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  十幾年x 2017-07-15 00:00:00

  細(xì)胞增殖檢測(cè)方法 細(xì)胞增殖檢測(cè)通常是檢測(cè)分裂中的細(xì)胞數(shù)量或者細(xì)胞群體發(fā)生的變化。目前細(xì)胞增殖檢測(cè)主要分為五類：DNA合成檢測(cè)、代謝活性檢測(cè)、細(xì)胞數(shù)量檢測(cè)、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP 濃度檢測(cè)。在這些方法中作何選擇，主要取決于所研究的細(xì)胞類型和研究方案。 1. DNA合成檢測(cè) 這是目前實(shí)驗(yàn)室中檢測(cè)細(xì)胞增殖Z準(zhǔn)確可靠的方式。該法是將放射性標(biāo)記的3H-胸腺嘧啶與細(xì)胞一同孵育，這樣新增殖細(xì)胞的DNA中就會(huì)摻入放射性標(biāo)記，經(jīng)洗脫后可用閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)。該方法耗時(shí)長(zhǎng)，而且有個(gè)明顯的弊端就，即使用和處理放射性物質(zhì)既麻煩又不安全。不過(guò)，可以使用5-溴-2-脫氧尿苷BrdU來(lái)進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn)，因?yàn)锽rdU也同樣可以摻入到新合成的DNA中。但這樣就需要進(jìn)行額外的實(shí)驗(yàn)步驟，先孵育特異性BrdU單抗和帶標(biāo)記的二抗，然后再進(jìn)行比色法、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)或熒光信號(hào)檢測(cè)等步驟。該方法的優(yōu)點(diǎn)就是不再需要放射性物質(zhì)。BrdU標(biāo)記很適合免疫組化IHC、免疫細(xì)胞化學(xué)IC、細(xì)胞內(nèi)ELISA、流式細(xì)胞分析和高通量篩選。 2. 代謝活性檢測(cè) 檢測(cè)細(xì)胞群體的代謝活性也可以反映細(xì)胞增殖的情況。在細(xì)胞增殖過(guò)程中脫氫酶的活性會(huì)增加，因此其底物四唑鹽或Alamar Blue在代謝活躍的細(xì)胞環(huán)境中會(huì)逐漸減少，形成能夠改變培養(yǎng)基顏色的甲臜染料。可以通過(guò)低配置或高配置的分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀來(lái)讀取含染料培養(yǎng)基的吸光度，從而衡量細(xì)胞的代謝活性，檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況。 四種Z常見的四唑鹽是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶體需要溶解在DMSO或者異丙醇中。因此，MTT主要作為終點(diǎn)檢測(cè)方法。其他三種鹽與Alamar Blue一樣，都是可溶且無(wú)毒。它們可以作為連續(xù)監(jiān)控手段來(lái)跟蹤細(xì)胞增殖的動(dòng)態(tài)改變。其中XTT的效率較低，需要添加額外的因子；WST1更靈敏有效，與其他鹽相比能夠更快顯色；Alamar Blue的靈敏度也很高，只要微孔板的孔中有100個(gè)細(xì)胞就能夠檢測(cè)到。四唑鹽和Alamar Blue氧化還原染料能夠用于多種儀器和高通量研究，非常方便。它們適用的檢測(cè)儀器包括：標(biāo)準(zhǔn)分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀等。

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