肝癌是最常見(jiàn)的致命癌癥之一。目前臨床上主要采用手術(shù)切除癌變肝組織，同時(shí)以化療、放療等方式阻止正常肝細(xì)胞被感染惡化來(lái)治 療肝癌；但是，化療會(huì)濫殺濫傷各組織的正常細(xì)胞，并產(chǎn)生極大的副作用，而且在肝癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移或再生后也難以治愈。

因此，設(shè)計(jì)與制造出更好的用于肝癌治 療的藥物，是醫(yī)藥研究人員亟待解決的難題。如何提高藥物療 效，不僅可以從藥物結(jié)構(gòu)本身出發(fā)，而且可以從藥物載體入手。選擇新型藥物載體或靶向基團(tuán)，可以使有效藥物分子直接作用于癌癥患處，提高藥物靶向性，減少藥物對(duì)正常組織的傷害，減輕患者的疼痛。

近日，遼寧新藥研發(fā)重 點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室李麗教授課題組成功構(gòu)建并制備了兩種甘草次酸修飾的金屬有機(jī)框架藥物載體，并通過(guò)組織分布和活體成像實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證載體具有明顯的肝靶向性。該成果已發(fā)表在納米技術(shù)與精密工程領(lǐng)域國(guó)際權(quán)威期刊《Nanotechnology》。

1. 甘草次酸（GA）

甘草次酸（Glycyrrhetininc Acid，GA）是從中草藥甘草中提取分離出來(lái)的具有抗 炎、抗病毒、抗?jié)兊榷喾N藥理活性的甘草酸苷元。近期研究發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞膜上鑲嵌著許多GA特異性受體，可與GA特異性結(jié)合，因此，GA作為藥物靶向分子進(jìn)行修飾的藥物載體已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)和一種新的靶向性治 療肝癌的有效途徑。

2. 金屬有機(jī)框架（MOFs）

金屬有機(jī)框架材料（Metal-organic Frameworks，MOFs），是一類(lèi)通過(guò)組裝無(wú)機(jī)金屬離子與有機(jī)配體形成的具有多孔隙、高比表面積的新型材料。它的最 大的優(yōu)點(diǎn)是具有良好的生物相容性，而且會(huì)在體內(nèi)特定環(huán)境中自行分解，減少藥物在體內(nèi)的副作用，降低耐藥性，提高藥物治 LX率。

通過(guò)在MOFs表面修飾GA，可以實(shí)現(xiàn)MOFs的肝靶向性，并且MOFs的孔隙率高，具有超大比表面積，可以有效裝載藥物，提高載藥能力。

兩種MOFs載體：Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA與UiO-66-NH2-GA。

3. 小鼠體內(nèi)靶向性研究

DiR熒光染料，DiR＠Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA和DiR＠Uio-66-ＮＨ2-GA 在小鼠體內(nèi)不同時(shí)間段的熒光成像圖

DiR熒光染料，DiR＠Uio-66-COOH-1,4-丁二胺-GA和DiR＠Uio-66-ＮＨ2-GA 在心、肝、脾、肺、腎的熒光成像圖

關(guān)于多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)

AniView100多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)是廣州博鷺騰生物科技有限公司全新推出的高靈敏度、多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)。其采用一級(jí)背部薄化、背部感光超低溫CCD相機(jī)，具有極高的檢測(cè)靈敏度。大功率全波長(zhǎng)鹵素?zé)艏ぐl(fā)光源配合精密復(fù)雜的全局光源和萬(wàn)向鵝頸管點(diǎn)狀光源光路系統(tǒng)，再加上頂 級(jí)的光譜轉(zhuǎn)換能力和多組濾光片組合，極大的提高了熒光信號(hào)的特異性，并大大縮短曝光時(shí)間。

慢性髓系白血病(Chronic myeloid leukemia, CML)是一種由造血干細(xì)胞染色體t(9；22)(q34；q11)易位引起，并在分子水平上形成Bcr-Abl融合基因的骨 髓增生性疾病。使用酪氨酸激酶抑 制劑(Tyrosine kinase inhibitors, TKIs)可以緩解疾病，但TKIs耐藥性是治 療失敗或誘發(fā)急性白血病的主要問(wèn)題。

根據(jù)Abl激酶結(jié)構(gòu)域點(diǎn)突變的不同，TKIs的耐藥機(jī)制主要包括Bcr-Abl依賴(lài)型和非Bcr-Abl依賴(lài)型。Bcr-Abl依賴(lài)型的耐藥性最常見(jiàn)，它會(huì)干擾小分子酪氨酸激酶抑 制劑伊馬替尼（Imtatinib, IM）結(jié)合和隨后的激酶抑 制。然而，超過(guò)50%的耐藥CML患者中并沒(méi)有Bcr-Abl突變。

▲ 慢性髓系白血病

蛋白激酶C(Protein kinases C, PKCs)在細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、增殖、凋亡和造血干細(xì)胞分化等多種細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮作用，并和Bcr-Abl協(xié)調(diào)參與對(duì)惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化至關(guān)重要的幾種信號(hào)通路。實(shí)驗(yàn)和臨床證據(jù)表明，使用PKC抑 制劑可以有效地治 療CML。最近，不同的PKC亞型也被報(bào)道參與CML細(xì)胞的耐藥，但是，PKC信號(hào)在CML TKIs耐藥中的作用并不清楚。

