導(dǎo)讀

超微量分光光度計常用于核酸純度分析、蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量，蛋白質(zhì)重復(fù)性不好是我們遇到的最多的問題。

今天，我們從超微量分光光度的測樣原理來分析一下這個問題。

一般來說，在進行超微量分析時，需要用移液槍將1-2 μL的蛋白質(zhì)樣品加到樣品臺上。

利用蛋白質(zhì)的表面張力，采用樣品拉伸原理，使樣品形成液柱，從而進行檢測。

殊不知這個過程就是影響蛋白質(zhì)測定準(zhǔn)確性和重復(fù)性不好的關(guān)鍵因素，幾乎可以影響到蛋白質(zhì)表面張力的因素都可導(dǎo)致其測試結(jié)果的不穩(wěn)定。

現(xiàn)將這些因素總結(jié)如下：

元析B-600超微量分光光度計主機

B-600超微量分光

光度計蛋白質(zhì)測量方法界面

01

溫度導(dǎo)致樣品揮發(fā)

首先，液體的溫度與分子間引力有一定的關(guān)系。

溫度升高，分子間引力將減弱，表面張力也會隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品，更易形成液柱。

所以，要得到理想的測試效果，首先要確保實驗室環(huán)境的溫度和濕度，要預(yù)防儀器本身的發(fā)熱對樣品的影響。

然而，一款擁有封閉式點樣臺的超微量分光光度計可避免這一問題。

02

鹽

無機鹽作為一種非表面活性劑，具有水合作用，趨向于把水分子拖入水中,因此會增大表面張力，反之亦然。

因此，脫鹽或低鹽的樣品，表面張力會降低，常見于蛋白純化的流程。

例如在進行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析或質(zhì)譜分析時，樣品需經(jīng)過脫鹽處理，這樣的樣品在進行濃度測量時，并不容易形成液柱。

03

表面活性劑

蛋白提取過程中經(jīng)常使用的表面活性劑（清潔劑），如SDS、Triton X100，會大幅降低樣品的表面張力，這些物質(zhì)常會殘留在樣本中，難以完全去除。

尤其一些非離子型表面活性劑對蛋白質(zhì)在界面吸附性的影響更加值得考慮。

04

固液接觸表面

當(dāng)使用移液器將微量樣品加載到點樣臺后，會出現(xiàn)液體與固體的接觸表面，點樣臺表面的親水/疏水性質(zhì)會影響液體的表面張力。

因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計，點樣臺表面具有疏水性涂層，會增大液體的張力。

微量水分測定儀測量的重復(fù)性差可能的原因有:

1.樣品不均勻。例如它們有不同的成分。樣品越不平均則需要更多的樣品來獲得較好重復(fù)性的結(jié)果。

2.選擇的干燥時間太短。延長干燥時間或選擇合適的關(guān)閉模式“每單位時間的重量喪失”。

3.樣品沒有完全干燥(例如:由于表面結(jié)皮)。嘗試混合石英沙進行干燥。

4.選擇的溫度太高或樣品氧化。降低干燥溫度。

5.樣品沸騰并不斷飛濺從而改變溫度。請清洗保護玻璃。

6.當(dāng)保護玻璃污蝕時，加熱量不能完全發(fā)揮,請清潔保護玻璃。

7.溫度傳感器被污染或損壞。請清洗溫度傳感器。

8.操作臺不穩(wěn)固。請應(yīng)用穩(wěn)固的操作臺。

9.外部環(huán)境不穩(wěn)定(振動等)。

液相色譜儀峰面積重復(fù)性不佳是什么原因