2022年3月31日14：30，和元生物和瑞沃德聯(lián)合共同舉辦“和”學(xué)堂系列直播課——光遺傳/光纖記錄的技術(shù)操作功能元件的選擇及應(yīng)用，將為大家?guī)?lái)光遺傳/光纖記錄實(shí)驗(yàn)相關(guān)的病毒選擇、實(shí)操技巧等，快來(lái)鎖定本次直播間，輕松獲取更多相關(guān)干貨！

課程時(shí)間

2022年3月31日（周四） 14：30

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課程介紹

講師簡(jiǎn)介

3月31日，14：30

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2022 年 12 月 13 日，由復(fù)納科學(xué)儀器（上海）有限公司主辦的【材料失效分析線上研討會(huì)】如期舉行。由資 深的電鏡專家&離子研磨應(yīng)用專家朱俊文為大家分享了各類材料的失效案例：

• 金屬材料失效分析

• 高分子材料失效分析

• 無(wú)機(jī)非金屬材料失效分析

• 復(fù)合材料失效分析

• 涂層 / 鍍層失效分析

• PCB / PCBA 失效分析

• 電子元器件失效分析

此次線上研討會(huì)，吸引了各個(gè)材料相關(guān)領(lǐng)域研究人員的參加，為大家提供了一個(gè)材料失效分析的交流平臺(tái)。同時(shí)大家也提出了一些問(wèn)題進(jìn)行探討和交流，小編對(duì)于大家的疑問(wèn)也進(jìn)行了匯總，并邀請(qǐng)應(yīng)用專家進(jìn)行了答疑。   

Q1

對(duì)于高分子膜片，如 PET（聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯），如果希望研究其截面的微小缺陷（微米級(jí)），有什么好的辦法能夠保持其斷面的完整性，避免樣品處理對(duì)其實(shí)際結(jié)構(gòu)的影響？

A1

PET 基本上是不太好處理，我們以前做過(guò)的 PET 大部分是有一些層與層之間要疊加在一起。想要解決這個(gè)問(wèn)題最重要的就是樣品處理的方法，一般會(huì)比較建議用離子研磨儀來(lái)做樣品處理，這樣才有辦法對(duì)于 PET 等高分子的多層復(fù)合材料去把它的截面及之間摻雜的狀況看得清楚，同時(shí)也需要搭配一個(gè)性能比較優(yōu)異的掃描電鏡，這樣才可以看得到類似的高分子的結(jié)構(gòu)。

Q2

離子研磨儀是什么？

A2

離子研磨儀屬于一款制樣設(shè)備，可以想象成簡(jiǎn)易版的 FIB，利用離子槍給做樣品表面的清潔或者切割，這樣可以使得樣品的橫截面裸露出來(lái)，重 點(diǎn)不會(huì)有任何熱、應(yīng)力以及破環(huán)問(wèn)題。切割尺寸接近于原子狀態(tài)，所以研磨出來(lái)的效果可以控制在納米的程度。

Q3

離子研磨表面怎么處理？

A3

離子研磨就是用離子束以很低的角度去轟擊樣品表面，類似我們?cè)谧瞿竟r(shí)候，用刨刀去切割，使木材的木紋顯露出來(lái)，而如果我們用鋸子去鋸木頭的時(shí)候，就看不到更加細(xì)節(jié)的截面。離子束跟一般我們做傳統(tǒng)的晶相研磨還是有很大的差異，離子研磨性價(jià)比高，但需要很專業(yè)的處理經(jīng)驗(yàn)。

Q4

目前離子研磨的寬度范圍有大于 1cm 嗎？最 大樣品尺寸有多少？

A4

目前離子研磨能夠處理的樣品寬度可以做到厘米等級(jí)，最 大的樣品尺寸可以做到 5cm，樣品寬度可以做到 1.5cm。如果是對(duì)樣品進(jìn)行切割，可以做到接近于厘米的等級(jí)，大概可以做到幾個(gè)毫米的寬度。

