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請(qǐng)簡(jiǎn)述可用于蛋白質(zhì)分離純化的四種方法及其原理???

xvtcwdhr 2016-01-16 15:08:01 1146  瀏覽
  • 請(qǐng)簡(jiǎn)述可用于蛋白質(zhì)分離純化的四種方法及其原理???

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  • *baolai1962 2016-01-16 22:31:57
    樓主,方法很多,我就挑幾個(gè)比較有代表的吧 1.親和層析:利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結(jié)合作用而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。 原理:將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中,當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí),與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附而滯留在層析柱中。那些沒(méi)有親和力的蛋白質(zhì)由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質(zhì)分開(kāi),然后選用適當(dāng)?shù)南疵撘海?改變結(jié)合條件將被結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)。 http://baike.baidu.com/view/81754.htm 2.凝膠過(guò)濾:利用一定大小孔隙的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠作層析介質(zhì)(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等),根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小、形狀不同擴(kuò)散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同,因而通過(guò)層析柱的快慢不同而分離的一種層析法。 原理:凝膠過(guò)濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法,主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀,即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì),多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì),使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離。也叫做分子排阻層析(molecular-exclusion chromatography)。一種利用帶孔凝膠珠作基質(zhì),按照分子大小分離蛋白質(zhì)或其它分子混合物的層析技術(shù)。 一般是大分子先流出來(lái),小分子后流出來(lái)。 http://baike.baidu.com/view/81744.html 3.聚丙烯酰胺凝膠電泳:用于分離蛋白質(zhì)和寡糖核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝膠電泳是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式:(1)非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過(guò)程中,蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài),并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開(kāi)。 http://baike.baidu.com/view/320392.htm 4.鹽析:增加中性鹽濃度使蛋白質(zhì)、氣體、未帶電分子溶解度降低的現(xiàn)象。是蛋白質(zhì)分離純化中經(jīng)常使用的方法,Z常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉和氯化鈉等。 http://baike.baidu.com/view/210139.htm

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