草甘膦是一種非選擇性、無殘留滅生性除草劑，對多年生根雜草非常有效，廣泛用于橡膠、桑、茶、果園及甘蔗地。草甘膦的使用量逐年增加，給農(nóng)作物、人類健康以及生態(tài)環(huán)境帶來了一定的安全隱患。目前常用草甘膦及其代謝物的檢測方法通常存在操作時間長、需要衍生等問題。

方法優(yōu)勢

　　迪馬科技在參考各種標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立了水果中草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸的測定SPE-UPLC-MS/MS法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取專用柱凈化樣品，收集流出液，Dikma Polyamino HILIC色譜柱分離檢測，該方法特點：

       1) 前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；

       2) 有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；

       3) 儀器分析簡單，樣品無需衍生直接分析，可提高結(jié)果穩(wěn)定性及減少實驗成本；

       4) 方法定量限0.05 mg/kg。

       以下為詳細(xì)解決方案，敬請參考！

水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法

01 適用范圍

       本方法適用于蘋果和橘子中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測，定量限0.05 mg/kg。

02 標(biāo)準(zhǔn)品配制

       單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品，用水配制成1000 μg/mL的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

       混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別吸取各單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用水配制成1.0 μg/mL和10 μg/mL的混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液。

03 提取

       取2 g樣品于50 mL離心管中，加入8 mL水、10 mL二氯甲烷，振蕩10 min，超聲10 min，8000 rpm離心5 min，取全部上清液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻，取5 mL，待凈化。

04 凈化

       ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938）

       1.活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，棄去流出液；

       2.上樣：將待凈化液加入柱中，棄去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混勻，濾液過0.22 μm尼龍濾膜，上機分析。

       注：同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

05 UPLC-MS/MS條件

5.1 UPLC條件

       色譜柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)

       流速：0.2 mL/min      

       進(jìn)樣量：10 μL

       柱  溫：35 ℃

       流動相：A:乙腈 B:5 mM乙酸銨溶液，氨水調(diào)節(jié)至pH=11

       梯度設(shè)置：

5.2 質(zhì)譜條件

       電離模式：ESI

       掃描方式：負(fù)離子掃描 

       檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測    

       電噴霧電壓：-4500 V

       霧化氣壓力：60 psi       

       輔助氣壓力：60 psi

       氣簾氣壓力：35 psi       

       離子源溫度：550 ℃

       定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表：

06 添加回收結(jié)果

       水果中草甘膦和氨甲基膦酸的SPE-UPLC-MS/MS檢測添加回收結(jié)果：

草甘膦10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

草甘膦50ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

草甘膦100ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

草甘膦250 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

草甘膦500 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

草甘膦的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

R^2= 0.9990

標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度分別為: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL

氨甲基膦酸10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

氨甲基膦酸50 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

氨甲基膦酸100 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

氨甲基瞵酸250ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

氨甲基膦酸500ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品XIC圖

氨甲基膦酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

R^2= 0.9990

標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度分別為: 10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL

07 相關(guān)產(chǎn)品

       水果中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息：

普仁離子色譜儀對草甘膦中的離子成分和含量檢測具有哪些優(yōu)勢?

       草甘膦的分析和測定用到的是GX液相色譜法，而鈉離子、鉀離子、異丙胺離子等陽離子分析和測定用到的是離子色譜法。具體來講，離子色譜檢測技術(shù)可同時檢測草甘膦制劑中的鉀鹽、銨鹽、鈉鹽、異丙胺鹽，和銨鹽和異丙胺鹽等的復(fù)雜混合物。該方法簡單快速重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到對制劑定量分析的要求，能夠作為除草劑中草甘膦鹽的檢測辦法，適用于大量樣品的定性及定量分析和測定。

       草甘膦水劑GB/T 20684-2017已經(jīng)正式實施一年多的時間，取代舊國標(biāo)GB/T 20684-2006。該標(biāo)準(zhǔn)適用于由草甘膦原藥成鹽后和水及適宜的助劑組成的草甘膦鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、二甲胺鹽和異丙胺鹽水劑。

       面臨長期以來市面上草甘膦不同鹽型混雜的現(xiàn)象，青島普仁儀器專業(yè)研發(fā)的離子色譜儀能夠?qū)崿F(xiàn)對各種不同草甘膦產(chǎn)品的分析和測定。

草甘膦新國標(biāo)的修正包括：草甘膦水劑和可溶粉(粒)劑。2017版草甘膦新國標(biāo)較2006舊版國標(biāo)版Z大的變更主要在草甘膦鹽型方面進(jìn)行了修正，很明確地增加了對特定草甘膦鹽型成分的分析和測定，如下圖所示：

