工程細(xì)胞株開發(fā)（Cell Line Development: CLD）的主要目的是通過高通量篩選手段獲得數(shù)個高產(chǎn)穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，為后續(xù)的工藝開發(fā)及優(yōu)化提供基礎(chǔ)。能否構(gòu)建適合于生產(chǎn)的高表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株，將直接影響后期重組蛋白或單克隆蛋白等藥物的開發(fā)效率和生產(chǎn)成本。

細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞株開發(fā)的基礎(chǔ)，無論是細(xì)胞轉(zhuǎn)染、高通量克隆篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化、還是抗體表達(dá)，都需要在細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上完成細(xì)胞生長狀態(tài)的檢測，其中包括活細(xì)胞密度（VCD）和活率（Viability）檢測。通過檢測結(jié)果將細(xì)胞密度和活率達(dá)不到要求的細(xì)胞排除掉。最 終，從數(shù)以千計的克隆細(xì)胞中篩選到穩(wěn)定高產(chǎn)的單克隆細(xì)胞株。

由于要篩選的克隆細(xì)胞量很大，對所培養(yǎng)的細(xì)胞生長狀態(tài)的檢測，通常需要使用高通量分析設(shè)備，有時甚至結(jié)合移液工作站來完成自動化檢測。譬如，使用96孔板檢測細(xì)胞密度和活率，同時根據(jù)需要可整合自動化移液工作站，從而大大提高篩選分析通量，并實現(xiàn)測試的標(biāo)準(zhǔn)化，減少人為操作誤差，最 終使我們能在有限的平臺基礎(chǔ)上實現(xiàn)高產(chǎn)細(xì)胞株的篩選。

貝克曼庫爾特生命科學(xué)的Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀就是這樣一款滿足高通量上樣、全自動檢測，并可與自動化移液工作站整合的分析儀器。它具有以下一些優(yōu)點滿足細(xì)胞株開發(fā)過程中對克隆細(xì)胞的VCD和Viability準(zhǔn)確和快速地檢測。

96孔板上樣檢測

Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)儀除了可以使用24位轉(zhuǎn)盤做不間斷檢測外，同時可以采用96孔板進(jìn)行高通量樣品分析測試（如下圖所示），使用配套的封板膜可以減少檢測過程中樣品的揮發(fā)，防止待測樣品受到外部環(huán)境的污染，對于有生物安全的細(xì)胞樣品，也可降低對操作人員的危害風(fēng)險。

Vi-CELL BLU 96孔板檢測照片

和移液工作站整合

為了解決那些重復(fù)操作、通量高、易污染、需要大量人力操作的實驗步驟，如梯度稀釋、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞換液、高通量篩選、克隆挑選等步驟，從而使得上游更通暢，并保證數(shù)據(jù)的完整性，可以使用貝克曼庫爾特Biomek系列自動化移液工作站來完成這些工作。

那細(xì)胞計數(shù)和活率分析操作是否也可以整合進(jìn)來，讓自動化工作站控制完成相關(guān)檢測呢？答案是可以的。Vi-CELL BLU細(xì)胞計數(shù)儀可通過OPC UA Server和自動化移液工作站實現(xiàn)有效地整合，進(jìn)一步實現(xiàn)細(xì)胞計數(shù)和活率分析檢測的自動化目的，避免無謂的重復(fù)實驗操作。

Biomek自動化移液工作站整合Vi-CELL BLU細(xì)胞計數(shù)儀的彩頁

全自動和標(biāo)準(zhǔn)化分析

使用96孔板的高通量細(xì)胞計數(shù)和活率分析時，可以在Cell Type檢測參數(shù)表中設(shè)置染色前的吹打混懸次數(shù)（Aspiration cycles）和染色混合次數(shù)（Mixing cycles），以此讓儀器自動對沉降的細(xì)胞吹打均勻。然后，在保證細(xì)胞樣品均一性的前提下，吸取等體積臺盼藍(lán)吹打完成細(xì)胞的均勻染色。最 后，再通過Cell Type中的細(xì)胞識別參數(shù)，對拍攝得到的細(xì)胞進(jìn)行有效地識別分析。檢測結(jié)束后儀器自動對管路清洗，接著儀器自動對下一個樣品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化分析。

Cell Type參數(shù)表

單個樣品的百圖分析

每個細(xì)胞樣品按默認(rèn)Cell Type方法檢測可以得到100張細(xì)胞照片，相比于其他細(xì)胞計數(shù)儀的拍攝1張、3張或6張照片，同一樣品拍攝100張照片得到的細(xì)胞數(shù)更多，因而該細(xì)胞計數(shù)方法的系統(tǒng)偏差更小，測試結(jié)果的代表性更好。

CHO細(xì)胞第59張照片（共100張）

同一焦平面下的細(xì)胞直徑檢測

細(xì)胞培養(yǎng)過程中平均直徑的監(jiān)測通常會被忽略，同時這也是一個不太容易被細(xì)胞計數(shù)儀檢測準(zhǔn)確的參數(shù)，但這個直徑參數(shù)有時影響會很大。

