近年來，隨著法規(guī)的推動(dòng)，制藥人士對(duì)于分析方法生命周期的關(guān)注度越來越高。USP通則<1220>分析方法生命周期已于2022年5月1日生效，ICH Q14<分析方法開發(fā)>也已結(jié)束第三階段公開征求意見階段。ICH Q14指出，在分析方法開發(fā)時(shí)，可以使用基礎(chǔ)（即傳統(tǒng)型）方式或加強(qiáng)型方式。本文案例即使用加強(qiáng)型方式 — Fusion QbD軟件輔助生物藥分析方法開發(fā)。

摘要 

生物藥分析部門花費(fèi)了大量時(shí)間開發(fā)耐用性好的分析方法，以保證原料藥和成品是純的，穩(wěn)定的。為了快速將產(chǎn)品應(yīng)用到患者身上，研發(fā)組織不斷地加快方法開發(fā)流程。提高分析方法開發(fā)效率的一個(gè)方法就是使用自動(dòng)篩選和自動(dòng)方法優(yōu)化工具。

Fusion QbD軟件可支持色譜不同分離模式的自動(dòng)篩選流程。Fusion允許客戶輸入與分離模式相關(guān)的幾個(gè)因素進(jìn)行研究。然后基于統(tǒng)計(jì)學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)以評(píng)估這些因素的影響。設(shè)計(jì)好的DoE實(shí)驗(yàn)可導(dǎo)入Empower，并自動(dòng)在Empower中創(chuàng)建儀器方法和樣品組，減少方法開發(fā)過程中大量的人工工作量。Empower運(yùn)行樣品后，結(jié)果再一鍵導(dǎo)入Fusion中做建模分析，評(píng)估各色譜參數(shù)。

Fusion-Empower工作流程 

在Fusion QbD中生成用戶自定義考察因素的DoE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。Fusion將儀器方法寫入到Empower中，處理后的樣品結(jié)果再導(dǎo)入Fusion中分析，得到更優(yōu)的色譜條件。

圖1.  Fusion Empower工作流程

案例1- WCX模式方法開發(fā)

• Fusion QbD自動(dòng)篩選和自動(dòng)優(yōu)化；

• 通過Fusion產(chǎn)生69個(gè)儀器方法和樣品組，并導(dǎo)入到Empower3； 

• 5個(gè)小時(shí)人工，120小時(shí)儀器運(yùn)行時(shí)間；

• DoE實(shí)驗(yàn)考察因素：pH、梯度時(shí)間、流動(dòng)相組成、有機(jī)添加物、鹽濃度和柱溫；

• QbD開發(fā)的分析方法結(jié)果顯示：主峰峰形改善，酸性系列峰和堿性系列峰的分離度都提高了；

• 圖2為QbD開發(fā)好的分析方法和之前傳統(tǒng)方式開發(fā)了5個(gè)月的方法色譜對(duì)比圖：

圖2. WCX 液相分離模式（A. 傳統(tǒng)方式開發(fā)的分析方法色譜圖 ；B. Fusion QbD開發(fā)的色譜圖，顯示酸性系列峰和堿性系列峰的分離度都得到提高）。

案例1 - 疊加圖

將Empower結(jié)果導(dǎo)入到Fusion中，產(chǎn)生WCX HPLC疊加圖?；诳蛻舳x的方法性能指標(biāo)，白色區(qū)域是可接受性能區(qū)域，有顏色的區(qū)域是不滿足性能要求的區(qū)域。

圖3. 疊加圖顯示白色區(qū)域?yàn)闈M足性能要求的可接受性能區(qū)域（左圖：鹽濃度vs梯度時(shí)間。右圖：鹽濃度vs. pH）。

案例2 - HILIC方法開發(fā) — Fusion QbD篩選

• Fusion QbD產(chǎn)生的38個(gè)儀器方法導(dǎo)入到Empower；

• 2個(gè)小時(shí)人工，15個(gè)小時(shí)儀器運(yùn)行時(shí)間；

• DoE實(shí)驗(yàn)考察的因素：pH、柱溫、梯度時(shí)間；

• 得到的分析方法顯示蛋白1和蛋白2的分離度提高，兩個(gè)蛋白的拖尾因子降低。

圖4. HILIC液相分離模式（A. 傳統(tǒng)方法開發(fā)的分析方法色譜圖；B. Fusion QbD開發(fā)的分析方法色譜圖，顯示蛋白1和蛋白2的分離度提高，拖尾因子降低）。

