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- jmbmbmbmbm 2015-11-17 00:00:00
- 為保證分離核酸的完整性及純度，應(yīng)盡量簡化操作步驟，縮短操作時間，以減少各種不利因素對核酸的破壞，在實驗過程中，應(yīng)注意以下條件及要求：①減少化學(xué)因 素對核酸的降避免過堿、過酸對核酸鏈中磷酸二酯鍵的破壞，操作多在pH4~10條件下進(jìn)行；②減少物理因素對核酸的降強(qiáng)烈振蕩、攪拌，細(xì)胞突置于 低滲液中，細(xì)胞裂解，反復(fù)凍貯等造成的機(jī)械剪切力以及高溫煮沸等條件都能明顯破壞大分子量的線性DNA分子，對于分子量小的環(huán)狀質(zhì)粒DNA及RNA分子， 威脅相對小一些；③防止核酸的生物降細(xì)胞內(nèi)、外各種核酸酶作用于磷酸二酯鍵，直接破壞核酸的一級結(jié)構(gòu)；DNA酶需要Mg2+、Ca2+的激 活，因此實驗中常利用金屬二價離子螯合劑EDTA，檸檬酸鹽，可基本YZDNA酶的活性，而RNA酶，不但分布廣泛，極易污染，而且耐高溫、耐酸堿，不 易失活，所以生物降解是RNA提取過程的主要危害因素.進(jìn)行核酸分離時Z好新鮮生物組織或細(xì)胞樣品，若不能馬上進(jìn)行提取，應(yīng)將材料貯存于液氮中或-70℃ 冰箱中.
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