在細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒或質(zhì)粒后，一般細(xì)胞平均直徑會發(fā)生變化。有客戶發(fā)現(xiàn)在Fed-Batch培養(yǎng)過程中細(xì)胞平均直徑有時會過大，從而可能因為不耐受培養(yǎng)過程中的剪切力，最 終導(dǎo)致Peak-VCD相對其他細(xì)胞更低。

Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)儀通過使用聚焦質(zhì)控品完成自動對焦（如下圖所示），之后細(xì)胞樣品檢測都在同一焦平面下完成。然后通過檢測L10粒徑質(zhì)控標(biāo)樣的平均粒徑結(jié)果是否在標(biāo)稱值±10%范圍內(nèi)，以此判斷自動對焦好壞。同時，可把L10粒徑質(zhì)控品作為質(zhì)量控制標(biāo)樣，定期監(jiān)測儀器對焦?fàn)顟B(tài)是否正常，以此保證所有的細(xì)胞樣品都是在同一焦平面下檢測，提高細(xì)胞平均直徑檢測的準(zhǔn)確性。

聚焦質(zhì)控品和儀器自動對焦示意圖

同一個CHO細(xì)胞三次測試結(jié)果（考察細(xì)胞密度、活率和直徑的重復(fù)性）

若您希望更多地了解Vi-CELL BLU全自動細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀，請撥打400-821-8935和我們聯(lián)系。

*本產(chǎn)品僅供工業(yè)和科研使用，不用于臨床診斷

01

如何提高細(xì)胞計數(shù)和活率分析的準(zhǔn)確性？

姚金龍

貝克曼庫爾特高級應(yīng)用專員

講座簡介：

在各種細(xì)胞計數(shù)和活率分析方法中，臺盼藍(lán)染色細(xì)胞計數(shù)無疑是細(xì)胞活率分析的金標(biāo)準(zhǔn)。
目前，通過臺盼藍(lán)染色分析細(xì)胞活率的方法包括：傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡+血球計數(shù)板法，也有市場上很普遍的插片式半自動細(xì)胞計數(shù)儀，以及無需手動混勻和染色的全自動細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀。其中，后兩個分析儀器的出現(xiàn)，不僅很大程度地解放了人力，同時相比于顯微鏡+血球計數(shù)板法會更省時，更合規(guī)，所以被各大制藥企業(yè)所使用。而全自動細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀更是在工藝開發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)控方面表現(xiàn)出特有的優(yōu)勢，即減少了人為的樣品吹打混勻和臺盼藍(lán)染色操作誤差，而且每種細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化的測試條件，提高了儀器間數(shù)據(jù)的一致性而廣受歡迎。
但是大家在使用這些儀器一段時間后，可能會遇到這樣一些問題，譬如：自動細(xì)胞計數(shù)儀的測試結(jié)果為何有時和血球計數(shù)板的結(jié)果對不上，我該相信哪一個？細(xì)胞計數(shù)儀測試標(biāo)樣沒有問題，但一檢測細(xì)胞怎么就不行了呢？為何同樣都是CHO細(xì)胞，同事測試結(jié)果是符合預(yù)期的，我的為何就不行呢？
以上問題其實歸結(jié)一下都是我們測試結(jié)果的準(zhǔn)確性的問題，如何減小測試方法的人為誤差？如何提高我們使用的細(xì)胞計數(shù)和活率分析儀的測試結(jié)果的準(zhǔn)確性？這些問題都將在此次講座中和大家一起來探討交流。

02

高產(chǎn)穩(wěn)定CHO細(xì)胞株構(gòu)建策略

劉玉梅

上海復(fù)宏漢霖生物醫(yī)藥有限公司高級研究員

講座簡介：

探討影響穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建要素，包括載體，宿主細(xì)胞等?；谄脚_優(yōu)化篩選方式，在stable pool基礎(chǔ)上結(jié)合高通量技術(shù)進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選，分享快速開發(fā)案例，實現(xiàn)快速、高效、穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。

氮吹儀的優(yōu)點在于，一次可處理多個樣品，在多因素、多水平的重復(fù)實驗中優(yōu)勢更為明顯，實驗操作簡潔、靈活?？梢圆皇芗s束地隨時調(diào)節(jié)濃縮的進(jìn)程，實驗中不需要操作者長時間的維護(hù)，節(jié)省人力，氮吹儀在濃縮時準(zhǔn)確、靈敏可避免樣品損失。
 

氮吹用于氣相、液相及質(zhì)譜分析中的樣品制備。它采用國際認(rèn)可技術(shù)，通過將氮?dú)獯等爰訜針悠返谋砻孢M(jìn)行樣品濃縮。該方法具有省時操作方便、容易控制等特點，可很快得到預(yù)期的結(jié)果。該技術(shù)采用固相萃取前處理技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的液相萃取和層析技術(shù)，使樣品得到迅速分離、凈化。用氮吹代替常用的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，使分析時間大為縮短。
 

