《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》適用于食用油、乳粉等食品中脂肪酸的檢測。在開展食品脂肪酸的檢測時(shí)，實(shí)驗(yàn)員經(jīng)常會遇到各種小問題，小編今天整理了一些常見問題進(jìn)行分享學(xué)習(xí)。

\ 脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品如何選擇？/

國標(biāo)《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》按照定量方法分為三個(gè)方法，分別是內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法和歸一化法。內(nèi)標(biāo)法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)，十一碳酸甘油三酯作為定量內(nèi)標(biāo)；外標(biāo)法需要使用相應(yīng)的脂肪酸甘油三酯作為定量外標(biāo)；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標(biāo)作為定性外標(biāo)。

\ 37種脂肪酸甲酯混標(biāo)如何使用，

內(nèi)標(biāo)法如何配置標(biāo)準(zhǔn)曲線？/

上圖為國標(biāo)GB 5009.168-2016 標(biāo)準(zhǔn)截圖，可以看出，內(nèi)標(biāo)法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內(nèi)標(biāo)溶液；而混合脂肪酸甲酯標(biāo)液不需要配置標(biāo)準(zhǔn)曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應(yīng)因子的計(jì)算。

如果選購安譜實(shí)驗(yàn)的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)液（CDAA-252795-MIX-1ml，不同濃度于異辛烷，總計(jì)10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標(biāo)液稀釋至5mL或10mL，得到總計(jì)2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

內(nèi)標(biāo)法的計(jì)算公式見上圖，可以看出，脂肪酸甲酯混標(biāo)的作用主要是用來計(jì)算脂肪酸甲酯相對十一碳酸甲酯的響應(yīng)因子，因此進(jìn)樣單點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計(jì)算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內(nèi)標(biāo)的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應(yīng)因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉(zhuǎn)換系數(shù)得到。

\ 使用CD-2560進(jìn)樣37種脂肪酸甲酯為什么只出了36個(gè)峰？/

不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導(dǎo)致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過調(diào)整流速等參數(shù)優(yōu)化色譜條件，以達(dá)到最 優(yōu)分離度。

建議先在 0.8mL/min 的流速條件下查看目標(biāo)峰的分離情況，根據(jù)出峰情況，如果是 31 號和 32 號峰分離變差就增加流速，如果是 24 號峰、30 號峰和 35號峰分離變差就減小流速，通過流速的微調(diào)以找到最 優(yōu)的分離條件。具體調(diào)整方法可查看安譜實(shí)驗(yàn)相關(guān)的單頁“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。

\ 外標(biāo)法檢測有哪些需要注意？/

如標(biāo)準(zhǔn)截圖所示，外標(biāo)法使用脂肪酸甘油三酯作為標(biāo)準(zhǔn)品，但需要將脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過酯交換轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅峒柞ド蠙C(jī)檢測，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機(jī)檢測，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標(biāo)進(jìn)行定量計(jì)算。

上圖為外標(biāo)法計(jì)算公式，可以看出，外標(biāo)法是直接計(jì)算樣品中脂肪酸的含量，不需要計(jì)算脂肪酸甲酯的含量。通過脂肪酸甘油三酯的單點(diǎn)外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算結(jié)果主要與脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的系數(shù)有關(guān)。脂肪酸甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的選擇可根據(jù)實(shí)際樣品中脂肪酸的含量進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，使其盡量接近樣品中含量。

《GB 5009.257-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中反式脂肪酸的測定》適用于動植物油脂、氫化植物油、精煉植物油脂及煎炸油和含動植物油脂、氫化植物油、精煉 植物油脂及煎炸油食品中反式脂肪酸的測定。

在開展食品反式脂肪酸的檢測時(shí)，實(shí)驗(yàn)員經(jīng)常會遇到各種小問題，小編今天整理了一些常見問題進(jìn)行分享學(xué)習(xí)。

01

要檢測哪些反式脂肪酸，標(biāo)準(zhǔn)品怎么選擇？

標(biāo)準(zhǔn)要求檢測食品中C16:1t~C22:1t等16種反式脂肪酸。具體目標(biāo)物信息可參見標(biāo)準(zhǔn)附錄A中的“表A.1 脂肪酸甲酯化學(xué)信息表”，詳見下圖。