常見草甘膦制劑樣品譜圖如下所示：

1.草甘膦鉀鹽樣品譜圖：

2.草甘膦異丙胺鹽樣品譜圖：

普仁離子色譜儀用于某化工廠氯化鉀樣品的分析測定

案例：普仁離子色譜儀用于分析廣東某化工廠氯化鉀樣品的純度

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序號 保留時間 名稱 濃度  峰面積

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1    3.149  CL 0.06805 50410

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總計 0.06805 50410

目前，氯化鉀的純度差異較大，檢測氯化鉀純度的非常有必要。

市面上較為常見的是60%純度的工業(yè)氯化鉀，而食物級氯化鉀要求純度達(dá)到99%以上，這二者之間究竟有甚么差異?一般情況下，純度低的氯化鉀，含有的雜質(zhì)過量，無法用于食品行業(yè)，由于有些雜志對人體有害。例如：工業(yè)鍍鋅里的氯化鉀，一般都用60%純度的氯化鉀，假如用99%氯化鉀能否滿足要求呢?當(dāng)然可以，只不過使用量有差異。但是，有些精致鍍鋅工藝，必需要用高純度氯化鉀，對其純度的分析與檢測非常有必要。在農(nóng)業(yè)方面，60%濃度的也能夠用于鉀肥，但用于鉀肥之前需要提純這一步驟，這是因為低純度氯化鉀會含有對植物有害的成分，影響植物的生長發(fā)育。而高純度氯化鉀就不會有這類的情況發(fā)生。

因此，氯化鉀的純度不同，應(yīng)用領(lǐng)域也相同。青島普仁儀器專業(yè)研發(fā)離子色譜儀20余年，可用于化工行業(yè)各種陰陽離子濃度或純度的檢測。（來源：青島普仁儀器有限公司）

草甘膦，又稱農(nóng)達(dá)，是一種廣譜滅生性除草劑，廣泛應(yīng)用于茶園、果園、玉米田間等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。隨著草甘膦的廣泛使用，其在茶葉、水果、玉米等植物源食品中殘留量的檢測越來越受到國內(nèi)外的關(guān)注。
草甘膦（GLY）及其代謝物氨甲基膦酸（AMPA）均為小分子化合物，具有極性強、易溶于水、難溶于各種有機溶劑等特性，這給常規(guī)檢測帶來了極大的困難和挑戰(zhàn)。
中檢維康使用CLOVER草甘膦專用柱（貨號：GLY3000）對茶葉中的草甘膦及其代謝物進(jìn)行處理，使用UPLC-MS/MS測定，當(dāng)草甘膦及其代謝物加標(biāo)濃度為80 μg/kg，其回收率在70-100 %，RSD在5 %以內(nèi)，符合測定標(biāo)準(zhǔn)。

準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎的茶葉樣品1.0 g(精確至0.001g)于50mL離心管中，加100 μL 濃度為10 mg/L的1,2-C13N15草甘膦同位素內(nèi)標(biāo)溶液，加入10 mL水，渦旋混合20 min，超聲振蕩10 min，以4000 r/min離心8 min。

移取5 mL上清液至15 mL離心管中，加5 mL二氯甲烷，渦旋5 min，以4000 r/min離心4 min，取上清液2.5 mL過CLOVER?草甘膦專用柱（CLOVER?草甘膦專用柱使用前應(yīng)依次用3 mL甲醇，3 mL水活化），棄去前端幾滴濾液，收集后續(xù)濾液。

取上述濾液1mL衍生，依次加入1.0 mL 50g/L硼酸鈉溶液，0.5 mL 10 g/L FMOC-Cl，渦旋混合2 min，40 ℃水浴衍生1 h，渦旋1 min，再以8000 r/min離心3 min，上清液過0.22 μm濾膜，上機檢測。

       草甘膦(Glyphosate，Gly)是廣泛使用的一類廣譜非選擇性除草劑，其在環(huán)境和生物體中富集并通過食品進(jìn)入人體，會對人體健康造成危害。隨著其在茶葉上的廣泛使用，草甘膦及其主要代謝產(chǎn)物氨甲基膦酸殘留問題也越來越受關(guān)注。

　　目前常用的檢測方法為離子交換凈化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后GC-MS檢測，或9-芴基甲基三氯甲 烷衍生后LC-MS/MS檢測，這些方法通常存在操作時間長、需要衍生等問題，因此建立一種簡便、快捷、有效的草甘膦及其代謝物殘留的檢測方法具有重要的意義。