Q5

離子研磨 (CP) 與聚焦離子束 (FIB) 分別重 點(diǎn)應(yīng)用于哪些類材料的處理？

A5

總體而言，各有利弊。聚焦離子束有很多種類，一般而言 FIB 主要做精確的定位切割，對(duì)于技術(shù)要求很高，而且產(chǎn)品的價(jià)位也很高，目前大概都百萬(wàn)美金左右。而離子研磨就便宜很多，處理面積也比較大，唯 一的缺點(diǎn)就是無(wú)法做到納米等級(jí)。如果定位要做到微米等級(jí)，那么一般還是建議使用離子研磨。離子研磨處理樣品會(huì)比較快，可以制作截面、或表面拋光，應(yīng)用的范圍比較廣泛，操作也比較簡(jiǎn)單，很容易做失效分析。而如果是 FIB 的話，在設(shè)備投資和人員培訓(xùn)上要求都很高。

Q6

為什么有時(shí)候在離子束（FIB）成像下能看到的細(xì)節(jié)，譬如臟污，在電子束（SEM）成像卻看不到？

A6

離子束的成像跟電子束的成像完全不一樣。因?yàn)橐粋€(gè)是電子源一個(gè)是離子源，捕捉的信號(hào)也稍微不太一樣?；旧想x子束的顆粒是比較大的，通常解析度會(huì)比較差，結(jié)晶相的選擇性也是非常非常高的。電子束成像的時(shí)候，解析度會(huì)很高，但是對(duì)于 ECCI 像會(huì)比較差。

Q7

有鋁銅復(fù)合片，復(fù)合面鋁銅電腐蝕類的 SEM 效果嗎？

A7

我們之前做過(guò)異金屬結(jié)合的，通常我們會(huì)去把它切開(kāi)，直接看結(jié)合面的情況，通常都會(huì)出現(xiàn)擴(kuò)散，比如銅會(huì)擴(kuò)散到鋁層，鋁會(huì)擴(kuò)散到銅層。那一般我們會(huì)看這個(gè)鍵合線，通常這個(gè)鍵合線的界面不是很清楚。

Q8

鋁球周圍一圈氧化物分布，Mapping 通常是一個(gè)小范圍，怎樣看一圈呢？

A8

想要看到一個(gè)圈，那么我們必須把樣品切開(kāi)?，F(xiàn)在很多粉體的研究，喜歡做表面的改性研究。為了進(jìn)一步研究改性的狀態(tài)，此時(shí)我們需要用離子研磨去把它直接切開(kāi)，去做橫截面的觀察，這樣就可以很清楚的看到粉體表面所做的鈍化層、氧化成或者一些其他的金屬層的詳細(xì)情況。

Q9

通過(guò) SEM 觀察薄膜的截面，對(duì)硅片樣品要如何預(yù)處理？

A9

一般情況，這些硅片都會(huì)有些填料，想要破片沒(méi)有那么容易，所以大部分也要利用離子研磨做直接的切割，這樣最快而且效果也最 好。

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你在進(jìn)行光纖記錄實(shí)驗(yàn)時(shí)，是否有如下煩腦：

◆ 記錄好的數(shù)據(jù)看著很雜亂，不知如何整理？

◆ 數(shù)據(jù)處理包含哪些步驟？

◆ 如何確定數(shù)據(jù)分析的baseline

◆ ΔF/F指的是什么？

◆ 信號(hào)出現(xiàn)了“漂白效應(yīng)”怎么辦？

無(wú)需困惑，對(duì)以上問(wèn)題，我們最近總結(jié)了一份實(shí)操步驟，這份操作指南可幫你迅速上手?jǐn)?shù)據(jù)處理

常見(jiàn)光纖記錄數(shù)據(jù)處理過(guò)程

讓我們來(lái)看一張?jiān)紨?shù)據(jù)案例圖，下圖顯示數(shù)據(jù)整體波動(dòng)過(guò)于密集，其中410nm對(duì)照通道數(shù)據(jù)不夠穩(wěn)定；對(duì)應(yīng)事件標(biāo)記（線條標(biāo)記處）的peak也不是很突出，針對(duì)這種數(shù)據(jù)情況，我們立刻開(kāi)始數(shù)據(jù)處理吧。