 結(jié)論 

Fusion QbD成功用于生物藥的方法開發(fā)，首先生成HILIC和陽離子交換模式的DoE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。然后使用Fusion中的導(dǎo)出功能，在Empower中自動(dòng)創(chuàng)建DoE設(shè)計(jì)好的儀器方法和樣品組。通過自動(dòng)篩選功能，HILIC方法實(shí)現(xiàn)了提高兩個(gè)蛋白峰的分離度目標(biāo)，陽離子交換方法實(shí)現(xiàn)了分離峰的數(shù)量和分離度的提高目標(biāo)。在Empower3中處理好的結(jié)果導(dǎo)入到Fusion，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)和建模分析，得到了各個(gè)參數(shù)的操作空間(MODR)。使用Fusion QbD做方法開發(fā)節(jié)約的人工，大約為2.5個(gè)人工(FTE)一個(gè)月的工作時(shí)間。

你是否曾在實(shí)驗(yàn)室和瓶皿做“斗爭(zhēng)”？每次需要清洗瓶子時(shí)，都要花費(fèi)很長時(shí)間和精力，卻得不到理想的效果。別著急，今天我們?yōu)榇蠹医榻B一款實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)，無需費(fèi)盡心思，即可輕松解決實(shí)驗(yàn)室中的瓶子清洗難題。

首先，清洗程序，在日常生活中，你可以直接快速操作對(duì)應(yīng)的按鍵，輕松完成清洗任務(wù)。

擁有完善的清洗系統(tǒng)的洗瓶機(jī)必須擁有恰當(dāng)?shù)那逑闯绦?。喜瓶者洗瓶機(jī)內(nèi)置了35個(gè)清洗程序，通過編輯，可自定義出100個(gè)個(gè)性化清洗程序?？勺杂删庉嫞逑闯绦虿辉倬窒抻趥鹘y(tǒng)的，你可以根據(jù)自己的需求進(jìn)行修改，可對(duì)水量、溫度、清洗劑、清洗時(shí)間等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。讓清洗更加輕松。

微電腦智能控制，喜瓶者洗瓶機(jī)操作鍵面采用OLED顯示屏， 不銹鋼金屬按鍵，即使?jié)袷只蛘叽魇痔滓材苷２僮?，并配?個(gè)快捷清洗程序，可將清洗程序快捷至abc三個(gè)快捷鍵中，使用更加便捷，系統(tǒng)支持中/俄/英三種語言，可任意切換。

清洗籃架：模組模塊化籃架，即每層可放置任意兩個(gè)模塊，隨意組合，籃架與內(nèi)腔皆采用316L不銹鋼材質(zhì)，可確保無析出，不生銹。

為了更好地管理實(shí)驗(yàn)室的工作效率，提升了工作質(zhì)量。大家不妨考慮一下，是否需要一個(gè)專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)，為自己和同事節(jié)省時(shí)間和精力。

轉(zhuǎn)載自：http://www.hzxpz.com/

痕量分析用于測(cè)定痕量元素在試樣中的總濃度，和用探針技術(shù)測(cè)定痕量元素在試樣中或試樣表面的分布狀況，主要用于測(cè)定Pb、As、Hg、Cd、Cr、Ni等痕量元素，常用方法有化學(xué)光譜法、中子活化分析法、質(zhì)譜法、分光光度法、原子吸收光譜法、極譜法等多種方法。主要應(yīng)用于化學(xué)、材料科學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)、表面科學(xué)等領(lǐng)域。

潔凈的樣品反應(yīng)容器是獲得正確分析結(jié)果的前提。痕量分析所使用的微波消解罐、超級(jí)微波消解管、常壓消解罐、玻璃器皿（試管、燒杯、容量瓶等）等的痕量清洗，對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員來說，始終是一個(gè)非常繁瑣而又非常重要的挑戰(zhàn)。而酸蒸清洗很好地解決了這個(gè)問題。