氮吹儀采用惰性氣體對加熱樣液進(jìn)行吹掃，使待處理樣品迅速濃縮，達(dá)到快速分離純化的效果。該方法操作簡便，尤其可以同時處理多個樣品，大大縮短了檢測時間。被廣泛應(yīng)用于農(nóng)殘檢測，制藥行業(yè)、環(huán)境監(jiān)測和通用研究中的樣品批量處理。
 

氮吹儀按照加熱方式可分為干式氮吹和水浴氮吹儀，水浴氮吹儀可分為方形水浴氮吹儀，圓形水浴氮吹儀，全自動氮吹儀。
 

全自動氮吹儀：用水來加熱，可自動補(bǔ)水，定時定濃氮吹儀，  報警功能(開蓋、濃縮完成、水浴水量或氮?dú)鈮毫Σ蛔? 整機(jī)，不用放在通風(fēng)柜里面！
 

定濃：配有專門的光學(xué)傳感器，自動、獨(dú)立地檢測終點。當(dāng)樣品吹掃到指定容量，自動停止
 

定時：設(shè)定時間，到點停止
 

定濃定時：設(shè)定時間和容量，到點停止。

玻璃器皿清洗機(jī)是通過現(xiàn)代化的洗滌方式，將不同形狀的玻璃器皿，如：培養(yǎng)皿、玻片、移液管、色譜瓶、試管、三角瓶、錐形瓶、燒杯、燒瓶、量筒、容量瓶、西林瓶、藍(lán)蓋瓶等。通過不同的籃架裝載在一個密閉的清洗空間里面，利用先進(jìn)的軟件編程技術(shù)、水處理技術(shù)、化學(xué)試劑配方、溫度感應(yīng)技術(shù)、熱風(fēng)干燥技術(shù)，自動完成預(yù)洗、清洗、中和洗、漂洗、消毒和干燥等清洗步驟。

人工清洗或者手持工具進(jìn)行刷洗或清洗，勞動強(qiáng)度大，主觀因素影響大，質(zhì)量難以做到均衡以及穩(wěn)定。玻璃器皿清洗機(jī)大大降低了操作者的感染風(fēng)險及勞動強(qiáng)度，節(jié)約了人力和時間，同時減少了對環(huán)境的生物污染。

與傳統(tǒng)的洗瓶機(jī)比較，它的耗能、耗水、占用空間等減少80%以上，同時它對環(huán)境的污染也很少，維護(hù)方便，所以運(yùn)行的費(fèi)用也很低。沖水系統(tǒng)設(shè)計有水循環(huán)和過濾裝置使沖水能循環(huán)使用,減少能耗。沖瓶噴頭的工作方式設(shè)計有一種固定式和兩種可隨動升降式供顧客選擇,沖瓶工藝合理，殘留液少。操作簡單，設(shè)有多種安全保護(hù)裝置，確保操作者及設(shè)備的使用安全。

在化學(xué)和制藥實驗室中，玻璃器皿的廣泛使用伴隨著產(chǎn)生多種潛在的污染物，這對于清洗劑和清洗方法是一個嚴(yán)重的挑戰(zhàn)。在使用中，清洗劑必須是有效的和可靠的，但同時不能留下任何殘余物。所以玻璃器皿清洗機(jī)就有了用武之地。

應(yīng)用領(lǐng)域：政府性質(zhì)的實驗室：質(zhì)檢、法醫(yī)、商檢、疾病預(yù)防控制ZX、環(huán)境監(jiān)測站、食品藥品監(jiān)督管理局等；企業(yè)性質(zhì)實驗室：食品、化妝品，生物制藥、化工、奶制品、石化等。

青島富勒姆為您推薦，FLOM全自動玻璃器皿清洗機(jī)—FL260

巧奪天工的設(shè)計：

·外部材質(zhì)，304不銹鋼；內(nèi)艙艙體、內(nèi)門開模，為316L不銹鋼，邊角做鈍化處理，無焊接點、無縫隙、無拼接點，避免漏水、雜質(zhì)沉淀及細(xì)菌的滋生。

·內(nèi)艙兩側(cè)隔層中各配一個蒸汽冷凝器，且兩側(cè)版面為316L不銹鋼材質(zhì)，避免水箱加熱產(chǎn)生的飽和水蒸氣外排污染室內(nèi)空氣，并回流到排水管道。

·艙門為ESL電控自動電子安全門鎖功能（開門停機(jī)），開門時需要暫?；蛲顺龀绦?，防止誤開門操作，避免造成蒸汽傷害。

·科學(xué)的排水設(shè)計，保證艙室潔凈無死角，避免二次污染。

（內(nèi)容源于網(wǎng)絡(luò)）