（▲本文實(shí)操分析案例圖）

（*以下分析過(guò)程以瑞沃德雙色多通道光纖記錄系統(tǒng)操作界面為主要示例）

01.第 一步

我們將數(shù)據(jù)根據(jù)需要分析的時(shí)間段進(jìn)行裁剪，此步驟也可跳過(guò)。

02.第二步

數(shù)據(jù)預(yù)處理。常見(jiàn)數(shù)據(jù)預(yù)處理過(guò)程包含平滑處理，基線矯正，運(yùn)動(dòng)矯正。平滑處理可以將數(shù)據(jù)中的過(guò)多雜信號(hào)去除，ZD限度的突出目標(biāo)peak。如下圖所示，原始數(shù)據(jù)經(jīng)平滑處理后目標(biāo)peak更加突出，更容易觀察分析。

基線矯正多數(shù)針對(duì)的是熒光信號(hào)因長(zhǎng)時(shí)間記錄導(dǎo)致漂白信號(hào)逐步下降，或者光纖的自發(fā)熒光在長(zhǎng)期記錄下逐步被漂白基線逐步下降等情況。此情形的數(shù)據(jù)因?yàn)檎w呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，不利于后續(xù)數(shù)據(jù)作圖分析，所以需要進(jìn)行基線矯正。如下圖所示，基線矯正可以直接將下降趨勢(shì)的數(shù)據(jù)通過(guò)算法擬合后恢復(fù)成平整狀態(tài)。

運(yùn)動(dòng)矯正用于采用410nm對(duì)照通道的數(shù)據(jù)，410nm數(shù)據(jù)可以用于反應(yīng)背景噪音信號(hào)，運(yùn)動(dòng)矯正即將410nm數(shù)據(jù)與470nm數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，通過(guò)算法從470數(shù)據(jù)中去除410nm數(shù)據(jù)的波動(dòng)，得到真實(shí)的熒光數(shù)據(jù)。當(dāng)不選擇運(yùn)動(dòng)矯正功能或者實(shí)驗(yàn)未記錄410nm的數(shù)據(jù)，可以選擇一定時(shí)間范圍內(nèi)的信號(hào)作為對(duì)照進(jìn)行算法處理。

03.第三步

數(shù)據(jù)預(yù)處理后即可得到整體數(shù)據(jù)的ΔF/F或者Z-score，用于反應(yīng)數(shù)據(jù)的波動(dòng)幅度。二者采用了不同的算法，數(shù)據(jù)的呈現(xiàn)結(jié)果略有不同。

ΔF/F=（F-F1）/F0：

（1）當(dāng)數(shù)據(jù)進(jìn)行基線矯正后：

◆ 若對(duì)照選擇為410，F(xiàn)1=fitted410，F(xiàn)0=median（raw data）

◆ 若對(duì)照選擇非410：F1為基線矯正曲線值，F(xiàn)0=median（Baseline）

（2）當(dāng)數(shù)據(jù)未進(jìn)行基線矯正：

◆ 若數(shù)據(jù)對(duì)照為410，則F1=F0=fitted410，

◆ 若數(shù)據(jù)對(duì)照非410，則F1=F0=median（Baseline）

Z-score：

使用標(biāo)準(zhǔn)分?jǐn)?shù)計(jì)算方式，即z-score=（x-mean）/std，x=ΔF/F，mean為ΔF/F的均值，std為相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)差。

04.第四步

將熒光數(shù)據(jù)與動(dòng)物行為數(shù)據(jù)同步對(duì)比，選擇事件標(biāo)記或者增加事件標(biāo)記。

05.第五步

選擇事件分析的時(shí)間區(qū)間和baseline區(qū)間，用于事件相關(guān)信號(hào)分析作圖。

06.第六步

將不同組的數(shù)據(jù)進(jìn)行組間對(duì)比，即可分析不同處理因素下熒光數(shù)據(jù)的差異。

通過(guò)以上步驟，原始的熒光數(shù)據(jù)就可以直接出圖啦。

空軍軍醫(yī)大學(xué)光纖記錄系統(tǒng)培訓(xùn)現(xiàn)場(chǎng)

（▲瑞沃德雙色多通道光纖記錄系統(tǒng)）（▲瑞沃德雙色多通道光纖記錄系統(tǒng)）

福利時(shí)間

如果你想要體驗(yàn)操作

同款光纖記錄系統(tǒng)開(kāi)展實(shí)驗(yàn)

