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  夏娜VS大河 2015-11-15 00:00:00

  細(xì)胞培養(yǎng)物污染往往是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室Z常遇到的問(wèn)題，有時(shí)會(huì)帶來(lái)十分嚴(yán)重的后果.細(xì)胞培養(yǎng)污染物主要分為兩類，一類是化學(xué)污染物，例如：培養(yǎng)基、血清和水中的雜質(zhì)、內(nèi)毒素、增塑劑和去污劑，另一類是生物污染物，例如：細(xì)菌、霉菌、酵母、病毒、支原體以及其他細(xì)胞系的交叉污染.盡管無(wú)法徹底消除污染，但是可以通過(guò)充分了解污染源以及采用良好的無(wú)菌技術(shù)，降低污染發(fā)生的頻率和嚴(yán)重程度.　　細(xì)菌是一大類廣泛存在的單細(xì)胞微生物.細(xì)菌直徑一般為幾個(gè)微米，外形多樣，例如：球狀、桿狀和螺旋狀.細(xì)菌由于分布廣泛、生長(zhǎng)迅速以及體積大小的特點(diǎn)，與酵母和霉菌一起構(gòu)成了細(xì)胞培養(yǎng)中Z常遇到的生污染物.培養(yǎng)物被細(xì)菌污染后，幾天內(nèi)即可通過(guò)簡(jiǎn)單的肉眼觀察發(fā)現(xiàn)；被感染的培養(yǎng)物通常呈云霧狀 (即：渾濁狀)，有時(shí)表面會(huì)覆蓋一層薄膜.另外，經(jīng)常還會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的 pH 值突然降低.在低倍顯微鏡下可見(jiàn)，細(xì)菌為細(xì)胞之間移動(dòng)的微小顆粒，在高倍顯微鏡下觀察可以分辨出各個(gè)細(xì)菌的形狀.　　酵母是真菌界的一種單細(xì)胞真核微生物，大小從數(shù)微米 (多見(jiàn)) 到 40 微米 (罕見(jiàn)) 不等.與細(xì)菌污染類似，培養(yǎng)物被酵母污染后也會(huì)變得渾濁，特別是進(jìn)入污染后期時(shí).培養(yǎng)物被酵母污染后 pH 值變化極小，污染嚴(yán)重時(shí) pH 值才會(huì)升高.在顯微鏡下，酵母呈單個(gè)卵圓形或球形顆粒，有些會(huì)芽生出較小的顆粒.霉菌是真菌界的一種真核微生物，以被稱為菌絲的多細(xì)胞絲狀體形式生長(zhǎng).這些多細(xì)胞絲狀體構(gòu)成的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)含有遺傳性相同的細(xì)胞核，被稱為集落或者菌絲體.與酵母污染類似，霉菌污染初期培養(yǎng)物 pH 值會(huì)維持穩(wěn)定，污染加重后 pH 值會(huì)迅速升高，導(dǎo)致培養(yǎng)物渾濁.在顯微鏡下，菌絲體通常呈細(xì)束狀纖維，有時(shí)呈較為密集的孢子團(tuán)塊.許多種霉菌的孢子在休眠期均可耐受極端嚴(yán)峻、不利的環(huán)境，當(dāng)其遇到合適的生長(zhǎng)條件時(shí)才會(huì)被活化.　　病毒是一種微觀感染性物質(zhì)，利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行復(fù)制.病毒體積極小，因而要檢測(cè)培養(yǎng)物中有無(wú)病毒以及將其從細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室所用試劑中去除都十分困難.由于大多數(shù)病毒對(duì)宿主有非常嚴(yán)格的要求，因此一般不會(huì)對(duì)與其宿主物種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響.但是，使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)卻會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員造成嚴(yán)重的健康威脅，特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的是人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)胞時(shí).通過(guò)電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、ELISA 實(shí)驗(yàn)或者采用適當(dāng)病毒引物的 PCR 技術(shù)可以檢測(cè)出細(xì)胞培養(yǎng)物的病毒污染.　　支原體是一種沒(méi)有細(xì)胞壁的簡(jiǎn)單細(xì)菌，被認(rèn)為是能夠自我復(fù)制的Z小的生物.由于體積極小 (般小于 1 微米)，支原體的檢測(cè)十分困難，除非其達(dá)到極高的密度，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物變質(zhì)，在此之前往往沒(méi)有明顯的感染征象.有些生長(zhǎng)緩慢的支原體可能會(huì)在培養(yǎng)物中持續(xù)存在，而不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，但是這些支原體會(huì)改變培養(yǎng)體系中宿主細(xì)胞的行為和代謝.慢性支原體感染的可能表現(xiàn)包括：細(xì)胞增殖速度降低、飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集；但是，唯yi切實(shí)有效的檢測(cè)支原體污染的方法就是采用熒光染色 (例如：Hoechst 33258)、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學(xué)測(cè)定技術(shù)定期檢測(cè)培養(yǎng)物.

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