▲ 蛋白激酶C的晶體結(jié)構(gòu)

近日，貴州醫(yī)科大學(xué)王季石教授課題組根據(jù)先前的研究結(jié)果：一種泛PKCs抑 制劑星孢菌素(Stauroporine)在低濃度下可以有效地逆轉(zhuǎn)K562R細(xì)胞(沒(méi)有任何突變)的IM耐藥，因此推測(cè)Bcr-Abl非依賴(lài)型IM耐藥可能是由PKC亞型介導(dǎo)。在此基礎(chǔ)上，鑒于白血病干細(xì)胞(Leukemia stem cells)在CML TKIs耐藥中起基礎(chǔ)性作用，研究首次在Bcr-Abl非依賴(lài)型TKI耐藥的CML患者CD34+細(xì)胞中檢測(cè)到9種PKCs亞型的表達(dá)。對(duì)PKC亞型異常表達(dá)所介導(dǎo)的機(jī)制進(jìn)行深入研究時(shí)，使用博鷺騰AniView100多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)拍攝的活體成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從體內(nèi)進(jìn)一步證明PKC-β的過(guò)表達(dá)與腫瘤耐藥密切相關(guān)，表明靶向PKC-β過(guò)表達(dá)可能是克服CML耐藥的一種新的治 療機(jī)制。

相關(guān)成果已發(fā)表在期刊《Journal of Cellular Physiology》。

▲抑 制PKC-β可增強(qiáng)IM對(duì)CML細(xì)胞的體內(nèi)殺傷作用

(a) 博鷺騰AniView100拍攝的不同藥物處理的CML小鼠模型中白血病細(xì)胞的活體示蹤成像圖。LY333531: PKCβ 抑 制劑。

(b) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠CD33+和CD45+細(xì)胞。

(c) 直方圖顯示流式細(xì)胞儀檢測(cè)的各組小鼠CML細(xì)胞的差異。

(d) 各組小鼠的生存曲線。

(e、f) 比較各組小鼠脾 臟體積和重量。

(g、h) Wright‘s染色檢測(cè)各組小鼠外周血中CML的進(jìn)展情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t檢驗(yàn)。**表示p<0.01，*表示p<0.05。

參考文獻(xiàn)

1、Ma D, et al. PKC‐β/Alox5 axis activation promotes Bcr‐Abl‐independent TKI‐resistance in chronic myeloid leukemia[J]. Journal of Cellular Physiology, 2021.

2、Zubair M S, et al. Cembranoid Diterpenes as Antitumor: Molecular Docking Study to Several Protein Receptor Targets[C]// International Conference on Computation for Science & Technology. 2015.

病毒性疾病爆發(fā)是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的問(wèn)題，具有傳播快、發(fā)病快和致死率高等特點(diǎn)，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失；而疫苗免疫是對(duì)其進(jìn)行防控的最有效措施。在水產(chǎn)動(dòng)物免疫途徑中，注射方式效果較好，但不適合漁業(yè)生產(chǎn)；浸浴免疫操作簡(jiǎn)單，適合在魚(yú)苗和魚(yú)類(lèi)大規(guī)模養(yǎng)殖中推廣使用，但是浸浴疫苗的應(yīng)用需要克服生物屏障等阻礙作用，才能使疫苗發(fā)揮出理想的免疫效果。

研究發(fā)現(xiàn)，納米載疫苗靶向遞呈技術(shù)是解決水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)實(shí)現(xiàn)疫苗高效免疫保護(hù)最安全有效的手段之一；單壁碳納米管(SWCNTs)是一種高效的疫苗載體，具有高穿透性、高承載力、易修飾性和安全性等特性；甘露糖受體(Mannose receptor)是抗原呈遞細(xì)胞上的標(biāo)志性受體，能夠結(jié)合甘露糖修飾的抗原物質(zhì)，可以作為疫苗的靶點(diǎn)。

近日，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院朱斌教授課題組運(yùn)用納米載疫苗靶向遞呈技術(shù)，構(gòu)建靶向性碳納米管載疫苗系統(tǒng)，選擇高效的疫苗載體(單壁碳納米管)來(lái)突破生物屏障的限制，并利用合適的佐劑(甘露糖修飾的抗原物質(zhì))來(lái)增強(qiáng)疫苗的免疫效果，使疫苗充分發(fā)揮治療和免疫保護(hù)效果。這些研究成果相繼發(fā)表在期刊Vaccines和Journal of Nanobiotechnology，可以為其它水產(chǎn)動(dòng)物納米載疫苗系統(tǒng)的研究、應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)，對(duì)漁業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和水產(chǎn)品食品安全生產(chǎn)具有重要意義。

