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  pp800331 2012-06-12 00:00:00

  目前研究Vc測定方法的報道較多，有關Vc的測定方法如熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、碘量法、光度分析法、化學發(fā)光法、電化學分析法及色譜法等，各種方法對實際樣品的測定均有滿意的效果。為了解國內(nèi)Vc含量測定方法及其應用方面的現(xiàn)狀及發(fā)展態(tài)勢。方法以"Vc或抗壞血酸和測定"為檢索詞對1994～2002年ZG期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)中的理工A、B和醫(yī)藥衛(wèi)生專輯進行篇名檢索，對所得有關Vc含量測定的文獻數(shù)據(jù)分別以年代、作者區(qū)域、載刊等級、樣品類型、測定方法等進行計量分析。結果核心期刊載刊文獻占文獻總量的45.06％，其中光度法占65.69％，電化法占18.63％，色譜法占12.75％；復雜被測樣品文獻占文獻總量的45.06％，其中光度法占60.92％，色譜法占19.54％，電化法占10.34％。結論目前國內(nèi)Vc含量測定仍以光度法為主流，但近年來色譜法，特別是HPLC法上升趨勢尤為明顯。 1.4.1　還原型Vc的測定 1.4.1.1 2，6-二氯酚靛酚法(2，6-D法) 其原理是利用2，6-二氯酚靛酚鈉鹽(C12H6O2NCl2Na)在酸性條件下將還原型抗壞血酸氧化成氧化型抗壞血酸，而其本身被還原成無色的衍生物；當還原型抗壞血酸全部被氧化時，過量的2，6-二氯靛酚鈉鹽呈現(xiàn)紅色，指示終點。該方法適于測定無色和淺色樣液或提取液中的AsA，無須特殊儀器，操作簡便、快速、準確[7]。 由于大多數(shù)果蔬和其制品有顏色，影響了終點的準確性。使用白陶土脫色[8]和加1，2-二氯乙烷[9]均不能得到理想的結果。作為對該法的改進，向一定量的AsA提取液中加入過量2，6-D與AsA作用后，剩余的2，6-D被二甲苯萃取、比色。樣液中AsA含量與二甲苯萃取液中淺紅色呈線性負相關。因花青素不溶于二甲苯，故可測定深色樣品[10]。應用流動注射分析(Flow Injection Analysis，簡稱FIA)，使該法的分析速度更快(120樣品/h)、靈敏(檢出限0.5 ug/ml)[11]。由于2，6-二氯靛酚和還原型抗壞血酸具有不同的電位(2，6-二氯靛酚的氧化還原電位是150mV，AsA的氧化還原電位是100 mV)，利用鉑和氯化銀復合電極測定其電位差的變化，可準確地測定樣液中AsA的含量。該法適宜色澤較深樣品中AsA的測定。溶解氧測定是利用極譜分析法原理進行的，其基本電路與電位滴定相似[12]。但樣品中同時存在的Fe2+、Sn2+、SO2、SO3、S2O32-等還原性雜質對本法則有干擾。扣除樣品中內(nèi)源還原性物質是對2，6-二氯靛酚法的一個改進[13]。 1.4.1.2 碘量法 其原理是基于AsA還原碘，自身氧化DAsA，而碘可由碘酸鉀還原碘化鉀來得到，當多余碘存在時，淀粉呈藍色，指示終點。反應式如下: KI+KIO3+6H→2K++3H2O+I2 (1-1) 還原型抗壞血酸+I2+2H+→氧化型抗壞血酸+2HI 該法簡便，但在測定深色樣品時，準確度欠佳[14]。 1.4.1.3 分光光度法 其原理是三價鐵離子被AsA還原二價鐵離子，后者與4，7-二苯基-1，10-菲咯啉(Bathophenanthroline， BP)生成紅色絡合物，其強度與樣品中AsA含量有化學計量關系。該法具有快速，靈敏的優(yōu)點；此外，樣品中DAsA還可被Dithiothreitol (DTT)還原為AsA，同時測定DAsA的含量[15]。 采用流動注射分析停留技術還可實現(xiàn)AsA與果蔬常用抗褐變劑L-半胱氨酸的同時測定[16]。 1.4.1.4 間接光度法 測定是在pH=5.0的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，抗壞血酸與鐵(III)和1，10-二氮雜菲溶液相互作用，形成橘紅色的Fe(II)-二氮雜菲絡合物，在波長510 nm處，吸光度與50mL抗壞血酸含量在10~200ug濃度內(nèi)呈線性關系。該法的特點是簡便快速，靈敏度高，干擾少[15]。 1.4.1.5 紫外光度法 其原理是還原型Vc(AsA)在紫外區(qū)243.8nm處有Z大吸收峰，以Cu2+作催化劑，利用溶解氧，將在243.8nm處有Z大吸收的AsA選擇性氧化為243.8nm處無Z大吸收峰的DAsA，進行本底校正，此法具有簡便、快速、準確的特點[17]。 1.4.1.6 光電比濁法 其原理是在酸性提取液中的AsA，可被亞硒酸氧化成DAsA，后者還原成元素硒，在一定條件下，其溶液中形成穩(wěn)定的懸濁液。當20~50mL浸出液中AsA含量在0~4mg時，濁度與AsA含量成正比。樣品中含有單寧、山梨酸、還原酮類不干擾測定。Fe2+、SO2在常溫下干擾不明顯，僅亞錫離子有干擾[18]。 1.4.1.7 GX液相色譜法(HPLC) 此法的優(yōu)點不僅操作簡便，分離時間短，對結構不穩(wěn)定的Vc尤為適合；缺點是所用儀器較為昂貴[20]。 1.4.1.8 極譜法 其原理是用溴水將AsA氧化成DAsA，而后者與鄰苯二胺縮合，可用于極譜定量測定Vc含量。脫氫型的還原糖、還原酸等對測定有干擾，可用氯仿萃取分離干擾物質后進行測定[18]。 1.4.2 Vc總量的測定 1.4.2.1 2，4-二硝基苯肼法 此法為測定Vc總量Z常用的方法。其原理是用活性炭把AsA氧化成DAsA，在pH5以上時，后者分子重排，其內(nèi)酯環(huán)裂開生成2，3-二酮古樂糖酸(DKG)，與硝基苯肼偶聯(lián)，生成紅色的脎，其呈色強度與DKG濃度成正比；如果再測定出DKG、DKG + DAsA的含量，則可計算出AsA、DAsA的含量。該法雖然測試過程長、須嚴格掌握測試條件，但其準確度和精密度均較高[20]。 1.4.2.2 熒光分光光度計法 其測定Vc的基本原理是:樣品中的AsA被氧化成DAsA，并與鄰苯二胺反應，生成熒光物質喹喔啉(Quinoxaline)衍生物，熒光強度與DAsA的濃度成正比，用熒光計測定熒光強度。該法具有較強的專一性，樣品中有些成分會造成干擾，可作空白試驗校正干擾物質所產(chǎn)生的熒光。此法的優(yōu)點是，生成熒光物質所需時間短，操作簡單，能在短時間內(nèi)測定Vc總量和分開測定AsA、DAsA的含量[19]。 1.4.2.3 過氧化物酶法 果蔬中的Vc在過氧化氫存在下，添加合成底物1，4-二氨基苯，通過過氧化物酶氧化顯色，作為Vc氧化終點，然后比色測定。該法的特點是不需要昂貴的儀器，適應性強，容易掌握，費用低，檢測快速，不需要預先純化所分析的試樣[20]。 這個是我論文的綜述部分，你看看吧！

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