清”的說(shuō)法流行后,也有研究者表明自己實(shí)驗(yàn)室相似的情況出現(xiàn)原因是由于細(xì)菌污染,并從被“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中分離到了一株短波單胞菌屬的新菌株[1]。實(shí)際上,并不是所有的細(xì)菌污染馬上就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞立即死亡,也不是所有的污染會(huì)讓培養(yǎng)基變黃且渾濁,相反有時(shí)細(xì)菌污染會(huì)讓培養(yǎng)基變得更紅(細(xì)菌分解蛋白質(zhì)產(chǎn)胺會(huì)導(dǎo)致pH值上升因此變紅)。


很多人猜測(cè),所謂的“黑膠蟲(chóng)”可能只是凋亡小體或細(xì)胞碎片,因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)好的時(shí)候就看不到了,而當(dāng)顆粒物直徑足夠小,在液體中做不規(guī)則的布朗運(yùn)動(dòng)也很正常。盡管到目前,關(guān)于黑膠蟲(chóng)究竟是什么仍無(wú)定論,但我們應(yīng)盡量避免“黑膠蟲(chóng)”污染。


2、如何避免或應(yīng)對(duì)“黑膠蟲(chóng)”污染?

  • 采用原裝進(jìn)口特級(jí)胎牛血清。

  • 出現(xiàn)問(wèn)題的培養(yǎng)體系中的血清,有很多是經(jīng)過(guò)熱滅活處理的,熱滅活操作會(huì)使血清中產(chǎn)生線狀的蛋白質(zhì)聚合體,因其顆粒較小進(jìn)行布朗運(yùn)動(dòng)便被認(rèn)定為是生物,所以在進(jìn)行血清融化的過(guò)程中要進(jìn)行梯度處理,最適合在4℃緩慢融化


3.如果遇到“黑膠蟲(chóng)”污染怎么辦?

  • 換優(yōu)質(zhì)胎牛血清。

  • 停止熱滅活處理血清,目前大部分高品質(zhì)血清都不需要熱滅活操作,甚至通常因?yàn)檩^高溫度處理后,血清質(zhì)量受影響,細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。同時(shí)熱滅活過(guò)的血清,蛋白等沉淀物的形成顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染。所以在不是做免疫學(xué)研究或昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)等特殊場(chǎng)景時(shí),血清盡量不經(jīng)熱滅活。

  • 雖說(shuō)是“黑膠蟲(chóng)”,但是其實(shí)有很大可能性是被其他微生物污染,如果對(duì)細(xì)胞狀態(tài)影響很大,正常情況下應(yīng)該直接丟棄,若細(xì)胞非常珍貴,可以用伯氨奎、磺胺、四環(huán)素、貝尼爾,慶大霉素進(jìn)行洗滌。并盡早更換品質(zhì)好的一次性細(xì)胞培養(yǎng)耗材以及相關(guān)培養(yǎng)試劑。


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顆粒的表面改性處理方法

顆粒的表面改性處理是伴隨現(xiàn)代*復(fù)合材料的興起而發(fā)展起來(lái)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。雖然它的發(fā)展歷史較短,但對(duì)于現(xiàn)代有機(jī)/無(wú)機(jī)復(fù)合材料、無(wú)機(jī)/無(wú)機(jī)復(fù)合材料、涂料或涂層材料、吸附與催化材料、環(huán)境材料以及超細(xì)粉體和納米粉體的制備和應(yīng)用具有重要的意義。顆粒表面的性質(zhì)有時(shí)會(huì)影響到粉碎能否繼續(xù)下去,也會(huì)影響到粉體能否被應(yīng)用等重大問(wèn)題。因此,通過(guò)有目的的控制或改變顆粒表面的性質(zhì),對(duì)顆粒的制備和應(yīng)用具有重要的影響作用。顆粒表面改性處理技術(shù)主要包括:改性處理工藝、設(shè)備、改性劑、顆粒表面功能化處理等。

1.顆粒表面改性處理工藝

顆粒表面改性處理工藝主要包括:液相法處理、干法改性處理、氣相法處理、機(jī)械力化學(xué)處理、高能輻射(包括等離子體、激光、電子束等)處理等。顆粒表面改性處理工藝按改性與顆粒制備二者的先后順序可以分為原位處理和后處理,原位處理是在顆粒粉碎或者顆粒生成的同時(shí),就有目的地控制或改變顆粒表面的性質(zhì)。這對(duì)團(tuán)聚性高的粉體是一種有效的解決方法。