文章一

草魚(yú)呼腸孤病毒(GCRV)已被公認(rèn)為是所有水生病毒物種中最具致病性，VP7作為GCRV的外衣殼蛋白，是一種可以誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)的主要抗原。通過(guò)構(gòu)建靶向浸沒(méi)疫苗遞送系統(tǒng)(CNTs-M-VP7)，該系統(tǒng)由SWCNTs作為疫苗載體，GCRV VP7蛋白作為抗原，甘露糖作為抗原呈遞細(xì)胞靶向部分。結(jié)果表明CNTs-M-VP7疫苗可通過(guò)粘膜組織(皮膚，腮和腸)進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)，呈現(xiàn)給免疫相關(guān)組織，顯著誘導(dǎo)的成熟和呈遞過(guò)程，從而引發(fā)強(qiáng)大的免疫反應(yīng)。

a、CNTs-M-VP7納米疫苗的制備過(guò)程；

b、巨噬細(xì)胞對(duì)納米疫苗的吸收；

c、魚(yú)組織中納米疫苗的攝??；

d、用博鷺騰多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè)接種魚(yú)體內(nèi)和體外熒光的分布；

e、草魚(yú)接種后，用GCRV人工攻擊后的相對(duì)存活百分比(每組n =100)。

文章二

鯉春病毒血癥(Spring viremia of carp，SVC)是危害最嚴(yán)重的水產(chǎn)病毒性疾病之一，SVCV作為SVC的病原，其表面糖蛋白(G)被認(rèn)為是一種主要抗原，可以誘導(dǎo)原發(fā)性宿主免疫反應(yīng)。通過(guò)化學(xué)修飾的方法將SVCV的抗原蛋白(G)、功能化單壁碳納米管和功能化甘露糖進(jìn)行結(jié)合，構(gòu)建了靶向性碳納米管載疫苗系統(tǒng)(SWCNTs-MG)。結(jié)果表明SWCNTs-MG通過(guò)提高疫苗進(jìn)入魚(yú)體的含量，并增強(qiáng)對(duì)抗原呈遞細(xì)胞的靶向呈遞作用，進(jìn)而提高疫苗浸浴免疫的效果。

a、SWCNTs-MG納米疫苗的制備過(guò)程；

b、納米疫苗在體內(nèi)和體外的安全性評(píng)估；

c、鯉魚(yú)巨噬細(xì)胞體外納米疫苗的攝??；

d、魚(yú)組織中納米疫苗的攝?。?/p>

e、用博鷺騰多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè)接種魚(yú)體內(nèi)和體外熒光的分布；

f、在接種的鯉魚(yú)中用SVCV人工攻擊后的相對(duì)存活百分比。

Tips   AniView 100多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)

AniView 100多模式動(dòng)物活體成像系統(tǒng)作為廣州博鷺騰生物科技有限公司推出的高靈敏度動(dòng)物活體成像系統(tǒng)，其采用全密閉抗干擾暗箱，避免外界光源及宇宙射線對(duì)拍照影響的同時(shí)，配合零缺陷、科研級(jí)高靈敏背部薄化、背部感應(yīng)型冷CCD相機(jī)，極大地提高成像的靈敏度。AniView 100可以檢測(cè)到<100個(gè)Luciferase標(biāo)記細(xì)胞，或＜10ng FITC。

參考文獻(xiàn)：

1、Zhang C ,  Wang G X ,  Zhu B . Journal of Nanobiotechnology, 2020, 18(1).

2、Zhu B, Zhang C, Zhao Z, Wang GX. Vaccines(Basel). 2020;8(1):87. 

3、張晨.[D]. 西北農(nóng)林科技大學(xué),2019.

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用（文獻(xiàn)解讀）

本文收集了四篇相關(guān)文獻(xiàn)，主要討論：低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用。

畜禽屠宰后，鮮肉仍保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其水分主要分布在肌原纖維內(nèi)、肌原纖維與細(xì)胞膜之間、肌細(xì)胞之間以及肌束之間。肌肉組織的自身結(jié)構(gòu)和鮮肉的處理方法會(huì)對(duì)肉中水分分布產(chǎn)生影響，并zui 終影響鮮肉的保水性，因而生鮮肉在成熟、保鮮貯藏過(guò)程中的水分變化受到廣泛關(guān)注。

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)（lowfield NMR，LF-NMR）是一種快速、無(wú)損的分析檢測(cè)技術(shù)，可以通過(guò)測(cè)定肉品中氫原子核在磁場(chǎng)中的弛豫特性來(lái)確定肉品中水分的不同狀態(tài)，因而在肉品領(lǐng)域已有諸多研究。

主要集中在以下3個(gè)方面：

1）測(cè)定肉與肉制品中不同狀態(tài)水分的分布和遷移；

2）結(jié)合其他指標(biāo)判斷肉的食用品質(zhì)和加工品 質(zhì)；

3）進(jìn)行注水、注膠肉的鑒偽，異質(zhì)肉的鑒別和肉品新鮮度檢測(cè)。

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用：肉品水分分布/水分含量分析，肉品品質(zhì)評(píng)定

文獻(xiàn)結(jié)論：

肉中不易流動(dòng)水、自由水與肉的持水力、保水性、風(fēng)味等品質(zhì)指標(biāo)相關(guān)。從相關(guān)性分析可以看出牦牛肉在貯藏過(guò)程中，物理化學(xué)性質(zhì)的變化常伴隨著肉中水分子流動(dòng)性的變化。可利用T2弛豫時(shí)間進(jìn)行不同貯藏時(shí)間下牦牛肉品質(zhì)的評(píng)定。

▲牦牛肉在貯藏過(guò)程中橫向弛豫時(shí)間分布

▲牦牛肉指標(biāo)間的相關(guān)性分析

文獻(xiàn)來(lái)源：

袁乙平，李靖，馬螈小等，低場(chǎng)核磁結(jié)合理化指標(biāo)分析低溫貯藏真空包裝牦牛肉的品質(zhì)[J].食品工業(yè)科技，2019,40(06):31-36.