酸蒸超凈清洗是一種自動(dòng)、密閉、酸蒸汽清洗方法。通過內(nèi)置可控溫加熱系統(tǒng)，利用酸蒸汽安全高效地對(duì)所有可溶于酸中的任何痕量金屬污染物進(jìn)行超凈清洗，并將其留在液體酸中，絕不會(huì)接觸正在清洗的反應(yīng)容器。

傳統(tǒng)的清洗方式酸缸浸泡，有極大的弊端

1、效率低 效果差，常常要浸泡24小時(shí)以上，需多買一套消解管周轉(zhuǎn)，成本極高；

2、酸缸存放困難，大量酸氣滲出，污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境；

3、 為避免交叉污染，需定期換酸，酸消耗量大，且危險(xiǎn)；

4、酸泡之后，還需手工沖洗和干燥，繁瑣且二次污染。

之后有了微波空消的清洗方式，雖擺脫了長時(shí)間酸缸浸泡，但清洗效果一般，且也有一定缺陷。

1、每個(gè)消解管清洗需耗純酸5mL；

2、 高溫高壓條件下運(yùn)行，減少一半消解管壽命，成本極高；

3、 空消之后，還需手工沖洗和干燥，繁瑣且二次污染；

4、因臟酸始終在消解管內(nèi)循環(huán)，清洗效果有限。

然而現(xiàn)在使用全自動(dòng)酸蒸清洗機(jī)進(jìn)行清洗，逐漸被被各大實(shí)驗(yàn)室所接受：

1、效率高，一批可處理多達(dá)66個(gè)55mL消解管；

2、熱蒸汽的高效淋洗，一般只需2-5小時(shí)，AC400清洗最快只需30分鐘；

3、一批只需100-300mL酸；

4、程序控制，清洗重復(fù)性好；

5、全自動(dòng)型號(hào)還進(jìn)行超純水預(yù)清洗。以及在酸蒸清洗之后，自動(dòng)純水沖洗和熱空氣干燥，一條龍式流程。

全自動(dòng)酸蒸清洗機(jī)，解決了痕量分析中樣品反應(yīng)容器的清洗難題，為實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性于便捷性提供助力。喜瓶者，讓清洗工作更幸福！

在日常膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí)，你是否也被這些問題困擾？

操作十分復(fù)雜，一不小心就出錯(cuò)

注意事項(xiàng)多，包括如何排除噪音、提高封接成功率等等

想要借鑒該領(lǐng)域?qū)＜医?jīng)驗(yàn)，一直苦尋不到……

8月23日（周二）19：00，「大成學(xué)堂」特邀南京大學(xué)張洋潯博士做客直播間，為大家?guī)怼?b>膜片鉗技術(shù)解析與經(jīng)驗(yàn)分享”。通過本次直播課程，你可以收獲膜片鉗技術(shù)的詳細(xì)解析、多年實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)、日常操作注意事項(xiàng)等方面的專業(yè)知識(shí)，還可在線提問獲得詳細(xì)解答。 

張洋潯 博士

南京大學(xué)博士，致力于研究內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)/調(diào)質(zhì)系統(tǒng)及外源性藥物對(duì)前庭代償?shù)挠绊懠吧窠?jīng)機(jī)制，擅長應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗記錄、環(huán)路示蹤、光/化學(xué)遺傳學(xué)操控方法、光纖記錄等實(shí)驗(yàn)技術(shù)。相關(guān)研究成果發(fā)表在Journal of Neuroscience, Biomedicine & Pharmacotherapy, Neuroscience Bulletin等學(xué)術(shù)期刊。

8月23日（周二）19：00

相約直播間，輕松掌握膜片鉗技術(shù)

↑↑碼上預(yù)約，快來免費(fèi)報(bào)名

　　所謂“知己知彼，百戰(zhàn)百勝”，對(duì)樣品的前處理同樣的使用。只有選對(duì)合適的研磨儀器，才能發(fā)揮出其內(nèi)力，才能磨削出理想的研磨效果。那有關(guān)于多樣品組織研磨儀的這些奧秘，你都知道嗎？