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來(lái)不及解釋了，快領(lǐng)！

       5月8日，在體電生理技術(shù)線上課程準(zhǔn)時(shí)開(kāi)講！作為神經(jīng)環(huán)路研究系列課程的Z后一期，我們特準(zhǔn)備了全額抵扣券，想聽(tīng)課的朋友們不要錯(cuò)過(guò)，限量200張，趕快來(lái)領(lǐng)?。ㄇ那恼f(shuō)：領(lǐng)取優(yōu)惠券不僅可免費(fèi)觀看直播，后續(xù)再看回放也是免費(fèi)的哦?。?/span>

領(lǐng)取方法

       在我們微信公眾號(hào)回復(fù)“優(yōu)惠券”——點(diǎn)擊領(lǐng)取——去使用——兌換課程——進(jìn)入直播間，坐等開(kāi)講！

       想觀看神經(jīng)環(huán)路前三期課程的朋友們，可以在公眾號(hào)回復(fù)關(guān)鍵字獲取鏈接：diyi期請(qǐng)回復(fù)“神經(jīng)環(huán)路示蹤”；第二期請(qǐng)回復(fù)“光遺傳與化學(xué)遺傳”；第三期請(qǐng)回復(fù)“光纖記錄與單光子鈣成像”。

關(guān)于在體電生理技術(shù)

       電生理是一種直接測(cè)量神經(jīng)元功能、檢測(cè)病理功能異常、分析ZL或疾病模型中自發(fā)和誘發(fā)電信號(hào)變化的方法。突觸傳遞的上調(diào)或下調(diào)可以闡明許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的細(xì)胞和網(wǎng)絡(luò)機(jī)制。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)是一種離體的記錄方法，主要是針對(duì)離體培養(yǎng)的細(xì)胞和腦片進(jìn)行記錄，與動(dòng)物自由活動(dòng)的本來(lái)狀態(tài)還是有很大區(qū)別的，尤其是針對(duì)動(dòng)物在某種活動(dòng)狀態(tài)下神經(jīng)活動(dòng)的研究。

       在體多通道記錄（in-vivo multichannel recording）是在活體狀態(tài)下研究動(dòng)物神經(jīng)活動(dòng)的一種細(xì)胞外記錄方法。將電極陣列植入動(dòng)物的大腦某皮層或區(qū)域，電極后續(xù)接入高靈敏度的放大器及記錄系統(tǒng)，將記錄到的模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)，在配套的記錄軟件上便可以觀察到放電信號(hào)。這對(duì)于研究動(dòng)物自由活動(dòng)狀態(tài)下的神經(jīng)調(diào)控機(jī)制非常重要。

Ripple嚙齒類動(dòng)物在體多通道電生理實(shí)驗(yàn)解決方案

課程安排

5月8日15:00-16:30準(zhǔn)時(shí)開(kāi)講

·在體電生理記錄的基本分類

·多通道微絲電極陣列的特點(diǎn)

·電極陣列的制作以及手術(shù)植入

·數(shù)據(jù)分析概述

講師介紹

作為系列課程Z后一期

我們特準(zhǔn)備了雙重福利給大家

福利來(lái)襲

邀請(qǐng)有禮

       報(bào)名進(jìn)入直播間后，分享課程，邀請(qǐng)好友聽(tīng)課，即有機(jī)會(huì)獲得專屬禮品！

       ?排行榜前3名，可獲得華為榮耀耳機(jī)。

       ?排行榜第4~10名，可獲得小米藍(lán)牙音箱。

       ?大家可在直播間的邀請(qǐng)排行榜上，查看邀請(qǐng)排名！

聽(tīng)課有獎(jiǎng)

       此次我們?cè)谥辈ラg設(shè)置了神秘獎(jiǎng)品！5月8日15:00-16:30，全程參與直播即有機(jī)會(huì)領(lǐng)?。?/span>

記住了，朋友們

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5月8日15:00-16:30

我們直播間不見(jiàn)不散

來(lái)看看這是實(shí)驗(yàn)中的你嗎？

抑郁造模實(shí)驗(yàn)中，小鼠總是傷痕累累達(dá)不到使用標(biāo)準(zhǔn)，上網(wǎng)也查不到原因，太心累了

到信號(hào)采集這步，突然發(fā)現(xiàn)小鼠的電極掉了，數(shù)據(jù)采集不到，去網(wǎng)上又找不到完整的資料

迷宮類行為學(xué)實(shí)驗(yàn)種類太多，找資料花了好長(zhǎng)時(shí)間，要是所有的迷宮實(shí)驗(yàn)的資料在一起就好了......