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用：肉品貯藏溫度Tg研究

文獻(xiàn)結(jié)論：

通過(guò)對(duì)牛肉品質(zhì)指標(biāo)與核磁共振參數(shù)T2的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)T22與各品質(zhì)參數(shù)均有強(qiáng)的相關(guān)性，因此可根據(jù)T22 變化表征牛肉品質(zhì)變化。 通過(guò)核磁成像實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，－10℃貯藏牛肉干耗現(xiàn)象嚴(yán)重，肉的保水性差，不利于牛肉的長(zhǎng)期貯藏?；谒謸p失和經(jīng)濟(jì)成本考慮，牛肉盡量在Tg以下貯藏，控制在－15～－20℃ 左右為宜。

▲LF－NMR T2與測(cè)量指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)

　　▲不同貯藏溫度和時(shí)間下牛肉的核磁成像

文獻(xiàn)來(lái)源：

馬瑩，楊菊梅，王松磊等，基于LF_NMR及成像技術(shù)分析牛肉貯藏水分含量變化[J].食品工業(yè)科技，2018,39(02) :278-284.

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用：冷凍肉品解凍方式研究

文獻(xiàn)結(jié)論：

不同的解凍方式對(duì)凍豬肉的橫向弛豫時(shí)間T2的影響也不盡相同。凍豬肉解凍過(guò)程中發(fā)生了不同水分群之間的水分遷移。

LF-NMR T2弛豫的水分分布情況顯示，解凍方式對(duì) 豬肉中不同水分群間的遷移具有顯著影響，冷藏解凍使凍豬肉中的不易流動(dòng)水向自由水進(jìn)行遷移，微波-1解凍則使凍豬肉中的自由水向不易流動(dòng)水進(jìn)行遷移，而微波-2解凍更傾向于使不易流動(dòng)水向結(jié)合水遷移。

▲肉樣橫向弛豫時(shí)間T2變化的三維瀑布圖

　　▲不同解凍方式下肉樣橫向弛豫時(shí)間T2的變化

文獻(xiàn)來(lái)源：

程天賦，蔣奕，張翼飛等 ，基于低場(chǎng)核磁共振研究不同解凍方式對(duì)凍豬肉食用品質(zhì)的影響[J].食品科學(xué)，2019,40(07):20-26.

低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用：5種不同解凍方式對(duì)比

下面我們通過(guò)一個(gè)新的案例，來(lái)了解整個(gè)研究過(guò)程的思路和模式。

文獻(xiàn)來(lái)源：

程天賦，俞龍浩，蔣奕等，基于低場(chǎng)核磁共振探究解凍過(guò)程中肌原纖維水對(duì)雞肉食用品質(zhì)的影響[J].食品科學(xué),2019,40(09),16-22.

本文研究旨在基于低場(chǎng)核磁共振橫向弛豫時(shí)間T2分析解凍過(guò)程中肌原纖維水的分布及流動(dòng)性與雞肉食用品質(zhì)間的關(guān)聯(lián)性。

　　研究思路

　　冷鮮雞胸肉（宰后32?h）為對(duì)照，采用冷藏解凍、微波解凍（微波-1、微波-2）與超聲解凍（180、200 W） 5 種不同方式解凍中心溫度為－20 ℃的凍結(jié)雞胸肉，測(cè)定肉樣T2、品質(zhì)特性指標(biāo)并分析它們之間的相關(guān)性。

　　研究方案　　

▲肉樣橫向弛豫時(shí)間T2變化的三維瀑布圖

▲不同解凍方式下肉樣橫向弛豫時(shí)間T2的變化表

解凍方式對(duì)T22峰頂點(diǎn)時(shí)間和T22峰比例有顯著影響（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，冷藏解凍和200W超聲解凍肉樣的T22峰頂點(diǎn)時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P＜0.05）（表），峰值右移（圖）。其他3組解凍肉樣之間T22峰頂點(diǎn)時(shí)間無(wú)顯著差異，但兩組微波解凍肉樣的T22有左移的趨勢(shì)。5組解凍肉樣的T22峰比例與對(duì)照組相比均顯著下降，其中微波-2解凍肉樣與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.050)，其余4組與對(duì)照組相比差異極顯著（P＜0.01）。該結(jié)果說(shuō)明解凍過(guò)程會(huì)降低凍雞肉肉樣肌水中的不易流動(dòng)水含量。

文獻(xiàn)結(jié)論：

品質(zhì)方面：從解凍過(guò)程中肌水對(duì)雞胸肉品質(zhì)影響的角度考慮，微波-2解凍技術(shù)更適合冷凍雞胸肉的解凍。

水分遷移：結(jié)果表明結(jié)合水、不易流動(dòng)水含量與肉樣的WHC、嫩度和多汁性評(píng)分呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），與解凍損失率、蒸煮損失率和剪切力呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；自由水與這些指標(biāo)的相關(guān)性與之相反。 冷藏解凍、微波-1解凍與兩組超聲解凍肉樣出現(xiàn)較為明顯的不易流動(dòng)水向自由水遷移的現(xiàn)象，且肉品質(zhì)均顯著變差；而微波-2解凍對(duì)雞胸肉品質(zhì)的負(fù)面影響最小，肌水水分群中還出現(xiàn)了強(qiáng)結(jié)合水水分群，并且微波解凍具有解凍速度快的天然優(yōu)勢(shì)。