　　多樣品組織研磨儀是應(yīng)用磨模塊中的鋼珠在慣性力的作用下而對(duì)原料產(chǎn)生的高頻沖擊和摩擦進(jìn)行的研磨粉碎，而原料磨削的速度很快，可對(duì)樣品進(jìn)行混合分散，且不會(huì)對(duì)試樣造成交叉感染的現(xiàn)象。
　　
　　該研磨設(shè)備選用高韌性的聲卡架，不易變形，工作時(shí)的特性相對(duì)穩(wěn)定，在很大程度上提高了樣品研磨的細(xì)密度。為了避免電流泄漏帶來溫升產(chǎn)生對(duì)樣品研磨過程中的影響，通常需要選擇超低溫預(yù)冷的方式進(jìn)行研磨，并應(yīng)用緩沖液作為保護(hù)。
　　
　　對(duì)于樣品的超低溫預(yù)冷，就是要先把樣品放在超低溫的自然環(huán)境中進(jìn)行一段時(shí)間的冷凍存儲(chǔ)，通常是應(yīng)用液氮或者超低溫冰箱進(jìn)行預(yù)冷處理，但液氮的預(yù)冷速度較快，選擇應(yīng)用的比較廣泛。
　　
　　對(duì)于多樣品研磨儀的樣品磨床設(shè)計(jì)一般是在磨削后的進(jìn)行的，而手工研磨的卻是只需將磨料涂在研磨板上，用手執(zhí)鑄鐵件作平行線，進(jìn)行勻速直線運(yùn)動(dòng)或“8字形”的研磨運(yùn)動(dòng)，就可將鑄鐵件調(diào)成90°-180°，避免鑄鐵件扭曲。
　　
　　在每次使用研磨機(jī)后，都需要將其研磨墊片取下進(jìn)行清洗。這樣，不僅可以避免研磨墊的破壞，還能夠?qū)x器進(jìn)行清洗維護(hù)，避免研磨液的滲入，對(duì)其造成損壞。
　　
　　綜上，液氮的超低溫預(yù)處理給我們樣品的研磨造就了一種保護(hù)的環(huán)境，不僅能夠避免電流泄漏溫度上升帶來的影響還能夠使研磨速度加快，而組織研磨儀相對(duì)穩(wěn)定的工作特性更是很我們的樣品磨削帶來了很大的幫助。

　　湖南省永逸科技有限公司，是2011年1月注冊(cè)新成立的一家磁測(cè)量設(shè)備生產(chǎn)和特殊磁場(chǎng)設(shè)計(jì)的高科技有限公司，于2016年9月遷入湖南省婁底經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)新合作國際商貿(mào)城10樓。

為了更好的使用氮?dú)獍l(fā)生器，在使用前應(yīng)當(dāng)檢查儀器的進(jìn)風(fēng)口是否有雜物堵塞，注意清理，活塞密封圈有一定的壽命，使用完畢后請(qǐng)及時(shí)關(guān)閉儀器。儀器在使用一段時(shí)間后，電解液會(huì)逐漸減少，當(dāng)電解液接近下限時(shí)應(yīng)及時(shí)補(bǔ)水，加液時(shí)不要超過上限，切勿在未接空氣源時(shí)空載運(yùn)行，否則會(huì)造成整個(gè)儀器報(bào)廢。如儀器停機(jī)一個(gè)月或一個(gè)月以上時(shí)間，請(qǐng)把電解液抽出，儀器如需搬運(yùn)時(shí)，把儲(chǔ)液桶中的電解液用吸液管吸干凈，然后蓋好上蓋，以免在運(yùn)輸中殘留的電解液外溢，將整個(gè)儀器腐蝕，造成無法修復(fù)的后果。

氮?dú)獍l(fā)生器常見的小問題如下：

1.運(yùn)行中出現(xiàn)響聲；

解決方法：用扳手對(duì)儀器上螺母適當(dāng)調(diào)整松緊度，不要太緊；若不行，需拆開儀器外殼，對(duì)內(nèi)部進(jìn)行清洗(響主要是因內(nèi)部有雜質(zhì))，若清洗完還不行，須更換新的。

2.在氮?dú)鈮毫_(dá)不到設(shè)定值時(shí)，應(yīng)首先觀察流量表，若流量顯示比平時(shí)偏大，基本上就可以斷定整個(gè)體系存在漏氣的問題；

