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- 開機6154645 2017-11-08 00:00:00
- BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量的區(qū)別: 1、Bradford法測得的主要是堿性氨基酸和芳香族氨基酸,BCA則沒有選擇性 2、BCA法蛋白濃度定量是二價銅離子在堿性的條件下,可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子(biuret reaction),一價銅離子和獨特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個銅離子,形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。 Bradford法蛋白定量是染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后引起染料Z大吸收的改變,從465nm變?yōu)?95nm,光吸收增加。蛋白質(zhì)染料復(fù)合物具有高的消光系數(shù),因此大大提高了蛋白質(zhì)測定的靈敏度,Z低檢出量為1μg蛋白。染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合是很迅速的過程,大約需2min,結(jié)合物的顏色在1h內(nèi)是穩(wěn)定的。一些陽離子,如K+,Na+,Mg2+,(NH 4 ) 2 SO 4,乙醇等物質(zhì)不干擾測定,而大量的去污劑如TritonX100,SDS等嚴(yán)重干擾測定,少量的去污劑可通過用適當(dāng)?shù)膶φ斩?。由于染色法簡單迅速,干擾物質(zhì)少,靈敏度高,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)含量的測定。
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- 在處理紅細(xì)胞成為血影的過程中,若改變離子強度可以去除血影蛋白和肌動蛋白,說明他們是膜周邊蛋白。 若用非離子去垢劑TritonX-100處理血影,可去除脂質(zhì)和血型糖蛋白及大部分帶3蛋白(膜內(nèi)在蛋白),但卻能留下纖維狀的膜骨架蛋白網(wǎng)絡(luò)(含血影蛋白、肌動蛋... 在處理紅細(xì)胞成為血影的過程中,若改變離子強度可以去除血影蛋白和肌動蛋白,說明他們是膜周邊蛋白。 若用非離子去垢劑TritonX-100處理血影,可去除脂質(zhì)和血型糖蛋白及大部分帶3蛋白(膜內(nèi)在蛋白),但卻能留下纖維狀的膜骨架蛋白網(wǎng)絡(luò)(含血影蛋白、肌動蛋白等)及部分與之結(jié)合的膜內(nèi)在蛋白。 兩個問題:1.非離子去垢劑的作用原理?為什么它能除去膜結(jié)合蛋白,卻能保留膜周邊蛋白? 2.處理以形成血影的低滲溶液是什么?為什么改變離子強度能除去膜周邊蛋白? 附:請告訴我處理紅細(xì)胞,得到血影的具體步驟? 萬分感謝?。?! 展開
2008-09-30 12:27:41
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