核磁共振（ nuclear?magnetic?resonance， NMR）可以提供關(guān)于水質(zhì)子與蛋白質(zhì)中可交換質(zhì)子之間相互作用的直接信息，從而提供肌水的化學(xué)物理狀態(tài)。

小結(jié)：
低場(chǎng)核磁共振技術(shù)在肉品研究中的應(yīng)用，主要集中在：測(cè)定肉品中的水分分布和遷移；判斷肉的食用品質(zhì)和加工品質(zhì)；進(jìn)行注水、注膠肉的鑒偽，異質(zhì)肉的鑒別和肉品新鮮度檢測(cè)。

      本期webinar邀請(qǐng)到的是軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院輻射醫(yī)學(xué)研究所抗輻射藥物研究室，副研究員李琳娜博士。李博士畢業(yè)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生化與分子生物學(xué)專(zhuān)業(yè)。2011-2013年在美國(guó)德克薩斯大學(xué)布朗醫(yī)學(xué)ZX做博士后，主要從事激酶組學(xué)和腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)研究。目前的研究工作主要包括，腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)激酶的篩選鑒定、小動(dòng)物多模態(tài)成像技術(shù)的研究和應(yīng)用、藥物的臨床前篩選評(píng)價(jià)。ZD關(guān)注各類(lèi)腫瘤模型、候選物成藥性和臨床前評(píng)價(jià)階段面臨的理論和技術(shù)問(wèn)題。

講座題目：

小動(dòng)物多模態(tài)成像技術(shù)在藥物研究中的應(yīng)用

講座時(shí)間：

2019年6月13日14:00-15:00

主講人：

李琳娜 博士

講座形式：

網(wǎng)絡(luò)講座，手機(jī)或PC即可參與

（會(huì)議鏈接和如下報(bào)名鏈接相同）

內(nèi)容簡(jiǎn)介：

以1.1類(lèi)創(chuàng)新藥物研發(fā)為線索，結(jié)合16年腫瘤藥理的研究經(jīng)驗(yàn)，介紹分享新藥研究申報(bào)過(guò)程中，熒光標(biāo)記藥物在藥代研究中的特殊作用；

生物發(fā)光腫瘤模型在藥效研究中的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)；

腫瘤EMT研究中新模型創(chuàng)造的新突破；

兩藥合用定量計(jì)算時(shí)生物發(fā)光腫瘤模型的特別貢獻(xiàn)。

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珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學(xué)、食品及應(yīng)用市場(chǎng)推出獨(dú)特的解決方案，助力科學(xué)家、研究人員和臨床醫(yī)生解決Z棘手的科學(xué)和YL難題。憑借深厚的市場(chǎng)了解和技術(shù)專(zhuān)長(zhǎng)，我們助力客戶更早地獲得更準(zhǔn)確的洞見(jiàn)。在，我們擁有12500名專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個(gè)國(guó)家，時(shí)刻專(zhuān)注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類(lèi)生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年?duì)I收達(dá)到約28億美元，為標(biāo)準(zhǔn)普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號(hào)1-877-PKI-NYSE。

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2020年4月21日，由Tara N. Guhr Lee等在《Journal of Cystic Fibrosis》期刊中發(fā)表了《Accumulation and persistence of ivacaftor in airway epithelia with prolonged treatment》的文章，文中使用Azure Sapphire對(duì)IRDye 680孵育的印跡膜掃描成像，對(duì)CFTR蛋白進(jìn)行定量分析。

背景：

囊性纖維化（CF）的基本缺陷反映了囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑（CFTR）的功能喪失，囊性纖維蛋白是參與氯離子和碳酸氫鹽跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的質(zhì)膜蛋白。CF的一個(gè)關(guān)鍵ZL方法是CFTR調(diào)節(jié)劑，即用于改善異常CFTR功能的藥物。

CFTR調(diào)節(jié)劑的當(dāng)前劑量策略基于血清藥代動(dòng)力學(xué)，但靶組織（如氣道上皮）中的藥物濃度尚不清楚。先前的數(shù)據(jù)表明，CFTR調(diào)節(jié)劑可能在氣道上皮中積聚，血清藥代動(dòng)力學(xué)可能無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)慢性ZL的效果。

方法：

在ZL和沖洗階段的各個(gè)時(shí)間間隔，通過(guò)質(zhì)譜法測(cè)量藥物濃度，在Ussings室中評(píng)估電生理功能，并通過(guò)Western印跡定量成熟的CFTR蛋白。

結(jié)果：

與lumacaftor或tezacaftor相比，CF-HBEs中ivacaftor的累積程度要大得多，并且在沖洗14天后仍然持續(xù)升高。CFTR活性在ZL7天達(dá)到峰值，但隨著ivacaftor的進(jìn)一步積累而降低，盡管沖洗后仍保持在基線以上。

結(jié)論：

慢性ZL期間和之后，CFTR調(diào)節(jié)劑的細(xì)胞內(nèi)累積和持續(xù)存在提示氣道上皮內(nèi)復(fù)雜的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特性不能由血清藥代動(dòng)力學(xué)預(yù)測(cè)?？赡苄枰苯訙y(cè)量靶組織中的藥物以?xún)?yōu)化劑量策略，并且ZL停止后CFTR調(diào)節(jié)劑的持續(xù)存在對(duì)個(gè)性化藥物ZL方法具有重要意義。