查找科研資源如大海撈針，耗時(shí)耗力

效率提不上去，科研工作都耽誤了

自從“沃”的實(shí)驗(yàn) | 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程

直播課開(kāi)播后

小沃也收到全國(guó)各地科研人

為助力科研，解決大家找資料難的困境

01實(shí)用性強(qiáng)

涵蓋科研基礎(chǔ)知識(shí)、實(shí)驗(yàn)技能、經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

02形式多樣

囊括視頻課程、實(shí)驗(yàn)手冊(cè)、SOP流程圖……

03內(nèi)容豐富，持續(xù)更新

“沃”的實(shí)驗(yàn)線上學(xué)習(xí)平臺(tái)將陸續(xù)上線，包含常見(jiàn)疾病動(dòng)物模型、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)操作、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為評(píng)估、神經(jīng)信號(hào)研究、細(xì)胞與分子研究……陪你走過(guò)整個(gè)學(xué)期，一站式助你提升科研技能

04操作便捷觀看操作方便，可以隨時(shí)觀看學(xué)習(xí)

在這里你可以持續(xù)獲取

最實(shí)用的生命科學(xué)研究資料

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“沃”的實(shí)驗(yàn)科研資源分享平臺(tái)首批內(nèi)容上線，我們?yōu)榇蠹曳窒?b>常見(jiàn)疾病動(dòng)物模型——構(gòu)建方法的視頻課程+3大實(shí)驗(yàn)手冊(cè)+2大實(shí)驗(yàn)解決方案流程圖（SOP），涵蓋8大動(dòng)物模型構(gòu)建課程，4位老師全面講解每個(gè)造模的背景、方法等內(nèi)容，全面匯總造模技術(shù)，助力大家系統(tǒng)性提升科研能力。

• 第一課：阿爾茨海默癥模型

• 第二課：帕金森病模型

• 第三課：腦缺血模型

• 第四課：抑郁模型

• 第五課：焦慮模型

• 第六課：創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型

• 第七課：自閉癥譜系障礙模型

• 第八課：成癮模型

• 代謝類疾病研究手術(shù)與造模手冊(cè)大全

• 呼吸系統(tǒng)疾病研究手術(shù)與造模手冊(cè)大全

• 神經(jīng)系統(tǒng)研究手術(shù)與造模手冊(cè)大全

• 動(dòng)物麻醉解決方案

• 給藥手術(shù)解決方案

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下期內(nèi)容預(yù)告：

常見(jiàn)疾病動(dòng)物模型——構(gòu)建方法系列2

直播時(shí)間：12月18日  上午9:30

期待您的到來(lái)！

阻抗與胞外場(chǎng)電位 (EFP)記錄

阻抗和胞外場(chǎng)電位記錄是非侵入性的“非標(biāo)記”方法，非常適用于分析可興奮的，完整的培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞收縮和動(dòng)作電位，例如，心肌細(xì)胞和神經(jīng)元。

胞外場(chǎng)電位是細(xì)胞產(chǎn)生的電位，例如神經(jīng)或肌肉細(xì)胞的細(xì)胞外。 電生理學(xué)研究使用細(xì)胞外微電極研究這些電位。 在這些實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞外場(chǎng)電位被檢測(cè)為電勢(shì)。對(duì)于個(gè)體細(xì)胞，細(xì)胞外電位的時(shí)間過(guò)程理論上與跨膜電流成反比。