解決方法：先關(guān)閉電源，卸下氣路，氮?dú)獬隹谛枰妹芊饴菝狈饩o，然后打開氮?dú)獍l(fā)生器電源，看壓力能否達(dá)到設(shè)定值，并看流量顯示能否達(dá)到“000”，如果流量顯示能回零，說明儀器本身不存在漏氣，之后就請(qǐng)檢查氣體輸出口以后的管路，及用氣設(shè)備是否漏氣。若流量顯示不能回零，則存在漏氣點(diǎn)，請(qǐng)用皂液檢查干燥管是否存在漏氣現(xiàn)象。

3.運(yùn)行過程中表頭顯示數(shù)字大壓力達(dá)不到設(shè)定值； 

解決方法：這是漏氣造成的，需要對(duì)氣路進(jìn)行全mian檢漏特別是干燥室及電池。

4.開機(jī)無法工作，顯示板無顯示；

解決方法：先檢查電源是否有點(diǎn)，插頭等是否插好，然后再檢查保險(xiǎn)是否完好，儀器顯示板排線插件是否插好。保險(xiǎn)位于儀器后面電線插座內(nèi)，用小“一”字改錐或尖的金屬工具向外撬即可取出，看儀器內(nèi)電路板指示燈是否亮，若不亮，檢查電路板上保險(xiǎn)是否燒掉，若燒掉須換保險(xiǎn)3A，換后仍不顯示，須換電源。

5.開機(jī)顯示“000”；

解決方法：檢查儀器后空氣輸入端是否有氣體輸入。

6.開機(jī)10分鐘后顯示數(shù)字有但不升壓，無氣體輸出；

解決方法：檢查插件是否脫落松動(dòng)，用表對(duì)插件進(jìn)行測(cè)量，若沒有220V電壓，需更換電源。

7.儀器開機(jī)時(shí)即有氣體輸出；

解決方法：在剛開機(jī)壓力上升時(shí)，需要按下延時(shí)開關(guān)。然后在輸出壓力從輸出端放出10分鐘后繼續(xù)使用。

8.輸出的氮?dú)獠患儯?/p>

解決方法：檢查電解液濃度是否過低，空氣壓力與空氣源壓力差是否過小。

一篇在線發(fā)表于《細(xì)胞》雜志的論文介紹了一項(xiàng)重要突破：來自韓國的研究團(tuán)隊(duì)***在線粒體DNA中實(shí)現(xiàn)A堿基到G堿基的轉(zhuǎn)換，為基因編輯技術(shù)填補(bǔ)上一塊***關(guān)重要的拼圖，也帶來了治愈多種線粒體遺傳病的希望。

從上世紀(jì)60年代***發(fā)現(xiàn)***性內(nèi)切酶，到1985年發(fā)明PCR技術(shù)，再到***近十年CRISPR技術(shù)誕生、用于活體生物的基因編輯，短短半個(gè)世紀(jì)，人類在一次又一次的突破中實(shí)現(xiàn)了操縱DNA能力的巨大飛躍。其中，CRISPR的出現(xiàn)更是讓科學(xué)家能高效編輯基因組中的致病突變，為眾多遺傳病提供全新的方案。

不過，還有一朵烏云長期籠罩在基因編輯領(lǐng)域的上空，這就是線粒體DNA的編輯。

作為參與能量代謝的重要細(xì)胞器，線粒體中也含有少量來自母系的DNA。如果這部分基因發(fā)生突變，則可能導(dǎo)致多種與代謝相關(guān)的遺傳疾病。

例如，Leber遺傳性視神經(jīng)病變（LHON）可能導(dǎo)致患者失明，這種兇險(xiǎn)的疾病就是由線粒體DNA的點(diǎn)突變導(dǎo)致的。線粒體DNA突變還可能導(dǎo)致某些線粒體腦肌病，患者的大腦遭受損傷，可能出現(xiàn)癲癇、精神行為異常等癥狀。平均每5000個(gè)人里，就有一個(gè)人患上線粒體點(diǎn)突變導(dǎo)致的遺傳病。

盡管基因編輯工具***近十年迎來爆發(fā)式發(fā)展，但面對(duì)線粒體遺傳病時(shí)，這些工具卻總是難以奏效。例如，當(dāng)下***為盛行的CRISPR-Cas系統(tǒng)就因?yàn)橄驅(qū)NA不能穿越線粒體膜，因而無法用于線粒體疾病。