液相法改性處理工藝特點(diǎn)是顆粒分散在液相中并吸附改性劑,顆粒改性效果穩(wěn)定,改性劑在顆粒表面吸附均勻、完全,但是顆粒如果在干態(tài)下應(yīng)用,還需進(jìn)行干燥后處理,改性工藝流程復(fù)雜,成本較高。

干法改性處理工藝特點(diǎn)是顆粒在干態(tài)下進(jìn)行分散,通過(guò)噴灑改性劑或改性劑溶液,在一定溫度下使改性劑吸附在顆粒表面完成顆粒的表面改性處理。改性方法靈活,工藝簡(jiǎn)單,成本低,但在改性過(guò)程中難以對(duì)顆粒做到均一處理。

氣相法改性處理工藝特點(diǎn)是分散在氣相中的改性劑能夠均勻地吸附在顆粒表面,顆粒改性效果穩(wěn)定,與液相處理設(shè)備相比,改性后的粉體無(wú)需進(jìn)行干燥處理。但受到改性過(guò)程中氣固分離技術(shù)的限制,氣相處理設(shè)備很難對(duì)亞微米級(jí)的顆粒進(jìn)行表面改性處理。

機(jī)械力化學(xué)處理工藝特點(diǎn)是在顆粒的粉碎同時(shí)添加改性劑進(jìn)行表面改性處理,在粉體粒度減小的同時(shí)對(duì)顆粒進(jìn)行表面改性處理。由于粉碎過(guò)程中顆粒會(huì)產(chǎn)生大量高活性新生表面,并且粉碎過(guò)程中強(qiáng)烈機(jī)械作用可以對(duì)顆粒表面進(jìn)行激活,有效改善改性劑在顆粒表面的吸附。該工藝可以將顆粒粉碎與表面改性二者有機(jī)的結(jié)合在一起,簡(jiǎn)化顆粒的加工工藝流程,并能夠提高顆粒的粉碎效率及強(qiáng)化顆粒表面改性的效果。但由于改性過(guò)程中顆粒不斷被粉碎,產(chǎn)生新的表面,顆粒表面難以完全吸附改性劑。

高能輻射改性工藝特點(diǎn)是直接通過(guò)高能輻射方式改變顆粒表面的電荷量來(lái)改變顆粒表面的性質(zhì),或者是利用高能輻射強(qiáng)化有機(jī)改性劑在顆粒表面的吸附,更好地對(duì)顆粒表面進(jìn)行改性處理。

2.顆粒表面改性處理設(shè)備

顆粒液相法改性處理設(shè)備包括:可控溫?cái)嚢璺磻?yīng)釜、可控溫?cái)嚢璺磻?yīng)罐、濕法攪拌磨等。干法改性處理設(shè)備包括間歇式的高攪機(jī)和連續(xù)式的SLG型粉體表面改性機(jī)、PSC型粉體表面改性機(jī)等。機(jī)械力化學(xué)處理設(shè)備包括一些具有粉碎效果的設(shè)備,如振動(dòng)磨、球磨機(jī)、氣流粉碎機(jī)、行星磨等具有粉碎效果的設(shè)備。氣相處理設(shè)備包括:流化床、氣流湍流顆粒分散與改性設(shè)備等。高能輻射處理設(shè)備:包括等離子體型、激光束型、電子束型等設(shè)備。

3.顆粒表面改性劑

顆粒表面改性處理主要是依靠改性劑在顆粒表面的吸附來(lái)實(shí)現(xiàn)的,因此,改性劑的性質(zhì)對(duì)改性后顆粒的表面性質(zhì)起著決定性的作用。目前常用的改性劑有偶聯(lián)劑(鈦酸酯偶聯(lián)劑、硅烷偶聯(lián)劑、鋁酸酯偶聯(lián)劑)、表面活性劑、有機(jī)低聚物、有機(jī)硅等,其中偶聯(lián)劑是目前無(wú)機(jī)顆粒*常用的一類改性劑。偶聯(lián)劑與顆粒表面的作用機(jī)理有物理吸附理論、可逆水解平衡理論和化學(xué)鍵合理論等,其與有機(jī)基體的作用機(jī)理有化學(xué)鍵理論、浸潤(rùn)效應(yīng)理論、界面層理論(可變形層理論和約束層理論)等。

