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bradford法 為什么 去垢劑

18766194052 2017-11-07 01:10:16 549  瀏覽
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  • 開機6154645 2017-11-08 00:00:00
    BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量的區(qū)別: 1、Bradford法測得的主要是堿性氨基酸和芳香族氨基酸,BCA則沒有選擇性 2、BCA法蛋白濃度定量是二價銅離子在堿性的條件下,可以被蛋白質(zhì)還原成一價銅離子(biuret reaction),一價銅離子和獨特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個銅離子,形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。 Bradford法蛋白定量是染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后引起染料Z大吸收的改變,從465nm變?yōu)?95nm,光吸收增加。蛋白質(zhì)染料復(fù)合物具有高的消光系數(shù),因此大大提高了蛋白質(zhì)測定的靈敏度,Z低檢出量為1μg蛋白。染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合是很迅速的過程,大約需2min,結(jié)合物的顏色在1h內(nèi)是穩(wěn)定的。一些陽離子,如K+,Na+,Mg2+,(NH 4 ) 2 SO 4,乙醇等物質(zhì)不干擾測定,而大量的去污劑如TritonX100,SDS等嚴(yán)重干擾測定,少量的去污劑可通過用適當(dāng)?shù)膶φ斩?。由于染色法簡單迅速,干擾物質(zhì)少,靈敏度高,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)含量的測定。

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