線粒體DNA的編輯，可以說是基因編輯領(lǐng)域***后一塊未經(jīng)涉足的土地，而這個(gè)難題也成為治愈多種遺傳疾病必須跨越的障礙。

2020年，一項(xiàng)***性的突破到來。Broad研究所的劉如謙教授團(tuán)隊(duì)開發(fā)了一款名為DdCBE的基因編輯工具，可以直接修改雙鏈DNA上的堿基，實(shí)現(xiàn)從C堿基到T堿基的轉(zhuǎn)換，這也是科學(xué)家***在人體細(xì)胞中進(jìn)行線粒體DNA的編輯。

不過，作為線粒體DNA編輯的開拓性成果，DaCBE也有不足之處：其只能高效地進(jìn)行TC-TT序列的轉(zhuǎn)換，在90個(gè)已知的致病線粒體突變位點(diǎn)中，只有9個(gè)能得到修復(fù)。

而在這90個(gè)突變位點(diǎn)中，有多達(dá)39個(gè)都可以通過A-G堿基的轉(zhuǎn)換來修復(fù)。如果能找到實(shí)現(xiàn)A-G轉(zhuǎn)換的手段，那么包括上述兩種疾病在內(nèi)，多種線粒體遺傳病都有望迎來治愈的方法。

在這項(xiàng)發(fā)表于《細(xì)胞》的***新研究中，來自韓國基礎(chǔ)科學(xué)研究所基因編輯中心的研究團(tuán)隊(duì)終于完成了這項(xiàng)“不可能的任務(wù)”，他們開發(fā)出一款全新的基因編輯平臺(tái)，命名為轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物相關(guān)脫氫酶（transcription activator-like effector-linked deaminases，簡稱TALED）。

▲TALED編輯線粒體DNA的示意圖

論文***作者CHO Sung-Ik表示：“我們?cè)O(shè)計(jì)的新型堿基編輯器極大地拓展了線粒體DNA編輯的范圍，這不僅有助于構(gòu)建疾病模型，還將幫助人們開發(fā)新療法?！?/p>

TALED到底是什么？接下來我們將看到，TALED由3個(gè)功能各異的主要部分組成，它們環(huán)環(huán)相扣、共同協(xié)作，***終完成這項(xiàng)基因編輯任務(wù)。

***個(gè)部分，可以看作TALED的向?qū)?。前面說到，常見的基因編輯系統(tǒng)無法進(jìn)入線粒體。為了解決這個(gè)問題，TALED與劉如謙團(tuán)隊(duì)開發(fā)的DaCBE一樣，使用了轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物（TALE）。作為一種DNA結(jié)合蛋白，TALE蛋白能夠靶向特異的DNA序列，其在線粒體靶向序列（MTS）的引導(dǎo)下進(jìn)入線粒體，并且與特定的線粒體DNA序列結(jié)合。

到這里，TALED就被帶到了工作場(chǎng)所。在這里，輪到TALED的第二個(gè)部分登場(chǎng)。研究團(tuán)隊(duì)需要找到合適的脫氫酶，在這里實(shí)現(xiàn)A-G堿基的轉(zhuǎn)換。為此，他們選擇是名為TadA8e的腺嘌呤脫氫酶，其由大腸桿菌的腺嘌呤脫氫酶改造而來。

這個(gè)選擇頗具創(chuàng)意，因?yàn)門adA8e被認(rèn)為是一種專門對(duì)單鏈DNA起作用的蛋白，但在這里，它需要在線粒體的雙鏈DNA中進(jìn)行堿基編輯。

這篇論文的通訊作者，基因編輯中心主任KIM Jin-Soo教授說：“沒有人想過用TadA8e在線粒體中進(jìn)行堿基編輯，因?yàn)樗徽J(rèn)為只對(duì)單鏈DNA起作用。正是這個(gè)跳出傳統(tǒng)框架的想法，幫助我們發(fā)明了TALED。”

而幫助TadA8e做到這一點(diǎn)的，是TALED的***后一個(gè)主要部分：胞嘧啶脫氫酶DddAtox。DddAtox使得雙鏈DNA可以短暫地解開，而TadA8e正是抓住了這個(gè)轉(zhuǎn)瞬即逝的時(shí)間窗口，在人類細(xì)胞的線粒體中高效催化A-G堿基的轉(zhuǎn)換，編輯頻率可高達(dá)49%。