電阻抗是在施加電壓時(shí)對(duì)電流的電阻的測(cè)量，具有幅度和相位。換句話說(shuō)，它是在特定頻率ω下單個(gè)復(fù)指數(shù)的電壓 - 電流比?？梢砸詺W姆直接測(cè)量或顯示阻抗。
實(shí)際上：接種到電阻抗芯片或板上的細(xì)胞覆蓋電極，從而產(chǎn)生更高的可檢測(cè)電阻。阻抗測(cè)定可以在一個(gè)頻率或一定頻率范圍內(nèi)進(jìn)行。取決于施加的頻率ω，電子穿過(guò)或穿過(guò)細(xì)胞，因此可以檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)和覆蓋率的不同參數(shù)。電阻抗測(cè)量適合于在長(zhǎng)期研究中應(yīng)用毒理學(xué)物質(zhì)或影響細(xì)胞-細(xì)胞或者細(xì)胞-基質(zhì)接觸的物質(zhì)時(shí)檢測(cè)心肌細(xì)胞的收縮運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)以及細(xì)胞形態(tài)的變化。

光遺傳學(xué)：光刺激觸發(fā)細(xì)胞中動(dòng)作電位

光遺傳學(xué)是一種可用于控制可興奮細(xì)胞的新技術(shù)：可在表達(dá)特定光敏離子通道的細(xì)胞上用具有毫秒級(jí)時(shí)間精度的光脈沖對(duì)細(xì)胞進(jìn)行去極化，從而準(zhǔn)確地觸發(fā)動(dòng)作的電勢(shì)。

光遺傳學(xué)在心臟安全性研究方面提供了巨大潛力：影響心肌細(xì)胞收縮的化合物可能以依賴于使用的方式影響離子通道和受體，從而對(duì)不同的搏動(dòng)率產(chǎn)生不同的影響。利用這種技術(shù)，可以簡(jiǎn)單地利用光脈沖在不同跳動(dòng)范圍內(nèi)使心肌細(xì)胞起搏，以發(fā)現(xiàn)毒素的使用依賴效應(yīng)。在iPSC分化的心肌細(xì)胞中，光遺傳學(xué)致動(dòng)器 通道視紫紅質(zhì)已被證明非常適合并被接受為模型。用于通道視紫紅質(zhì)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑盒可從iPSC細(xì)胞提供者獲得，例如NCardia，用于在心臟安全性研究中使用光遺傳學(xué)。

Nanion光遺傳設(shè)備

   CardioExcyte 96 是一種用于研究iPSC分化的心肌細(xì)胞的阻抗和胞外場(chǎng)電位的裝置。 專門開(kāi)發(fā)的光遺傳蓋“SOL”能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞的光遺傳學(xué)起搏。

瑞沃德一直致力于為國(guó)家科研領(lǐng)域提供專業(yè)的科研設(shè)備解決方案，打造專業(yè)的科研市場(chǎng)民族品牌。此次為回饋新老客戶，現(xiàn)推出科研手術(shù)器械限時(shí)滿贈(zèng)活動(dòng)，多買多送。在指定渠道選購(gòu)瑞沃德手術(shù)器械即有機(jī)會(huì)獲得以下禮品：

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活動(dòng)時(shí)間：2020.4.20-2020.6.19

選購(gòu)渠道：

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3.銳競(jìng)采購(gòu)平臺(tái)，選購(gòu)網(wǎng)址：

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4.喀斯瑪商城，選購(gòu)網(wǎng)址：

https://a0000353.casmart.com.cn/shop/products?supplierCateId=12551

5上海神經(jīng)所：

http://supplies.ion.ac.cn/#/search?search=%E6%89%8B%E6%9C%AF%E5%99%A8%E6%A2%B0

6.聯(lián)系對(duì)應(yīng)區(qū)域銷售選購(gòu)

溫馨提醒：

1.此次活動(dòng)終端客戶參與;參與此次活動(dòng)的產(chǎn)品瑞沃德品牌手術(shù)器械，瑞沃德代理的FST的手術(shù)器械不參與此次活動(dòng)。

2.滿足活動(dòng)要求的訂單，瑞沃德會(huì)將禮品隨貨物一起寄送，并作相應(yīng)的客戶回訪，您有任何問(wèn)題都可反饋，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。

如有問(wèn)題，可咨詢：

電話：400-886-1127  (+86)-755-86111286（總機(jī)）-8207（分機(jī)）/ 18819268457（許經(jīng)理）/19928724365  （姚經(jīng)理）