4.微/納米顆粒復(fù)合化改性

除了上述通過(guò)改性劑(主要為溶液)對(duì)顆粒表面進(jìn)行改性處理外,這幾年出現(xiàn)了很多復(fù)合功能顆粒材料。將微米/納米顆粒子粒子附著在微米顆粒母粒子表面,以改變母粒子的表面性質(zhì)、表面粗糙度、消除其尖銳的棱角、制備微納米復(fù)合顆粒是目前一種新發(fā)展的顆粒表面改性處理方法。該方法使普通顆粒材料具有新的性能和功能,在滿足需要的同時(shí),降低功能組分的用量,提高經(jīng)濟(jì)效益。實(shí)現(xiàn)微/納米顆粒復(fù)合化改性的方法有物理方法、機(jī)械方法、化學(xué)方法等。

物理方法就是通過(guò)物理沉積的作用在顆粒表面沉積一層納米顆粒膜。如采用磁控濺射鍍膜或真空蒸鍍的方法在微顆粒表面沉積金、銀、銅、鋁、鈷、鎳等金屬顆粒膜。

機(jī)械方法就是在摩擦、研磨、沖擊、振動(dòng)和高速攪拌等機(jī)械力作用下,小顆粒與大顆粒會(huì)發(fā)生固相反應(yīng)或機(jī)械鑲嵌等作用,從而使小顆粒包覆在大顆粒表面。如采用日本奈良機(jī)械制作所開(kāi)發(fā)生產(chǎn)的高速氣流沖擊式粉體表面改性設(shè)備Hybridization,進(jìn)行無(wú)機(jī)顆粒/高聚物、金屬/金屬、無(wú)機(jī)顆粒/金屬等類型的復(fù)合化改性處理,獲得了許多功能性的顆粒材料,是目前能夠進(jìn)行工業(yè)化處理的一種顆粒復(fù)合化改性方法。

化學(xué)方法就是通過(guò)一定的化學(xué)反應(yīng)在顆粒表面沉積一層顆粒膜的方法。如采用化學(xué)鍍的方法在顆粒表面包覆一層金屬鎳、銀、銅等金屬膜,采用沉淀法或溶膠凝膠法在顆粒表面沉積一層金屬氧化物膜,可制備納米硅酸鋁/硅灰石、納米碳酸鈣/硅灰石、納米TiO2/多孔礦物等復(fù)合粉體材料。

5.顆粒表面改性的評(píng)價(jià)

目前顆粒表面改性效果的評(píng)價(jià)方法尚未完善和規(guī)范。表面改性效果的評(píng)價(jià)方法一般可以分為直接評(píng)價(jià)法和間接評(píng)價(jià)法。所謂直接評(píng)價(jià)法就是通過(guò)表面改性前后粉體的表面物理化學(xué)性質(zhì)和體相性質(zhì),如潤(rùn)濕性、吸油值,分散性、黏度、表面結(jié)構(gòu)與成分、粒度大小與分布等與體相相應(yīng)性質(zhì)的變化來(lái)表征和評(píng)價(jià)顆粒表面改性的效果;間接評(píng)價(jià)法就是通過(guò)評(píng)價(jià)表面改性前后粉體在實(shí)際應(yīng)用領(lǐng)域中的應(yīng)用性能來(lái)評(píng)價(jià)粉體表面改性的效果。例如,用于高聚物基復(fù)合材料填料的表面改性效果,可以通過(guò)檢測(cè)填料改性前后填充的高聚物復(fù)合材料的力學(xué)性能來(lái)評(píng)價(jià);用于電纜絕緣填料的煅燒高嶺土改性效果,可用改性前后填充絕緣材料的體積電阻率以及拉伸強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率等性能來(lái)評(píng)價(jià);用于KJ目的的粉體的改性效果,可用其KJ性能檢測(cè)結(jié)果來(lái)評(píng)價(jià);對(duì)于顏料的表面改性可以通過(guò)其遮蓋力、著色率、色差、分散穩(wěn)定性等檢測(cè)結(jié)果來(lái)評(píng)價(jià);對(duì)于催化劑的表面改性可以通過(guò)其催化性能來(lái)評(píng)價(jià)。由于粉體表面改性的目的性和*性很強(qiáng),間接評(píng)價(jià)法非常重要,是評(píng)價(jià)表面改性粉體應(yīng)用價(jià)值的主要依據(jù)。


2021-07-21 15:12:38 834 0

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