Sapphire 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)可完成NIR和RGB熒光，化學(xué)發(fā)光和磷屏成像等多種檢測(cè)。無(wú)論您的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行哪種成像，例如普通的Western Blot、Southern印跡、2D和2D DIGE、可視化組織或小型模式動(dòng)物成像都可高質(zhì)量實(shí)現(xiàn)。

近日在《Stem Cells and Development》期刊雜志上發(fā)表題為《Bone Marrow Stromal Cell-Derived Exosomes promote muscle healing following contusion through macrophage polarization》的文章。在這項(xiàng)研究中，使用梯度離心從BMSC的上清液中分離和純化外泌體。納米粒子跟蹤分析，透射電子顯微鏡和蛋白質(zhì)印跡被用來(lái)鑒定外泌體。使用ECHO正倒置一體熒光顯微鏡對(duì)HE染色，Masson染色和免疫熒光的肌肉樣本進(jìn)行成像。ZH得到的結(jié)論：BMSC-Exos通過(guò)改變巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)YZ炎癥反應(yīng)，減輕了小鼠的肌肉挫傷損傷并促進(jìn)了肌肉的愈合。

背景介紹：

骨骼肌挫傷是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和臨床最常見(jiàn)的損傷之一。由于挫傷后局部纖維化形成，受傷的肌肉很容易再次受傷，骨骼肌纖維化被證明與損傷初期的過(guò)度炎癥反應(yīng)有關(guān)，而與炎癥浸潤(rùn)密切相關(guān)的巨噬細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)在骨骼肌的愈合過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。如何調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化仍然是肌肉愈合的重要問(wèn)題。

最近的研究表明，骨sui基質(zhì)細(xì)胞源性外泌體（BMSC-Exos）可以影響炎癥和組織恢復(fù)。因此，作者假設(shè)BMSC-Exos可以通過(guò)影響巨噬細(xì)胞極化來(lái)下調(diào)炎癥反應(yīng)，從而促進(jìn)挫傷后骨骼肌的愈合。在這項(xiàng)研究中，作者從BMSC中分離了BMSC-Exos，在體內(nèi)和體外測(cè)試了它們的功能，并研究了BMSC-Exos對(duì)巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)和肌肉愈合影響的潛在機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)方法：

通過(guò)粒度分析、透射電鏡和Western Blot方法鑒定外泌體，為了檢查靶蛋白的表達(dá)和位置，在TA（脛前?。┣衅线M(jìn)行了免疫熒光染色。使用的一抗是抗CD206，抗α-SMA，抗MyoD和抗Pax7，DAPI用于定位細(xì)胞核，通過(guò)熒光顯微鏡（ECHO Revolve，美國(guó)）觀察圖像。

結(jié)果：

總體外觀，相對(duì)重量，形態(tài)特征：挫傷損傷后3d，挫傷組的TA肌肉比BMSC-Exos組的肌肉血腫更大（圖3A）。兩組之間在第三天，TA肌肉的相對(duì)肌肉重量也顯著不同，挫傷組的TA肌肉較重（圖3B）。

對(duì)于HE染色，在陰性對(duì)照組中，肌肉纖維規(guī)則且密集地排列。但是，在挫傷組中，隨著時(shí)間的流逝，肌肉纖維變得越來(lái)越分散，許多增殖的膠原纖維占據(jù)了肌肉纖維的空間，這些現(xiàn)象在BMSC-Exos組中得到了改善。Masson染色中，在挫傷組中觀察到大量膠原纖維，而B(niǎo)MSC-ExosZL在所有時(shí)間點(diǎn)均顯著減少了纖維化區(qū)域（圖3C-D）。

此外，為了進(jìn)一步檢查纖維化狀況，作者對(duì)平滑肌肌動(dòng)蛋白α（α-SMA）進(jìn)行了免疫熒光染色。形態(tài)學(xué)結(jié)果表明，BMSC-ExosZL顯著降低了挫傷在不同時(shí)間點(diǎn)引起的高蛋白表達(dá)和α-SMA的廣泛分布（圖4）。巨噬細(xì)胞耗竭后，BMSC-Exos的抗纖維化作用受到Y(jié)Z，挫傷和BMSC-ExosZL組在第14天均觀察到大的纖維化區(qū)域和廣泛分布的α-SMA蛋白。

為了確定衛(wèi)星細(xì)胞的不同成肌狀態(tài)，進(jìn)行了Pax7和MyoD的共定位。形態(tài)上，從受傷后3天開(kāi)始，總的Pax7 + / MyoD +衛(wèi)星細(xì)胞顯著增加。顯然，BMSC-ExosZL組的數(shù)量多于挫傷組和陰性對(duì)照組。在三個(gè)不同的組中，相對(duì)的Myod蛋白表達(dá)也呈現(xiàn)出類(lèi)似的趨勢(shì)（圖5D）。綜上所述，BMSC-Exos注射液可在早期促進(jìn)肌肉再生。

結(jié)論：

研究表明局部使用BMSC-Exos可以減少挫傷后的纖維化組織，增強(qiáng)肌肉再生并改善骨骼肌的生物力學(xué)特性。BMSC-Exos通過(guò)促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞極化，YZ了受傷肌肉的炎性微環(huán)境。作者的研究為BMSC-Exos在臨床實(shí)踐中可用于肌肉愈合提供了有力的支持。