針對標(biāo)準(zhǔn)要求的反式脂肪酸，安譜實(shí)驗(yàn)推薦的標(biāo)準(zhǔn)品選擇方案見下表，分別是6種反式單不飽和脂肪酸甲酯、4種十八碳二烯酸甲酯、8種十八碳三烯酸甲酯。

02

反式脂肪酸標(biāo)品的使用有些什么注意點(diǎn)？

上述推薦的3種反式脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均為同分異構(gòu)體混合物形式，均無準(zhǔn)確濃度，這是反式脂肪酸的性質(zhì)及其生產(chǎn)工藝導(dǎo)致，但這并不影響結(jié)果的計(jì)算，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)中反式脂肪酸的定量方法是面積歸一化法，并不需要確定某一個(gè)反式脂肪酸的準(zhǔn)確濃度，此標(biāo)準(zhǔn)品更重要的作用是目標(biāo)物的定性。

4種十八碳二烯酸甲酯混標(biāo)和8種十八碳三烯酸甲酯混標(biāo)中的目標(biāo)物信息見下表，可以看出2個(gè)混標(biāo)中分別含有順-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亞油酸甲酯）和順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亞麻酸甲酯）這兩種順式脂肪酸甲酯。因此推薦的3種混標(biāo)產(chǎn)品中總共含有18個(gè)目標(biāo)物。

03

檢測食品中反式脂肪酸

還需要檢測其他常見脂肪酸嗎？

檢測食品中的反式脂肪酸需要同時(shí)檢測其他順式脂肪酸，上圖為國標(biāo)中反式脂肪酸的計(jì)算公式，反式脂肪酸的定量計(jì)算是使用歸一化法，從公式可以看出需要計(jì)算樣品中所有脂肪酸甲酯目標(biāo)物的校準(zhǔn)峰面積。通常我們建議可以和《GB 5009.168-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》同時(shí)檢測，因此檢測食品中反式脂肪酸還需要采購37種脂肪酸甲酯混標(biāo)（貨號：CDAA-252795-MIX-1ml）進(jìn)行檢測。

需要注意的是“GB 5009.168-2016”和“GB 5009.257-2016”兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中脂肪酸的歸一化法的計(jì)算公式是并不一樣，在實(shí)際檢測過程中需要分別參照標(biāo)準(zhǔn)要求的公式進(jìn)行計(jì)算。下圖為使用“GB 5009.257-2016”標(biāo)準(zhǔn)檢測大豆油樣品中反式脂肪酸的計(jì)算公式模板。

04

標(biāo)準(zhǔn)品中有一些脂肪酸甲酯的CAS號和標(biāo)準(zhǔn)不一樣？

因不飽和脂肪酸甲酯存在順反異構(gòu)，以及順反物質(zhì)的混合物，因此可能設(shè)計(jì)多個(gè)CAS號，所以需要對標(biāo)準(zhǔn)品的CAS號信息特別注意。特別是“GB 5009.257-2016”中的CAS號信息情況，詳見下表，而在“GB 5009.168-2016”中目標(biāo)物的CAS號信息均正確無誤，各位老師可以結(jié)合“GB 5009.168-2016”進(jìn)行目標(biāo)物CAS號信息的確認(rèn)。

05

有一些反式脂肪酸和順式脂肪酸分離度較差怎么優(yōu)化？

在脂肪酸檢測過程中常常遇到的一個(gè)問題是，順式脂肪酸 C18:3 6c,9c,12c 和一些反式十八碳三烯酸為同分異構(gòu)體，且在色譜柱上出峰時(shí)間完成重合，無法分離，這樣就會導(dǎo)致如果樣品中有出峰，則無法判定該目標(biāo)物是反式和順式的結(jié)構(gòu)，影響結(jié)果判定。小編今天提供2種色譜條件的優(yōu)化方向供各位老師參考。

色譜條件優(yōu)化1（降低初始溫度，降低升溫速率）：

該色譜條件下的譜圖見下圖：

色譜條件優(yōu)化2（降低初始溫度，降低升溫速率，使用梯度流速）：

該色譜條件下的譜圖見下圖：