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- 淚伊冰 2011-09-20 00:00:00
- 樓主莫不是問TA克隆，常規(guī)的Taq酶，會在產(chǎn)物的3‘端額外加一個(gè)A，這時(shí)就可以利用這個(gè)A，直接連接到T載體上。所謂T載體，一般是將載體以EcoRV酶切，然后在末端加一個(gè)T，與PCR產(chǎn)物上的A互補(bǔ)配對，經(jīng)連接酶連接就可以用于轉(zhuǎn)化了。
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- bkfzuyqv2876 2011-09-20 00:00:00
- PCR利用了DNA的熱變性原理，在溫度上升到90&(代表攝氏度符號)以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈；溫度下降到50&左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合;溫度上升到72&左右，溶液中的四中脫氧核苷酸(A.T.C.G)在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。你所提到的什么情況下直接連接，是在有引物何聚合酶的情況下。
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- 顧天虹123 2011-09-20 00:00:00
- PCR擴(kuò)增產(chǎn)物兩端都有酶切位點(diǎn)的情況下，由于互補(bǔ)配對就可以直接連接。
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- xinxmv0119 2011-09-21 00:00:00
- PCR純化產(chǎn)物直接連接通常分為兩種情況， 一是TA連接，如phusion，高保真的taq，PCR后會有一個(gè)A末端，和T載體的T末端互補(bǔ)相連。 另一是平末端連接，如pfu，PCR后是平末端，可以和blunt II vector這一類的載體直接相連，但順序是隨機(jī)的，可能是正的，也可能是反的。
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