Revolve正倒置一體顯微鏡

Revolve展現(xiàn)了其非凡的靈活性，可以輕松地實(shí)現(xiàn)正置和倒置顯微鏡轉(zhuǎn)換，創(chuàng)新性地把正倒置顯微鏡合二為一，開(kāi)啟了顯微鏡Hybrid時(shí)代。

?   視網(wǎng)膜屏顯示技術(shù)：比擬目鏡人眼觀察效果。

?  全視野觀察：更清晰，更方便。

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?   自動(dòng)化操作：通過(guò)iPad Pro點(diǎn)觸操控相機(jī)及熒光通道之間的切換，實(shí)現(xiàn)了完全自動(dòng)化操作。

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顯微CT分析可用于牙科研究中的各種應(yīng)用，如牙釉質(zhì)厚度、根管形態(tài)、根管預(yù)備、顱面部骨骼結(jié)構(gòu)、顯微有限元建模、牙體組織工程、牙硬組織礦物密度及種植體等方面。它可以提供高分辨率圖像以及牙齒、骨骼和植入物的定性和定量分析。      

根管是一種孔隙，這種在牙齒中間的低密度空間對(duì)牙髓病的研究起了可探索的方向。顯微CT在牙科填料的研究上，特別適用于三維定量評(píng)價(jià)根管充填物。

牙釉質(zhì)厚度在人類(lèi)進(jìn)化中具有分類(lèi)學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育價(jià)值。顯微CT有效且無(wú)損的技術(shù)特性被用于測(cè)量各種考古標(biāo)本的牙釉質(zhì)厚度。在臨床研究中，牙釉質(zhì)厚度被認(rèn)為對(duì)于咬合負(fù)荷方案的解釋具有重要意義。

實(shí)例2：大鼠下頜骨和舀齒

大鼠或小鼠下頜骨和臼齒在牙周病和其他牙科相關(guān)領(lǐng)域的許多研究模型中有著重要價(jià)值。通過(guò)顯微CT對(duì)動(dòng)物下頜骨和牙齒的測(cè)量研究，可進(jìn)一步分析牙周生物型各特征之間的相關(guān)性,為口腔美學(xué)修復(fù)、種植ZL方案的選擇、ZL預(yù)后的判斷以及LX的評(píng)估提供理論基礎(chǔ)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：VENUS? Micro-CT 

            中文名：桌面型高分辨顯微CT

            型號(hào)：VNC-100

影像軟件：Avatar 1.3 （平生YL科技）

生命科學(xué)研究離不開(kāi)各式各樣的模式生物，模式生物由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生活周期短、培養(yǎng)簡(jiǎn)單、基因組小等特點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。模式生物作為材料不僅能回答生命科學(xué)研究中Z基本的生物學(xué)問(wèn)題，對(duì)人類(lèi)一些疾病的ZL也有借鑒意義。常見(jiàn)的模式生物有真菌中的酵母，低等無(wú)脊椎動(dòng)物中的線蟲(chóng)，昆蟲(chóng)綱的果蠅，魚(yú)綱的斑馬魚(yú)，哺乳綱的小鼠以及植物中的擬南芥。

高內(nèi)涵系統(tǒng)不僅僅適用于各種各樣的細(xì)胞模型，對(duì)各種小型的模式生物也非常友好，通過(guò)將這些模式生物做一些預(yù)處理，放在微孔板中，我們就可以用高內(nèi)涵系統(tǒng)來(lái)拍攝和分析它們。本期和下期，我們將隆重介紹高內(nèi)涵與這些模式生物的故事。

酵 母

常用于模式生物的酵母有兩個(gè)物種：出芽酵母和裂殖酵母，以出芽酵母為例，其細(xì)胞為球形或者卵形，直徑5–10μm。其繁殖的方法為出芽生殖。使用高內(nèi)涵系統(tǒng)，可以觀察和分析酵母的世代周期、蛋白定位等。

實(shí)驗(yàn)一

Hoechst 33342 染色酵母活細(xì)胞，通過(guò)63倍水浸式物鏡拍攝酵母細(xì)胞，高內(nèi)涵分析軟件Harmony自動(dòng)識(shí)別酵母細(xì)胞，PhenoLOGIC人工智能算法區(qū)分出芽細(xì)胞：

實(shí)驗(yàn)二

酵母細(xì)胞器相關(guān)蛋白的標(biāo)記，紅色標(biāo)記整個(gè)酵母細(xì)胞，綠色為不同細(xì)胞器，高內(nèi)涵分析軟件Harmony可識(shí)別不同的細(xì)胞器結(jié)構(gòu)，分析其熒光強(qiáng)度、形態(tài)學(xué)參數(shù)和紋理參數(shù)[1]。

下圖為突變體中蛋白定位發(fā)生變化[1]。

斑馬魚(yú)

斑馬魚(yú)也是成熟且常見(jiàn)的模式生物，常用于疾病研究中。斑馬魚(yú)成魚(yú)體長(zhǎng)5cm左右，幼魚(yú)0.5-2cm，全身透明。一般首先對(duì)斑馬魚(yú)進(jìn)行麻醉，再進(jìn)行高內(nèi)涵拍攝。

實(shí)驗(yàn)一

斑馬魚(yú)曲度的研究，毒性處理或一些基因突變會(huì)導(dǎo)致斑馬魚(yú)的曲度發(fā)生變化，高內(nèi)涵分析軟件Harmony可分析斑馬魚(yú)的軸向長(zhǎng)度、曲率、彎曲角度等參數(shù)：

