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酶標板如何處理,增加抗體結合能力?

阿超7890 2013-10-23 10:02:58 318  瀏覽
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全部評論(1條)

  • 卟簡灬單 2013-10-24 00:00:00
    根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同可以將酶標板分為以下幾類: 1 高結合力酶標板:酶標板經(jīng)表面處理后蛋白結合能力大大增強,可達300~400ng IgG/cm2,主要結合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標板可提高敏感性,并可相對減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應。抗原或抗體包被后,以非離子去污劑無法有效地封閉未結合蛋白的部位,需使用蛋白作為封閉劑。 2、中結合力酶標板:酶標板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結合,適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體,其蛋白結合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標板所具有的僅與大分子結合的特性,適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體,可降低潛在的非特異叉反應。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。 3、氨基化酶標板:酶標板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值,其表面可通過離子鍵與帶負電荷的小分子結合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結合的能力,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,一部分蛋白分子無法結合;此外,其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性,使用的封閉液必須能夠與非反應性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。

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低場核磁評價如何增加結合膠含量

低場核磁評價如何增加結合膠含量

什么是結合膠?

在混煉過程中,橡膠大分子會與活性填料(如炭黑粒子)的表面產(chǎn)生化學和物理的牢固結合,使一部分橡膠結合在炭黑粒子的表面,成為不能溶解于有機溶劑的橡膠,叫結合膠。

結合膠的生成有助于炭黑附聚體在混煉過程中發(fā)生破碎和分散均勻,但在混煉過程的初期,即炭黑-橡膠團塊破碎和分散以前,過早地生成過多的結合像膠,由于它包覆在炭黑附聚體外面形成了硬度較大的硬膜,反而會使這種高濃度炭黑-橡膠團塊難于進一步破碎和分散。所以對于不飽和度高的二烯類橡膠,尤其是天然橡膠,混煉過程初期應嚴格控制混煉條件,盡量避免混煉溫度過分升高,以使炭黑與橡膠之間只發(fā)生有限的結合。

影響結合膠含量的因素

結合膠是由于炭黑表面對橡膠的吸附產(chǎn)生的,所以任何影響這種吸附的因素均會影響結合膠的生成量,其主要影響因素如下。

1.炭黑比表面積對結合膠含量的影響

結合膠幾乎與炭黑的比表面積成正比增加。隨著炭黑比表面積的增大,吸附表面積增大,吸附 量增加,即結合橡膠增加。

2.混煉薄通次數(shù)對結合膠含量的影響

天然橡膠是一種很容易產(chǎn)生氧化降解的物質,那些只有一兩點吸附的大分子鏈的自由鏈部分可 能存在于玻璃態(tài)層及亞玻璃態(tài)層外面。這部分橡膠分子鏈薄通時同樣會產(chǎn)生力學斷鏈及氧化斷鏈。這種斷鏈可能切斷了與吸附點的連接,這樣就會使結合膠量下降。

3.溫度對結合膠含量的影響

將混煉好的式樣放在不同溫度下保持一定時間后測結合膠量?;鞜挏囟葘Y合膠的影響卻是混煉溫度越高則結合膠越少。這可能是因為溫度升高,橡膠變得柔軟而不易被機械力破壞斷鏈形成大分子自由基,炭黑在這樣柔軟的橡膠環(huán)境中也不易產(chǎn)生斷鏈形成自由基,因此在高溫煉膠時由于這種作用形成的結合膠會比低溫下煉膠的少。

4.橡膠性質對結合膠含量的影響

結合膠量與橡膠的不飽和度和分子量有關,不飽和度高,分子量大的橡膠,生成的結合膠多。

5.停放時間對結合膠含量的影響

試驗表明,混煉后隨停放時間增加,結合膠量增加,大約一周后趨于平衡。因為固體炭黑對固體橡膠大分子的吸附不象固體填料對氣體或小分子吸附那么容易。另外化學吸附部分較慢,也需要一定時間。

結合膠含量

硫化橡膠結合膠含量的測定一直都是行業(yè)難題,傳統(tǒng)的化學法測試精度低、受人為主觀因素較大。在核磁法中,由于硫化橡膠弛豫衰減曲線隨樣品內部組分狀態(tài)的改變而改變,通過核磁弛豫技術可快速無損獲得結合膠含量。

低場核磁評價結合膠含量的基本原理:

硫化橡膠弛豫衰減曲線隨樣品內部組分狀態(tài)的改變而改變。核磁法利用彈性體材料內不同的組分其弛豫時間不同這一原理,實現(xiàn)結合膠含量測試的目的。

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