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比色法測(cè)酶活時(shí),吸光度值隨時(shí)間增加反而減少,有何原因

艶婗 2017-08-21 07:24:47 649  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • 樊憎茬 2017-08-22 00:00:00
    比色法和分光光度法 利用溶液顏色的深淺變化測(cè)定物質(zhì)含量的方法稱比色分析法。隨著測(cè)試儀器的發(fā)展,從早期的目視比色到分光光度法。分光光度法不僅可適用于可見光區(qū),還可擴(kuò)展到紫外和紅外光區(qū)。物質(zhì)對(duì)光的吸收是比色法和分光光度法的基礎(chǔ),光的吸收定律 :朗伯-比爾定律則是定量測(cè)定的依據(jù)。分光光度法是借助分光光度計(jì)來測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)被測(cè)試液的吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得被測(cè)物質(zhì)的濃度或含量。分光光度法與目視比色法在原理上并不完全一樣。分光光度法是比較有色溶液對(duì)某一波長光的吸收情況,目視比色法則是比較透過光的強(qiáng)度。例如,測(cè)定溶液中KMnO4的含量時(shí),分光光度法測(cè)量的是KMnO4溶液對(duì)黃綠色光的吸收情況,目視比色法則是比較KMnO4溶液透過紅紫色光的強(qiáng)度。在分光光度法中,因入射光是純度較高的單色光,故使偏離朗伯-比爾定律的情況大為減少,標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分的范圍更大,分析結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。因可任意選取某種波長的單色光,故利用吸光度的加和性,可同時(shí)測(cè)定溶液中兩種或兩種以上的組分。由于入射光的波長范圍擴(kuò)大了,許多無色物質(zhì),只要它們?cè)谧贤饣蚣t外光區(qū)域內(nèi)有吸收峰,都可以用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。 比色法和分光光度法的特點(diǎn) : a 靈敏度高 常用來測(cè)試物質(zhì)含量在1%~10-3%的微量組分,甚至可測(cè)定10-4%~10-5%的痕量組分。 b 準(zhǔn)確度高 比色法的相對(duì)誤差是5%~10%,分光光度法是2%~5%,采用精密的分光光度計(jì)可減少到1%~2%,完全可以滿足微量組分測(cè)定的準(zhǔn)確要求。但對(duì)常量組分,其準(zhǔn)確度比重量法和滴定法要低。 c 操作簡便、快速 由于新的靈敏度高、選擇性好的顯色劑和掩蔽劑的出現(xiàn),常可不經(jīng)分離而直接進(jìn)行比色或分光光度法測(cè)定。 d 應(yīng)用廣泛 幾乎所有的無機(jī)離子都可直接或間接的用比色或分光光度法測(cè)定。

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