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- fsq9264543 2013-05-16 00:00:00
- 分光光度法 在分光光度計(jì)中,將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與眾不同波長相對應(yīng)的吸收強(qiáng)度。如以波長(λ)為橫坐標(biāo),吸收強(qiáng)度(A)為縱坐標(biāo),就可繪出該物質(zhì)的吸收光譜曲線。利用該曲線進(jìn)行物質(zhì)定性、定量的分析方法,稱為分光光度法,也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質(zhì)的方法,稱為紫外分光光度法;用可見光光源測定有色物質(zhì)的方法,稱為可見光光度法。它們與比色法一樣,都以Beer-Lambert定律為基礎(chǔ)。 上述的紫外光區(qū)與可見光區(qū)是常用的。但分光光度法的應(yīng)用光區(qū)包括紫外光區(qū),可見光區(qū),紅外光區(qū)。 比色法 colorimetry 以可見光作光源,比較溶液顏色深淺度以測定所含有色物質(zhì)濃度的方法。 以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ),通過比較或測量有色物質(zhì)溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。比色法作為一種定量分析的方法,開始于19世紀(jì)30~40年代。比色分析對顯色反應(yīng)的基本要求是:反應(yīng)應(yīng)具有較高的靈敏度和選擇性,反應(yīng)生成的有色化合物的組成恒定且較穩(wěn)定,它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)和控制好適宜的反應(yīng)條件,是比色分析的關(guān)鍵。 常用的比色法有兩種:目視比色法和光電比色法,兩種方法都是以朗伯-比爾定律(A=εbc)為基礎(chǔ)。常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法,即用不同量的待測物標(biāo)準(zhǔn)溶液在完全相同的一組比色管中,先按分析步驟顯色,配成顏色逐漸遞變的標(biāo)準(zhǔn)色階。試樣溶液也在完全相同條件下顯色,和標(biāo)準(zhǔn)色階作比較,目視找出色澤Z相近的那一份標(biāo)準(zhǔn),由其中所含標(biāo)準(zhǔn)溶液的量,計(jì)算確定試樣中待測組分的含量。 光電比色法是在光電比色計(jì)上測量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,將吸光度對濃度作圖,繪制工作曲線,然后根據(jù)待測組分溶液的吸光度在工作曲線上查得其濃度或含量。與目視比色法相比,光電比色法消除了主觀誤差,提高了測量準(zhǔn)確度,而且可以通過選擇濾光片來消除干擾,從而提高了選擇性。但光電比色計(jì)采用鎢燈光源和濾光片,只適用于可見光譜區(qū)和只能 得到一定波長范圍的復(fù)合光 , 而不是單色光束,還有其他一些局限,使它無論在測量的準(zhǔn)確度、靈敏度和應(yīng)用范圍上都不如紫外-可見分光光度計(jì)。20 世紀(jì)30~60年代,是比色法發(fā)展的旺盛時期,此后就逐漸為分光光度法所代替。
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