郵箱：market@rwdmall.com

QQ：3003419690

微信號(hào)：rwdlsco（或搜索“動(dòng)物生命科學(xué)”）

此次活動(dòng)Z終解釋權(quán)歸瑞沃德生命科技所有

7月13日-24日精彩課程預(yù)告

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煮粥煲湯、養(yǎng)眼養(yǎng)身

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實(shí)驗(yàn)動(dòng)物該怎么選擇？

不同腦缺血模型，弄不清對(duì)應(yīng)構(gòu)建方法？

常用的血流監(jiān)測(cè)技術(shù)，你都掌握了嗎？

「全線賦能·“沃”的實(shí)驗(yàn)」之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程

直播第五期為大家聚焦

《腦缺血模型構(gòu)建及檢測(cè)》

從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、不同模型的分類

各個(gè)模型的構(gòu)建方法到血流監(jiān)測(cè)技術(shù)

兩位老師將進(jìn)行綜合詳細(xì)的講解

全面助力你的科研實(shí)驗(yàn)研究

直播時(shí)間

6月21日（周二）19：00

報(bào)名方式

識(shí)別上方二維碼，立即免費(fèi)報(bào)名

主題：腦缺血模型構(gòu)建

• 腦缺血研究背景

• 腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ蜆?gòu)建

• 腦缺血模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)儀器

講師：孫紹強(qiáng)

瑞沃德行業(yè)解決方案專家，在膜片鉗/鈣成像/干細(xì)胞誘導(dǎo)方面有著豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，曾參與多項(xiàng)重大研發(fā)及自然科學(xué)基金項(xiàng)目，曾在Cell Stem Cell 上發(fā)表論文，專注于神經(jīng)疾病，腦缺血及神經(jīng)退行性疾病模型制備和機(jī)制研究，已為上百家客戶提供專業(yè)的神經(jīng)疾病整體解決方案。

主題：腦卒中研究中的血流監(jiān)測(cè)技術(shù)

• 激光多普勒

• 激光散斑

• 超聲多普勒

• 核磁共振成像

• 雙光子顯微鏡

講師：殷維君

瑞沃德微循環(huán)監(jiān)測(cè)解決方案專家，在生理信號(hào)監(jiān)測(cè)和血流血氧成像領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，主導(dǎo)動(dòng)物活體成像解決方案的設(shè)計(jì)及優(yōu)化，專注于臨床及臨床前微循環(huán)監(jiān)測(cè)解決方案的構(gòu)建。

上期直播間互動(dòng)問(wèn)題

這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/b>

Q1：組織剪切的大小有沒(méi)有具體要求，腫瘤組織一般2-4mm可以嗎？

A1：這要根據(jù)組織類型去判斷，一般會(huì)預(yù)處理成10mm左右的組織塊，太大可能會(huì)導(dǎo)致處理不完全，太小可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加，甚至導(dǎo)致樣本變稠等。

Q2：細(xì)胞活率80%就可以了嗎，看到一些資料寫的都要90%以上。

A2：這個(gè)需要根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)的需求靈活調(diào)整，如果樣本存活率不能達(dá)到要求的話，除了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件以外，還可以通過(guò)一些死細(xì)胞去除的試劑來(lái)優(yōu)化已獲得的樣本。

Q3：低溫解離細(xì)胞與常規(guī)的37度制備單細(xì)胞優(yōu)勢(shì)分別是什么？區(qū)別是什么？

A3：37℃條件下進(jìn)行組織解離，由于細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活躍，因此解離過(guò)程中基因表達(dá)可能會(huì)發(fā)生改變，可能會(huì)干擾應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)，所以在進(jìn)行snRNA-seq時(shí)可以通過(guò)使用冷活性酶釋放細(xì)胞核，同時(shí)一些熱敏感或者脆弱的細(xì)胞更適合采用低溫解離的分離方式，但是低溫條件對(duì)一些質(zhì)密難解離的組織的處理效率可能會(huì)降低。

另外，溫度對(duì)不同細(xì)胞種類也有一定影響，比如在進(jìn)行腦組織解離時(shí)，熱解離可能會(huì)影響神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的獲取，但是會(huì)大量富集小膠質(zhì)細(xì)胞，所以在進(jìn)行組織解離時(shí)，根據(jù)獲得目的細(xì)胞的需求要靈活調(diào)整解離方案。