實(shí)驗(yàn)二

斑馬魚(yú)血管研究，斑馬魚(yú)全身透明，一直以來(lái)都是非常好的心血管研究模式生物，通過(guò)20倍水浸式物鏡（NA1.0）對(duì)斑馬魚(yú)血管進(jìn)行成像，高內(nèi)涵分析軟件Harmony可通過(guò)一系列算法識(shí)別熒光標(biāo)記的斑馬魚(yú)血管結(jié)構(gòu)，也可對(duì)血管結(jié)構(gòu)做3D重構(gòu)，分析血管長(zhǎng)度、熒光強(qiáng)度等參數(shù)：

參考文獻(xiàn)

1.Yeast Proteome Dynamics from Single Cell Imaging and Automated Analysis. Cell. 2015 Jun 4;161(6):1413-24. doi: 10.1016/j.cell.2015.04.051.

關(guān)于珀金埃爾默：

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       高內(nèi)涵系統(tǒng)不僅僅適用于各種各樣的細(xì)胞模型，對(duì)各種小型的模式生物也非常友好，通過(guò)將這些模式生物放在微孔板中，我們就可以用高內(nèi)涵系統(tǒng)來(lái)拍攝和分析它們。本期，我們將繼續(xù)介紹高內(nèi)涵與這些模式生物的故事。

擬南芥

擬南芥為兩年生草本，一般可長(zhǎng)到7-40厘米，是植物學(xué)Z為常見(jiàn)的模式生物。其幼苗、根、莖、葉、原生質(zhì)體均可在高內(nèi)涵上進(jìn)行自動(dòng)成像和分析。

實(shí)驗(yàn)一

高內(nèi)涵用于研究活體擬南芥全葉組織中膜運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)，40倍水浸式物鏡對(duì)擬南芥葉片進(jìn)行多層掃描，使用高內(nèi)涵分析軟件Harmony識(shí)別膜泡轉(zhuǎn)運(yùn)體，統(tǒng)計(jì)其數(shù)目、熒光強(qiáng)度、定位等參數(shù)[2]（如下圖）。

秀麗隱桿線蟲(chóng)

秀麗隱桿線蟲(chóng)在遺傳與發(fā)育生物學(xué)、行為與神經(jīng)生物學(xué)、衰老與壽命、人類(lèi)遺傳性疾病都有非常重要的貢獻(xiàn)，成蟲(chóng)體長(zhǎng)為1mm，通身透明。一般首先對(duì)秀麗線蟲(chóng)進(jìn)行麻醉，再進(jìn)行高內(nèi)涵拍攝。

實(shí)驗(yàn)一

分析不同藥物處理后秀麗線蟲(chóng)的數(shù)量和熒光強(qiáng)度，10倍物鏡拍攝多個(gè)視野，高內(nèi)涵分析軟件Harmony識(shí)別不同線蟲(chóng)，計(jì)數(shù)并分析線蟲(chóng)的熒光強(qiáng)度[3]（如下圖）。

小型藻類(lèi)

藻類(lèi)的生長(zhǎng)、繁殖與水體環(huán)境密切相關(guān)，常作為水體污染指示物，用于對(duì)水體的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)中。小型藻類(lèi)可放置于微孔板中，通過(guò)離心使其貼底，從而進(jìn)行高內(nèi)涵的拍攝，根據(jù)研究?jī)?nèi)容不同，一般采用20倍-63倍水浸式物鏡進(jìn)行成像。很多研究中通過(guò)對(duì)葉綠體的成像來(lái)判斷藻類(lèi)的狀態(tài)，成像過(guò)程需要設(shè)置針對(duì)葉綠素自發(fā)熒光特殊的檢測(cè)方法，即通過(guò)設(shè)定激發(fā)光和發(fā)射光，定義一個(gè)新的通道（excitation 460-490nm，emission 655-705nm）。

實(shí)驗(yàn)一

藻類(lèi)用于檢測(cè)水質(zhì)污染，本研究中，模擬微塑料水質(zhì)污染，檢驗(yàn)裸藻的生長(zhǎng)狀態(tài)，采用20倍水浸式物鏡(NA 1.0) 進(jìn)行成像，綠色為微塑料，紅色為葉綠素。（如下圖）

生長(zhǎng)狀態(tài)不好的裸藻葉綠素?zé)晒鈴?qiáng)度減弱，形態(tài)發(fā)生變化。（如下圖）

左圖為Harmony軟件識(shí)別裸藻細(xì)胞，中間圖為通過(guò)形態(tài)區(qū)分形態(tài)正常的梭狀裸藻（紅色）和因毒性變圓的裸藻（綠色），右圖為通過(guò)熒光強(qiáng)度區(qū)分死亡裸藻（綠色）和存活裸藻（紅色）。

參考文獻(xiàn)

2.High-throughput confocal imaging of intact live tissue enables quantification of membrane trafficking in Arabidopsis. Plant Physiol. 2010 Nov;154(3):1096-104. doi: 10.1104/pp.110.160325. Epub 2010 Sep 14.

3.Expanding the Biological Application of Fluorescent Benzothiadiazole Derivatives: A Phenotypic Screening Strategy for Anthelmintic Drug Discovery Using Caenorhabditis elegans. SLAS Discov. 2019 Aug;24(7):755-765. doi: 10.1177/2472555219851130. Epub 2019 Jun 10.

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