▲TALED實(shí)現(xiàn)了A-G堿基的轉(zhuǎn)換

通過對(duì)TALED的調(diào)整，研究團(tuán)隊(duì)分別開發(fā)出能同時(shí)實(shí)現(xiàn)A-G以及C-T堿基轉(zhuǎn)換的技術(shù)，以及僅進(jìn)行A-G轉(zhuǎn)換的技術(shù)。

當(dāng)然，作為一項(xiàng)開創(chuàng)性的技術(shù)，TALED仍有不***之處，例如在進(jìn)行堿基編輯時(shí)，可能會(huì)造成與目標(biāo)位點(diǎn)相鄰的核苷酸也發(fā)生轉(zhuǎn)換；此外，TALED是否會(huì)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生脫靶效應(yīng)也有待觀察。

但毫無疑問，TALED技術(shù)的出現(xiàn)讓我們又多了一種***潛力的基因編輯工具，展望這項(xiàng)技術(shù)的未來應(yīng)用場(chǎng)景，研究團(tuán)隊(duì)希望能提升TALED的編輯效率與特異性，***終能夠分別在胚胎、新生兒與成年患者體內(nèi)修正致病的線粒體突變。我們期待，那些受困于線粒體遺傳病的人們終將迎來治愈的一刻。

RNA提取磁珠屬于納米生物磁珠的一種，主要作用是用于核酸提取過程中的RNA提取，粒徑分布在500nm左右，是洛陽吉恩特生物自主研發(fā)生產(chǎn)的高分子納米磁性微球，該磁珠懸浮時(shí)間長，磁響應(yīng)時(shí)間迅速，對(duì)DNA甲基化過程中的提取環(huán)節(jié)提供良好的支持，可明顯縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率，并在提取結(jié)果上保持穩(wěn)定，配合核酸提取儀，更能實(shí)現(xiàn)快速的RNA提取。

分析與表征：新型聚合物遞送載體有望解決后眼部給藥的遞送難題

Intravitreal Polymeric Nanocarriers with Long Ocular Retention and Targeted Delivery to the Retina and Optic Nerve Head Region

視網(wǎng)膜等后眼部組織在許多嚴(yán)重的眼部疾病中會(huì)受到影響，由于眼部結(jié)構(gòu)是非常復(fù)雜的，所以是否可以成功地將治 療藥物遞送至視網(wǎng)膜等后眼部組織具有極大的挑戰(zhàn)性，其中玻璃體腔內(nèi)注射法是常用方式之一，但該方式需要延長注射的間隔時(shí)間。研究人員使用聚乙二醇、聚己內(nèi)酯和碳酸三亞甲基酯合成三嵌段共聚物，并使用1H-NMR和凝膠滲透色譜法GPC對(duì)聚合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。研究表明：該聚合物可自組裝成聚合物泡囊和聚合物膠束。通過動(dòng)態(tài)光散射DLS對(duì)其尺寸進(jìn)行表征，平均直徑分別約為100nm和30–50nm?；趩晤w粒追蹤和非對(duì)稱流場(chǎng)分離技術(shù)，聚合物膠束和聚合物泡囊在玻璃體中可擴(kuò)散且穩(wěn)定存在。在Alamar Blue測(cè)定中，這些材料在人工培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中均未顯示細(xì)胞毒性，使用體內(nèi)熒光光度法評(píng)估玻璃體內(nèi)納米載體在兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，聚合物泡囊（100nm）和膠束（30nm）的半衰期分別為11.4-32.7天和4.3-9.5天，聚合物泡囊和聚合物膠束的玻璃體內(nèi)清除值分別為1.7–8.7μL/h和3.6–5.4μL/h。顆粒在兔玻璃體中的表觀體積分布對(duì)于聚合物膠束為0.6-1.3ml，對(duì)于聚合物泡囊為1.9-3.4ml。給藥至少92天后仍可在玻璃體中發(fā)現(xiàn)聚合物泡囊，此外，眼底成像顯示，聚合物泡囊聚集在視神經(jīng)附近，并且在注射后111天仍然存留在那里。因此聚合物泡囊用于后眼部進(jìn)行可控和特定位點(diǎn)的藥物遞送是一種十分具有發(fā)展前景的技術(shù)。