Q4：裂紅處理有什么注意事項(xiàng)嗎？

A4：如果直徑6-8μm的細(xì)胞占比較高，且有核率偏低，這表明紅細(xì)胞含量可能較多，需要進(jìn)行紅細(xì)胞裂解，如果紅細(xì)胞裂解依然不干凈，不建議增大裂解體系，建議適當(dāng)延長(zhǎng)裂紅時(shí)間，或適當(dāng)增加裂紅次數(shù)。

Q5：流式染色時(shí)間及溫度如何選擇？

A5：染色本身取決于抗體抗原之間的結(jié)合能力，染色時(shí)間和溫度，受限于抗體濃度，一般根據(jù)選擇抗體的說(shuō)明書推薦的濃度和孵育時(shí)間、溫度選擇。我的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)：當(dāng)不清楚說(shuō)明書的情況，我會(huì)選擇室溫染色12-15min（取決于抗體濃度微調(diào)），或4度冰上30min。注意染色時(shí)間盡量不要讓細(xì)胞破損，否則死細(xì)胞碎片會(huì)影響流式結(jié)果。此外細(xì)胞消化完畢后應(yīng)該盡快染色處理，特別是一些凋亡染色、胞內(nèi)酶染色為保持細(xì)胞物質(zhì)活性，應(yīng)盡快染色。

Q6：請(qǐng)問(wèn)流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中單抗進(jìn)行熒光需要什么樣的對(duì)照？

A6：關(guān)于對(duì)照設(shè)置，這個(gè)比較復(fù)雜，一般我們是選擇同型對(duì)照作為陰性對(duì)照組，得到的結(jié)果往往是比較好的。所謂的同型對(duì)照就是同種屬同亞型、相同熒光標(biāo)記物、使用劑量和濃度相同，且屬于非特異性結(jié)合的抗體為同型對(duì)照組。通常用來(lái)消除抗體與抗原的非特異性結(jié)合造成的背景染色。 

還有一類就是最常見(jiàn)的純陰性對(duì)照，檢測(cè)細(xì)胞群不進(jìn)行任何抗體處理，直接進(jìn)行流式檢測(cè)，這就是簡(jiǎn)單消除細(xì)胞和溶劑本身的影響，這種方法的好處是節(jié)約抗體，畢竟抗體很貴。

Q7：如何減少補(bǔ)償?shù)母蓴_？

A7：補(bǔ)償干擾往往是多激光的流式儀器才會(huì)發(fā)生一定干擾情況，此時(shí)，可以根據(jù)抗體公司提供的染料搭配方案選擇比較好，也就是發(fā)射光譜的波長(zhǎng)峰盡量不重疊的染料，這樣補(bǔ)償干擾會(huì)盡量消除。因此，往往需要查看染料的波長(zhǎng)范圍，此外，對(duì)于4色以上的多色標(biāo)記情況，一般不常見(jiàn)，此時(shí)往往染料的波長(zhǎng)范圍難以避免的重疊，這時(shí)候，推薦使用抗體公司推薦的配色方案，盡量避免發(fā)射光譜的重疊。此外很多流式儀器配套軟件都帶一定算法對(duì)補(bǔ)償進(jìn)行修正，可以適當(dāng)修正這個(gè)影響。

Q8：細(xì)胞自發(fā)熒光如何解決？

A8：細(xì)胞自發(fā)熒光往往是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)帶有熒光，植物細(xì)胞因?yàn)槿~綠素原因會(huì)自帶一定熒光，然后一些藥物處理下，藥物本身帶有發(fā)色基團(tuán)，也可能自熒光，此時(shí)，純陰性對(duì)照的設(shè)置可以補(bǔ)償一定的情況。然后就是染料的選擇情況，染料熒光波長(zhǎng)范圍避免與細(xì)胞自發(fā)熒光的波長(zhǎng)的重疊，這樣會(huì)比較好一些。我之前做藥物的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)候，考慮到藥物的情況，就沒(méi)有使用常見(jiàn)的凋亡檢測(cè)的Annexin V染料，而改用Annexin V-APC 。盡量設(shè)置純陰性對(duì)照、有條件做下同型對(duì)照，往往可以在數(shù)據(jù)處理時(shí)候適當(dāng)減少部分因素的影響。這樣流式的結(jié)果會(huì)更好。

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