       迪馬科技在參考各種標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法測定茶葉中草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸的檢測方法：采用水提取，ProElut GLY固相萃取專用柱凈化樣品，收集流出液，Dikma  色譜柱分離檢測，該方法特點：

1)     前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；

2)     有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；

3)     儀器分析簡單，樣品無需衍生直接分析，可提高結(jié)果穩(wěn)定性及減少實驗成本；

4)     方法定量限0.1 mg/kg。

以下為詳細(xì)解決方案，敬請參考！

茶葉中草甘膦及其代謝物的測定

——SPE-UPLC-MS/MS法

1、適用范圍

        本方法適用于綠茶、花茶、鐵觀音、紅茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測，定量限0.1mg/kg。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

       單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品，用水配制成1000 μg/mL的單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

       混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別吸取各單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混標(biāo)標(biāo) 準(zhǔn)中間液。

3、提取

       取1 g茶葉于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振蕩10 min，超聲10 min，8000 rpm離心5 min，取5 mL上清液，待凈化。

4、凈化

       SPE柱： ProElut GLY 6 mL (Cat.#: 65938)

       (1)活  化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，棄去流出液；

       (2)上  樣：將待凈化液加入柱中，棄去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混勻，濾液過0.22 μm尼龍濾膜，上機分析。

注：同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5、色譜條件

       UPLC-MS/MS條件：

       5.1 UPLC 條件

       色譜柱：Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#：99302)

       流  速：0.2 mL/min   進(jìn)樣量：10 μL   柱  溫：35 ℃

       流動相： A：乙腈   B：5 mM乙酸銨溶液，氨水調(diào)節(jié)至pH=11

       梯度設(shè)置：

5.2 質(zhì)譜條件

       定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表

6、添加回收結(jié)果及色譜圖

       茶葉中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS檢測添加回收結(jié)果：

7、相關(guān)產(chǎn)品信息

       茶葉中草甘膦及其代謝物的測定SPE-UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息：

草甘膦一直是存在爭議的一種高效農(nóng)藥，而它引起的一系列問題隨著使用量增加而暴露出來。不能否定草甘膦作為農(nóng)藥的優(yōu)勢，但是也不可否定近年來引發(fā)的各種問題。

對于草甘膦引起的問題應(yīng)該不僅關(guān)注草甘膦本身的毒性大小，更應(yīng)該將其毒性與環(huán)境等外在因素的影響結(jié)合起來。針對草甘膦的問題還需要進(jìn)一步去研究，今后草甘膦研究也將成為研究領(lǐng)域的一個重點，讓更多的人分享科研成果，盡量避免因科技研究對人類造成傷害。

普瑞邦光電衍生系統(tǒng)MDS檢測項目：氨基甲酸酯類農(nóng)藥及殘留、甘油磷酸酯類物質(zhì)、黃曲霉毒素含量、氨基酸、牛磺酸、化妝品中游離甲醛、草甘膦除草劑、甲殼類和貝類毒素、伏馬毒素含量等。根據(jù)不同需求客戶產(chǎn)品分為以下幾類，簡約式MDS-2000，化學(xué)衍生和光衍生一體的MDS-3100，普瑞邦的化學(xué)衍生儀器MDS-3000。產(chǎn)品適用性方面，MDS可以搭配市面上主流液相設(shè)備，包括Waters、賽默飛、安捷倫和島津等。

我們采用普瑞邦光電衍生系統(tǒng)MDS 3100多功能光電衍生系統(tǒng)配合液相及熒光檢測器，依據(jù) 《GB/T 5750.9-2006 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 農(nóng)藥指標(biāo)》進(jìn)行草甘膦檢測實驗，實驗條件如下： 

? 色譜柱：陰離子交換樹脂柱 250mm×4.6mm

? 衍生試劑：鄰苯二甲醛、四硼酸鈉、2-巰基乙醇、氫氧化鈉、次氯酸鈉（普瑞邦草甘膦衍生試劑包PriboFast?YS-GP-001）

? 陰離子交換流動相流速：0.5mL/min

? 柱后衍生氧化劑流速：0.5mL/min

? 衍生 OPA 溶液流速 ：0.3mL/min

? 衍生溫度：室溫

? 流動相：按照 GB/T 5750.9-2006 進(jìn)行配制

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)配制 0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行檢測。

圖2：0.05μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較低，符合要求。

圖3：標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)處理圖

產(chǎn)品速遞

普瑞邦提供多功能光電衍生系列產(chǎn)品，詳情信息如下：